CN105746358A - 栓翅卫矛组培配方和培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明的栓翅卫矛组培配方和培养方法，通过消毒外植体，得到无菌培养体系，继而利用不同种类和不同浓度的外源激素的配比，对组培苗进行继代增殖、生长和生根进行筛选、调控，最后确定最佳外植体和培养基配方，使其能适应工厂化生产。通过该组培配方和方法能够大量繁殖栓翅卫矛，满足园林绿化需求，所生产的苗木形状稳定，生产周期短，能够满足规模化快速生产。本发明能不受季节的限制，快速的增殖，繁殖系数高,能完整的继承母本的优良特性，为组培工厂化生产解决了一个难题。

Description

栓翅卫矛组培配方和培养方法
技术领域
本发明涉及植物培养技术领域，具体涉及一种栓翅卫矛组培配方和培养方法。
背景技术
栓翅卫矛是卫矛科卫矛属落叶灌木，又称鬼箭羽，高约4米，枝近四棱，硬直，有2-4个软木质翅，灰褐色，叶对生，叶长椭圆形或略呈椭圆倒披针形，花紫色，形成聚伞花序，有2-3次分枝，有花7-15朵，果蒴果4棱，倒圆心状，长7-9毫米，直径约1厘米，粉红色。生于林缘及河岸灌丛中，海拔2000米以上。其木材致密，白色而质韧，可制作弓、杖、木钉，枝可药用，中药称“鬼见榆”，有助于血液流通，具有消肿之功效，园林中可作为观叶观果灌木。
目前，栓翅卫矛常用的繁殖方法为种子繁殖、扦插育苗，受季节的限制，繁殖系数低。
发明内容
针对上述现有技术，本发明要解决的技术问题在于提供一种栓翅卫矛组培配方和培养方法，通过消毒外植体，得到无菌培养体系，继而利用不同种类和不同浓度的外源激素的配比，对组培苗进行继代增殖、生长和生根进行筛选、调控，最后确定最佳外植体和培养基配方，使其能适应工厂化生产。
为此，本发明提供了一种栓翅卫矛组培配方，其特征在于，包括：
初代培养基：MS+6-BA1.0mg/L+KT1.0mg/L+NAA0.2mg/L；
继代增殖培养基：MS+6-BA4.0mg/L+KT1.0mg/L+NAA0.5mg/L；
生根培养基：1/2MS+NAA1.0mg/L；
上述培养基均添加2.5％质量百分比蔗糖和0.65％质量百分比琼脂粉，pH值5.85。
优选的，所述MS培养基为：工作液浓度单位为mg/L，其中包含：
大量元素：NH4NO31650、KNO31900、CaCl2·2H2O440、MgSO4·7H2O370、KH2PO4170；
微量元素：KI0.83、H3BO36.2、MnSO4·H2O21.4、ZnSO4·7H2O8.6、Na2MnO4·2H2O0.25、CuSO4·5H2O0.025、CoCl2·6H2O0.025；
铁盐：Na2·EDTA37.3、FeSO4·7H2O27.8；
有机物：烟酸0.5、盐酸吡哆素0.5、盐酸硫胺素0.1、肌醇100、甘氨酸2。
优选的，所述培养基需要经过高压灭菌锅消毒25min，高压灭菌锅工作温度120℃，压强115kPa。
所述6-BA为6-苄基嘌呤，所述KT为激动素，所述NAA为奈乙酸。
本发明还提供了一种栓翅卫矛培养方法，包括以下几个步骤：
(1)选择外植体，用肥皂水清洗后在接种室超净工作台用75％体积百分比酒精消毒1min，接着用无菌水冲洗2遍，再用0.1％质量百分比升汞消毒12min，用无菌水冲洗3遍，最后用消毒过的滤纸吸干外面的水分；
(2)将消毒好的外植体接种到初代培养基上，培养得到无菌的幼苗；
(3)将得到无菌的幼苗接种到继代增殖培养基上，培养得到分化苗；
(4)将得到的分化苗接种到生根培养基上，培养得到生根苗；
(5)炼苗，把得到的生根组培苗在炼苗室中不开盖炼苗7天，然后移栽到珍珠岩：土壤＝1：3的基质中，得到成品；
所述培养基为：
初代培养基：MS+6-BA1.0mg/L+KT1.0mg/L+NAA0.2mg/L；
继代增殖培养基：MS+6-BA4.0mg/L+KT1.0mg/L+NAA0.5mg/L；
生根培养基：1/2MS+NAA1.0mg/L；
上述培养基均添加2.5％质量百分比蔗糖和0.65％质量百分比琼脂粉，pH值5.85。
优选的，所述MS培养基为：
工作液浓度单位为mg/L，其中包含：
大量元素：NH4NO31650、KNO31900、CaCl2·2H2O440、MgSO4·7H2O370、KH2PO4170；
微量元素：KI0.83、H3BO36.2、MnSO4·H2O21.4、ZnSO4·7H2O8.6、Na2MnO4·2H2O0.25、CuSO4·5H2O0.025、CoCl2·6H2O0.025；
铁盐：Na2·EDTA37.3、FeSO4·7H2O27.8；
有机物：烟酸0.5、盐酸吡哆素0.5、盐酸硫胺素0.1、肌醇100、甘氨酸2。
优选的，所述步骤(1)选择的外植体为当年新生芽。
优选的，所述步骤(2)至(4)选用的培养室条件为：培养温度25℃，光照强度1200勒克斯，光照时间12h/d。
本发明的栓翅卫矛组培配方和培养方法，通过消毒外植体，得到无菌培养体系，继而利用不同种类和不同浓度的外源激素的配比，对组培苗进行继代增殖、生长和生根进行筛选、调控，最后确定最佳外植体和培养基配方，使其能适应工厂化生产。通过该组培配方和方法能够大量繁殖栓翅卫矛，满足园林绿化需求，所生产的苗木形状稳定，生产周期短，能够满足规模化快速生产。本发明能不受季节的限制，快速的增殖，繁殖系数高,能完整的继承母本的优良特性，为组培工厂化生产解决了一个难题。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明：
1、栓翅卫矛培养基配方的配制
1.1培养基母液的配制和保存
MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的整数倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。
母液ⅠNH4NO333g/L、KNO338g/L、MgSO4·7H2O7.4g/L、KH2PO43.4g/L，母液ⅡCaCl2·2H2O8.8g/L，母液ⅢH3BO3620mg/L、MnSO4·H2O2140mg/L、ZnSO4·7H2O860mg/L、KI83mg/L，母液ⅣNa2MnO4·2H2O250mg/L、CuSO4·5H2O25mg/L、CoCl2·6H2O25mg/L，母液ⅤNa2·EDTA3.73g/L、FeSO4·7H2O2.78g/L，母液Ⅵ肌醇10g/L、甘氨酸0.2g/L，母液Ⅶ烟酸0.5g/L、盐酸吡哆素(VB6)0.5g/L、盐酸硫胺素(VB1)0.1g/L，溶液①NAA1000mg/L，溶液②KT1000mg/L，溶液③升汞1g/L，溶液④6-BA1000mg/L，溶液⑤NaOH0.5mol/L，溶液⑥HCl0.5mol/L。
配制母液Ⅰ、母液Ⅱ、母液Ⅲ、母液Ⅳ、母液Ⅴ、母液Ⅵ、母液Ⅶ、溶液①、溶液②、溶液③、溶液④，溶液⑤，溶液⑥各1L。
母液Ⅰ和母液Ⅱ为20倍浓缩液，母液Ⅲ、母液Ⅴ和母液Ⅵ为100倍浓缩液，母液Ⅳ和母液Ⅶ为1000倍浓缩液，保存在冰箱的冷藏室中。
1.2配制1L栓翅卫矛初代培养基配方需要母液Ⅰ和母液Ⅱ50ml，母液Ⅲ、母液Ⅴ和母液Ⅵ10ml，母液Ⅳ和母液Ⅶ1ml，溶液①0.2ml，溶液②1ml，溶液④1ml，蔗糖25g，琼脂粉6.5g。
1.3配制1L栓翅卫矛继代增殖培养基配方需要母液Ⅰ和母液Ⅱ50ml，母液Ⅲ、母液Ⅴ和母液Ⅵ10ml，母液Ⅳ和母液Ⅶ1ml，溶液①0.2ml，溶液②1ml，溶液④4ml，蔗糖25g，琼脂粉6.5g。
1.4配制1L栓翅卫矛生根培养基配方需要母液Ⅰ和母液Ⅱ25ml，母液Ⅲ、母液Ⅴ和母液Ⅵ10ml，母液Ⅳ和母液Ⅶ1ml，溶液①1ml，蔗糖25g，琼脂粉6.5g。
1.5用溶液⑤或溶液⑥将pH值调到5.85。
1.6然后把1L栓翅卫矛培养基配方分装到培养瓶中，每瓶50ml。
1.7把装有栓翅卫矛培养基配方的培养瓶放到高压灭菌锅中，消毒25min，高压灭菌锅工作温度120℃，压强115kPa。
1.8把灭菌好的栓翅卫矛培养基放置接种室，冷却凝固。
2、外植体的处理，选择栓翅卫矛当年生的芽作为外植体，以下都称呼外植体，用肥皂水清外植体，晾干备用。
3、外植体接种到栓翅卫矛初代培养基上，外植体接种步骤都在接种室的超净工作台上操作。
3.1外植体首先用75％体积百分比酒精消毒1min，用无菌水清洗2遍。
3.2外植体再用0.1％质量百分比升汞溶液消毒12min，用无菌水清洗3遍。
3.3用消毒过的滤纸吸干外植体表面的水分。
3.4用消毒过的镊子把外植体接种到萌发培养基上。
3.5每瓶培养基接种3个外植体。
4、外植体的培养，把接种外植体的培养基放置到培养室培养1.5个月，可以得到长度约5cm的无菌苗培养室温度25℃，光照强度1200勒克斯，每天光照时间12h。
5、继代接种和培养，在接种室超净工作台上取生长良好无菌苗，然后接种到栓翅卫矛继代增殖培养基上，每瓶接种4个，把接种好的栓翅卫矛继代增殖培养基放置到培养室培养2个月。培养室温度25℃，光照强度1200勒克斯，每天光照时间12h。
6、生根接种和培养，在接种室超净工作台上，把继代增殖培养基中分化苗接种到生根培养基上，每瓶接种5株，把接种好的栓翅卫矛生根培养基放置到培养室培养2.5个月。培养室温度25℃，光照强度1200勒克斯，每天光照时间12h。
7、经过生根培养后，成为生根苗，经过7天开盖炼苗，然后移栽到珍珠岩：土壤＝1：3的基质中，得到成品。
上述对本发明的实施方式作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以对其作出种种变化。

Claims (8)

1.一种栓翅卫矛组培配方，其特征在于，包括：
初代培养基：MS+6-BA1.0mg/L+KT1.0mg/L+NAA0.2mg/L；
继代增殖培养基：MS+6-BA4.0mg/L+KT1.0mg/L+NAA0.5mg/L；
生根培养基：1/2MS+NAA1.0mg/L；
上述培养基均添加2.5％质量百分比蔗糖和0.65％质量百分比琼脂粉，pH值5.85。
2.根据权利要求1所述的栓翅卫矛组培配方，其特征在于，所述MS培养基为：
工作液浓度单位为mg/L，其中包含：
大量元素：NH4NO31650、KNO31900、CaCl2·2H2O440、MgSO4·7H2O370、KH2PO4170；
微量元素：KI0.83、H3BO36.2、MnSO4·H2O21.4、ZnSO4·7H2O8.6、Na2MnO4·2H2O0.25、CuSO4·5H2O0.025、CoCl2·6H2O0.025；
铁盐：Na2·EDTA37.3、FeSO4·7H2O27.8；
有机物：烟酸0.5、盐酸吡哆素0.5、盐酸硫胺素0.1、肌醇100、甘氨酸2。
3.根据权利要求1所述的栓翅卫矛组培配方，其特征在于，所述培养基需要经过高压灭菌锅消毒25min，高压灭菌锅工作温度120℃，压强115kPa。
4.根据权利要求1所述的栓翅卫矛组培配方，其特征在于，所述6-BA为6-苄基嘌呤，所述KT为激动素，所述NAA为奈乙酸。
5.一种栓翅卫矛培养方法，其特征在于，包括以下几个步骤：
(1)选择外植体，用肥皂水清洗后在接种室超净工作台用75％体积百分比酒精消毒1min，接着用无菌水冲洗2遍，再用0.1％质量百分比升汞消毒12min，用无菌水冲洗3遍，最后用消毒过的滤纸吸干外面的水分；
(2)将消毒好的外植体接种到初代培养基上，培养得到无菌的幼苗；
(3)将得到无菌的幼苗接种到继代增殖培养基上，培养得到分化苗；
(4)将得到的分化苗接种到生根培养基上，培养得到生根苗；
(5)炼苗，把得到的生根组培苗在炼苗室中不开盖炼苗7天，然后移栽到珍珠岩：土壤＝1：3的基质中，得到成品；
所述培养基为：
初代培养基：MS+6-BA1.0mg/L+KT1.0mg/L+NAA0.2mg/L；
继代增殖培养基：MS+6-BA4.0mg/L+KT1.0mg/L+NAA0.5mg/L；
生根培养基：1/2MS+NAA1.0mg/L；
上述培养基均添加2.5％质量百分比蔗糖和0.65％质量百分比琼脂粉，pH值5.85。
6.根据权利要求5所述的栓翅卫矛培养方法，其特征在于，所述MS培养基为：
工作液浓度单位为mg/L，其中包含：
大量元素：NH4NO31650、KNO31900、CaCl2·2H2O440、MgSO4·7H2O370、KH2PO4170；
微量元素：KI0.83、H3BO36.2、MnSO4·H2O21.4、ZnSO4·7H2O8.6、Na2MnO4·2H2O0.25、CuSO4·5H2O0.025、CoCl2·6H2O0.025；
铁盐：Na2·EDTA37.3、FeSO4·7H2O27.8；
有机物：烟酸0.5、盐酸吡哆素0.5、盐酸硫胺素0.1、肌醇100、甘氨酸2。
7.根据权利要求5所述的栓翅卫矛培养方法，其特征在于，所述步骤(1)选择的外植体为当年新生芽。
8.根据权利要求5所述的栓翅卫矛培养方法，其特征在于，所述步骤(2)至(4)选用的培养室条件为：培养温度25℃，光照强度1200勒克斯，光照时间12h/d。
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