CN107466857A - 一种高杆万寿菊组培培养基及其制备方法 - Google Patents

一种高杆万寿菊组培培养基及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种高杆万寿菊组培培养基，其技术方案要点是每升培养基中包括有母液Ⅰ45‑55ml，母液Ⅱ、母液Ⅲ和母液Ⅳ各3‑7ml、蔗糖20‑40g、琼脂粉3‑7g、生长促进剂0.06‑0.1ml和繁殖促进剂0.3‑0.7ml，达到了促使万寿菊进行分化、生根、生长的作用，能够充当多个培养阶段的培养基，应用起来省时省工省成本，从让万寿菊种植高效化，工业化的技术效果。

Description

一种高杆万寿菊组培培养基及其制备方法
技术领域
本发明涉及花卉培养基制作领域，特别涉及一种高杆万寿菊组培培养基及其制备方法。
背景技术
万寿菊为菊科万寿菊属一年生草本植物，茎直立，粗壮，具纵细条棱，分枝向上平展，叶羽状分裂，沿叶缘有少数腺体，头状花序着生枝顶，径可达10cm，黄或橙色，总花梗肿大，花期8～9月，原产墨西哥，在中国各地都有人栽培用于观赏，多生在路边草甸，万寿菊常于春天播种，因其花大、花期长，故常用于花坛布景。
现有的可参考公开号为CN105613029A的中国专利，其公开了一种万寿菊的规范化种植方法，其具体步骤为：首先精选种子，剔除杂质和秕籽，确保种子饱满；然后对选出的种子进行晒种，以杀伤病菌，增强种子活力，提高发芽率；播种前将种子在35～40℃温水中浸泡3～4h，然后捞出用清水滤一遍，晾干水分即可播种；为防苗期病害，可用甲基托布津或百菌清进行药剂拌种；再进行播种、苗床管理、移栽、田间管理、最后采摘，在秋季采摘万寿菊应在温度低、湿度大时采切；采切时间为在开花前1天～2天。
在万寿菊的种植过程中，目前的研发方向是如何做到高效的对植株进行大量繁殖，对万寿菊的种植进行工业化。
发明内容
本发明的目的是提供一种高杆万寿菊组培培养基，起到了促使万寿菊进行分化、生根、生长的作用，能够充当多个培养阶段的培养基，应用起来省时省工省成本，从而达到万寿菊种植高效化，工业化的作用。
本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种高杆万寿菊组培培养基，每升培养基中包括有母液Ⅰ45-55ml，母液Ⅱ、母液Ⅲ和母液Ⅳ各3-7ml、蔗糖20-40g、琼脂粉3-7g、生长促进剂0.06-0.1ml和繁殖促进剂0.3-0.7ml；
母液Ⅰ包括有KNO3 38g/L、NH4NO3 33g/L、CaCl2·2H2O 8.8g/L、MgSO4·7H2O 7.4g/L、KH2PO4 3.4g/L，其余为溶剂；
母液Ⅱ：KI 0.166g/L、H3BO3 1.24g/L、MnSO4·4H2O 4.46g/L、ZnSO4·7H2O 1.72g/L、Na2MoO4·2H2O 0.05g/L、CuSO4·5H2O 0.005g/L、CoCl2·6H2O 0.005g/L，其余为溶剂；
母液Ⅲ：肌醇20g/L、烟酸0.1g/L、盐酸吡哆素(VB6)0.1g/L、盐酸硫胺素(VB1)0.02g/L、甘氨酸0.4g/L，其余为溶剂；
母液Ⅳ：FeSO4·7H2O 5.56g/L、Na2·EDTA·2H2O 7.46g/L，其余为溶剂。
通过上述技术方案，组培方式中预先调配的母液可以进行预存，当需要使用培养基时，直接通过调整母液的含量即可迅速得到培养基，通过最终调制获得的培养基能够很好的促进万寿菊进行迅速生长，满足用作初代培养基、继代培养基和生根培养基的需求，能够促使万寿菊进行分化、生根，省时省工省成本，从而达到将万寿菊种植高效化，工业化的目的。
较佳的，生长促进剂包括有6-BA和IAA。
较佳的，生长促进剂中6-BA与IAA的重量比为1:1，其中6-BA的浓度500mg/L、IAA的浓度500mg/L。
通过上述技术方案，生长促进剂包括了具有提高植物生长的IAA以及促进植物细胞分裂的6-BA，通过上述二者的配合可以大幅度的提升万寿菊本身的生长速度和生根速度，保证万寿菊能够进行工业化的批量生产。
较佳的，繁殖促进剂包括有银杏叶萃取液、稀土添加剂。
较佳的，每升培养基中银杏萃取液与稀土促进剂的重量比为3:2，其中稀土促进剂的浓度为50mg/L,银杏萃取液的浓度100ml/L。
较佳的，稀土促进剂中的稀土为轻稀土。
通过上述技术方案，选用了银杏叶和轻稀土的配合经过实验发现能够很好的提升万寿菊体内激素的活性，让万寿菊在不同的培养阶段都能更快、更方便的被培养出来。
本发明的目的二：一种高杆万寿菊组培培养基的制备方法，包括如下步骤：
S1：配制母液Ⅰ、母液Ⅱ、母液Ⅲ、母液Ⅳ、生长促进剂和繁殖促进剂，保存在冰箱的冷藏室中。
S2：配制1L高杆万寿菊组培培养基，此时混合母液Ⅰ、母液Ⅱ、母液Ⅲ、母液Ⅳ、生长促进剂、繁殖促进剂、蔗糖、琼脂粉。
S3：添加浓度为0.5mol/L的氢氧化钠或浓度为0.5mol/L的HCl将PH值调到5.5-6。
S4:然后把高杆万寿菊组培培养基分装到培养瓶中，每瓶80ml。
S5：把装有高杆万寿菊组培培养基的培养瓶放到高压灭菌锅中，消毒25min，高压灭菌锅工作温度120℃，压强120kPa。
通过上述技术方案，万寿菊通过固定的配置调配后，能够直接对万寿菊进行培养，而通过控制培养基的PH值则更能让万寿菊处于一种适合自身生长的环境。
综上所述，本发明具有以下有益效果：
1、通过四种母液的配合让原本三个需要分别调制的培养基仅需要一种相同的培养基即可，减少了调配不同培养基的时间，从而保证了培养过程的的简便；
2、繁殖存进剂中提供了大量有益于提高激素活性的微量元素，从而保证幼苗在不同环境下的繁殖能力都能很好的展现。
具体实施方式
以下对本发明作进一步详细说明。
以下物品均从市场采购获得。
实施例1：一种高杆万寿菊组培培养基，每升培养基中包括有母液Ⅰ45ml，母液Ⅱ、母液Ⅲ和母液Ⅳ各3ml、蔗糖20g、琼脂粉3g、6-BA0.03ml和IAA0.03ml,银杏萃取液0.18ml与稀土促进剂0.12ml，其中6-BA的浓度500mg/L、IAA的浓度500mg/L，稀土促进剂的浓度为50mg/L,银杏萃取液的浓度100ml/L。
母液Ⅰ：包括有KNO3 38g/L、NH4NO3 33g/L、CaCl2·2H2O 8.8g/L、MgSO4·7H2O7.4g/L、KH2PO4 3.4g/L，其余为溶剂；
母液Ⅱ：KI 0.166g/L、H3BO3 1.24g/L、MnSO4·4H2O 4.46g/L、ZnSO4·7H2O 1.72g/L、Na2MoO4·2H2O 0.05g/L、CuSO4·5H2O 0.005g/L、CoCl2·6H2O 0.005g/L，其余为溶剂；
母液Ⅲ：肌醇20g/L、烟酸0.1g/L、盐酸吡哆素(VB6)0.1g/L、盐酸硫胺素(VB1)0.02g/L、甘氨酸0.4g/L，其余为溶剂；
母液Ⅳ：FeSO4·7H2O 5.56g/L、Na2·EDTA·2H2O 7.46g/L，其余为溶剂。
一种高杆万寿菊组培培养基的制备方法，包括如下步骤：
S1：配制母液Ⅰ、母液Ⅱ、母液Ⅲ、母液Ⅳ、生长促进剂和繁殖促进剂，保存在冰箱的冷藏室中。
S2：配制1L高杆万寿菊组培培养基，此时混合母液Ⅰ、母液Ⅱ、母液Ⅲ、母液Ⅳ、生长促进剂、繁殖促进剂、蔗糖、琼脂粉。
S3：添加浓度为0.5mol/L的氢氧化钠或浓度为0.5mol/L的HCl将PH值调到5.5。
S4:然后把高杆万寿菊组培培养基分装到培养瓶中，每瓶80ml。
S5：把装有高杆万寿菊组培培养基的培养瓶放到高压灭菌锅中，消毒25min，高压灭菌锅工作温度120℃，压强120kPa。
实施例2：一种高杆万寿菊组培培养基，每升培养基中包括有母液55ml，母液Ⅱ、母液Ⅲ和母液Ⅳ各7ml、蔗糖40g、琼脂粉7g、6-BA0.05ml和IAA0.05m,银杏萃取液0.42ml与稀土促进剂0.28ml，其余与实施例1相同。
一种高杆万寿菊组培培养基的制备方法，包括如下步骤：
S1：配制母液Ⅰ、母液Ⅱ、母液Ⅲ、母液Ⅳ、生长促进剂和繁殖促进剂，保存在冰箱的冷藏室中。
S2：配制1L高杆万寿菊组培培养基，此时混合母液Ⅰ、母液Ⅱ、母液Ⅲ、母液Ⅳ、生长促进剂、繁殖促进剂、蔗糖、琼脂粉。
S3：添加浓度为0.5mol/L的氢氧化钠或浓度为0.5mol/L的HCl将PH值调到6。
S4:然后把高杆万寿菊组培培养基分装到培养瓶中，每瓶80ml。
S5：把装有高杆万寿菊组培培养基的培养瓶放到高压灭菌锅中，消毒25min，高压灭菌锅工作温度120℃，压强120kPa。
实施例3:一种高杆万寿菊组培培养基，每升培养基中包括有母液Ⅰ50ml，母液Ⅱ、母液Ⅲ和母液Ⅳ各5ml、蔗糖30g、琼脂粉5g、6-BA0.04ml和IAA0.04ml,银杏萃取液0.3ml与稀土促进剂0.2ml，其余与实施例1相同。
一种高杆万寿菊组培培养基的制备方法，包括如下步骤：
S1：配制母液Ⅰ、母液Ⅱ、母液Ⅲ、母液Ⅳ、生长促进剂和繁殖促进剂，保存在冰箱的冷藏室中。
S2：配制1L高杆万寿菊组培培养基，此时混合母液Ⅰ、母液Ⅱ、母液Ⅲ、母液Ⅳ、生长促进剂、繁殖促进剂、蔗糖、琼脂粉。
S3：添加浓度为0.5mol/L的氢氧化钠或浓度为0.5mol/L的HCl将PH值调到5.8。
S4:然后把高杆万寿菊组培培养基分装到培养瓶中，每瓶80ml。
S5：把装有高杆万寿菊组培培养基的培养瓶放到高压灭菌锅中，消毒25min，高压灭菌锅工作温度120℃，压强120kPa。
实施例4：一种高杆万寿菊组培培养基，每升培养基中包括有母液Ⅰ50ml，母液Ⅱ、母液Ⅲ和母液Ⅳ各5ml、蔗糖30g、琼脂粉5g、6-BA0.05ml和IAA0.05ml、银杏萃取液0.42ml与稀土促进剂0.28ml，其余与实施例3相同。
实施例5：一种高杆万寿菊组培培养基，每升培养基中包括有母液Ⅰ50ml，母液Ⅱ、母液Ⅲ和母液Ⅳ各5ml、蔗糖30g、琼脂粉5g、6-BA0.03ml和IAA0.03ml,银杏萃取液0.18ml与稀土促进剂0.12ml，其余与实施例3相同。
万寿菊组织培养与快速繁殖全过程
步骤一：外植体的处理，选择万寿菊带侧芽的茎段1.2-1.5cm作为外植体，以下都称呼外植体，用流水冲洗数遍，晾干备用；
步骤二：外植体首先用75％酒精消毒1min，用无菌水清洗2遍，外植体再用2％次氯酸钠溶液消毒10min，用无菌水清洗3遍，用消毒过的滤纸吸干外植体表面的水分；
步骤三：外植体的培养，外植体放入至上述配比的培养基A中，上述培养基充当丛生芽诱导培养基，放置到培养室培养1个月，从而获得无菌苗，培养条件为培养室温度25℃，光照强度1200勒克斯，每天光照时间10h；
步骤四：继代接种和培养，在接种室超净工作台上将萌发出的小苗进行分割，并将分割后的幼苗单独接种到上述配比的培养基B上，此时上述培养基充当继代培养基的作用，培养2个月，培养室温度25℃，光照强度1200勒克斯，每天光照时间10h。
步骤五：将步骤四获得的幼苗继续分离并重复上述步骤四，经过2次继代培养后，将幼苗直接移栽到新的上述配比的培养基C中，此时上述培养基充当生根培养基，培养15-20天后幼苗生根长度达到2-3cm的即可进行移栽种植，而生长速度慢的继续放在在培养基中等待根须长度达标，从而得到生长健壮、成活率高的万寿菊幼苗。
对比例实验
对比例1：一种高杆万寿菊组培培养基，每升培养基中包括有母液Ⅰ50ml，母液Ⅱ、母液Ⅲ和母液Ⅳ各5ml、蔗糖30g、琼脂粉5g、6-BA0.04ml和IAA0.04ml，其余与实施例3相同。
对比例2:一种高杆万寿菊组培培养基，每升培养基中包括有母液Ⅰ50ml，母液Ⅱ、母液Ⅲ和母液Ⅳ各5ml、蔗糖30g、琼脂粉5g、银杏萃取液0.3ml与稀土促进剂0.2ml，其余与实施例3相同。
对比例3：一种高杆万寿菊组培培养基，每升培养基中包括有母液Ⅰ50ml，母液Ⅱ、母液Ⅲ和母液Ⅳ各5ml、蔗糖30g、琼脂粉5g、6-BA0.04ml和IAA0.04ml、稀土促进剂0.2ml，其余与实施例3相同。
对比例4:一种高杆万寿菊组培培养基，每升培养基中包括有母液Ⅰ50ml，母液Ⅱ、母液Ⅲ和母液Ⅳ各5ml、蔗糖30g、琼脂粉5g、6-BA0.04ml和IAA0.04ml,银杏萃取液0.3ml，其余与实施例3相同。
对比例5：采用市面上的3中培养基分别培养3个阶段的幼苗。
组织培养和快速增殖实验
培养基A：培养基A的检测总共选取280个带有相同数量侧芽且茎段长度相同的外植体进行实验，同时检测使用培养基A培养20天后丛生芽个数(不计算愈伤组织上的丛生芽)；
培养基B：培养基B的检测总共取280个从培养基A中培养好的幼苗，培养10天后进行检测丛生芽增长个数；
培养基C：培养基C的检测选取280个从培养基B中培养好且大小相近的幼苗放入至培养基C中培养20天，并测量根部的长度。
通过上述实验可以比较清楚的看到，在缺少生长促进剂或繁殖促进剂的情况下，幼苗在培育的三个阶段均不能很好的发育，并且生长促进剂的作用高于放置促进剂，而繁殖促进剂的添加则让培养基在各个培养阶段都能起到培养效果超过市面上的类似培养基。
本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (7)

1.一种高杆万寿菊组培培养基，其特征在于：每升培养基中包括有母液Ⅰ45-55ml，母液Ⅱ、母液Ⅲ和母液Ⅳ各3-7ml、蔗糖20-40g、琼脂粉3-7g、生长促进剂0.06-0.1ml和繁殖促进剂0.3-0.7ml；
母液Ⅰ包括有KNO3 38g/L、NH4NO3 33g/L、CaCl2·2H2O 8.8g/L、MgSO4·7H2O 7.4g/L、KH2PO4 3.4g/L，其余为溶剂；
母液Ⅱ：KI 0.166g/L、H3BO3 1.24g/L、MnSO4·4H2O 4.46g/L、ZnSO4·7H2O 1.72g/L、Na2MoO4·2H2O 0.05g/L、CuSO4·5H2O 0.005g/L、CoCl2·6H2O 0.005g/L，其余为溶剂；
母液Ⅲ：肌醇20g/L、烟酸0.1g/L、盐酸吡哆素(VB6) 0.1g/L、盐酸硫胺素(VB1) 0.02g/L、甘氨酸0.4g/L，其余为溶剂；
母液Ⅳ：FeSO4·7H2O 5.56g/L、Na2·EDTA·2H2O 7.46g/L，其余为溶剂。
2.根据权利要求1所述的一种高杆万寿菊组培培养基，其特征在于：生长促进剂包括有6-BA 和IAA。
3.根据权利要求2所述的一种高杆万寿菊组培培养基，其特征在于： 生长促进剂中6-BA与IAA的重量比为1:1，其中6-BA的浓度 500mg/L、IAA的浓度500mg/L。
4.根据权利要求1所述的一种高杆万寿菊组培培养基，其特征在于：繁殖促进剂包括有银杏叶萃取液、稀土添加剂。
5.根据权利要求4所述的一种高杆万寿菊组培培养基，其特征在于：每升培养基中银杏萃取液与稀土促进剂的重量比为3:2，其中稀土促进剂的浓度为50mg/L,银杏萃取液的浓度100ml/L。
6.根据权利要求4所述的一种高杆万寿菊组培培养基，其特征在于：稀土促进剂中的稀土为轻稀土。
7.一种高杆万寿菊组培培养基的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1：配制母液Ⅰ、母液Ⅱ、母液Ⅲ、母液Ⅳ、生长促进剂和繁殖促进剂，保存在冰箱的冷藏室中；
S2：配制1L高杆万寿菊组培培养基，此时混合母液Ⅰ、母液Ⅱ、母液Ⅲ、母液Ⅳ、生长促进剂、繁殖促进剂、 蔗糖、琼脂粉；
S3：添加浓度为0.5mol/L的氢氧化钠或浓度为0.5mol/L的 HCl将PH值调到5.5-6；
S4:然后把高杆万寿菊组培培养基分装到培养瓶中，每瓶80ml；
S5：把装有高杆万寿菊组培培养基的培养瓶放到高压灭菌锅中，消毒 25min，高压灭菌锅工作温度120℃，压强120kPa。
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