CN102499082A - 东方百合种球的试管繁育方法 - Google Patents

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黄宇翔
钟海丰
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Abstract

东方百合种球的试管繁育方法，涉及涉及花卉组培苗方法。包括：①鳞片的选择和消毒程序；②鳞片的诱导；③小鳞茎的增殖；④试管的成球；鳞片的诱导是切取鳞片基部接种于MS+6-BA 2mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L的诱导培养基上；增殖是30-40d后将小鳞茎转接至MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L的增殖培养基上增殖；两个月后转入MS+6-BA 0.2mg/L+NAA 0.5mg/L+CCC 150mg/L+蔗糖80g/L+琼脂7g/L成球培养基中，培养基PH值为5.8，光照强度2000-2200lx，14h/d，温度23-25℃直至成球。优点在于：明显提高种球得直径和鲜重，提高种球移栽成活率，缩短东方百合商品种球的繁育周期，从而降低生产成本。

Description

东方百合种球的试管繁育方法
技术领域：
本发明涉及花卉组培苗方法，特别是东方百合种球的试管繁育。
背景技术：
东方百合是百合科百合属的多年生球根类花卉，其花大美丽、色彩丰富、香味浓郁，具有较高的观赏价值和经济价值，是世界四大切花之一。我国切花产业中东方百合所占比重越来越大，然而多数种球仍依靠进口，质量参差不齐，严重制约我国百合鲜切花的发展。利用组织培养技术结合茎尖脱毒可生产出优质无病毒种球，然而我国百合的种球国产化生产仍进展缓慢，现有的种球繁育技术一般是先通过组织培养生产百合种苗，然后在大田进行3-4年的种球繁育，达到商品种球的规格。
植物组织培养(Tissue culture)是指用无菌方法使植物体的离体(in vitro)器官、组织和细胞在人为提供的条件下生长和发育的所有培养技术的总称，也称之为离体培养(In vitro culture)或试管培养。
在百合组培中，常常因为培养出的当年试管鳞茎周径小、重量轻，导致栽种成活率低，仅长叶不抽茎，种植3-4年后才能达到商品球的规格和标准。如果提高百合组培小鳞茎栽种当年的抽茎率，则可以缩短繁殖栽培年限。因此，通过改善培养条件促进组培小鳞茎在瓶内的膨大和增重，是百合组培小鳞茎出瓶栽种后快速生长和提高抽茎率的关键因子。
现有研究研究结果表明鳞片不同部位诱导小鳞茎的能力从强到弱依次为基部＞中部＞尖部，中层＞外层＞内层。小鳞茎诱导的最佳培养基为MS+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA。在一定浓度范围内，随蔗糖和PP333(一种生长调节剂)浓度的增加，小鳞茎的增殖速度加快，二者最适浓度分别为9％和15mg/L。黑暗较光照利于小鳞茎的增殖。
A、鳞片的选择和消毒程序；
选取东方百合种球中层鳞片，用牙刷蘸上洗衣粉除去鳞片表面杂质，用清水冲洗干净后，在超净工作台上先用70％酒精处理45s，无菌水冲洗3-4遍，0.1％升汞消毒13min，无菌水冲洗5-7遍后备用。(用于建立百合的无菌体系)
B、鳞片的诱导；
将消毒过的鳞片切分成1cm×1cm的小方块，内侧朝上接种于MS+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+蔗糖30g/L+琼脂7g/L的诱导培养基上进行鳞片诱导，诱导率达到98％以上，平均每片鳞茎诱导不定芽3.3个。(用于从鳞片上诱导小鳞茎)
C、小鳞茎的增殖；
30-40d后将诱导出来的小鳞茎转接至MS+1.0-2.0mg/L6-BA+1.0mg/L KT+0.2mg/L NAA+蔗糖30g/L+琼脂7g/L的增殖培养基上进行小鳞茎增殖，黑暗培养，增殖系数达到6.01。
D、试管内成球。
在无菌条件下将丛芽分割成单个芽，剪去上部叶片，接种于2MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖70g/L+琼脂7g/L的成球培养基中诱导试管成球，试管成球率96％，鲜重平均增重12.8倍，平均直径增加4.5倍。
现有技术的缺点：1、百合组培苗移栽成活率低；2、由于组培苗鳞茎小，需要在大田繁育的周期长；3、生产成本高，繁育过程易受自然环境的影响。
发明内容：
本发明的目的在于克服上述缺陷，提供一种东方百合种球的试管繁育方法。
本发明的方案是：包括：①鳞片的选择和消毒程序；②鳞片的诱导；③小鳞茎的增殖；④试管的成球；其特征在于：鳞片的诱导工序是将消毒过的鳞片切取靠近基部1-1.5cm长的鳞片，内侧朝上接种于MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L的诱导培养基上进行鳞片诱导；小鳞茎的增殖工序是30-40d后将诱导出来的小鳞茎转接至MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L的增殖培养基上进行小鳞茎增殖，正常光照培养；两个月以后进入试管的成球，将小鳞茎转入MS+6-BA 0.2mg/L+NAA0.5mg/L+CCC 150mg/L+蔗糖80g/L+琼脂7g/L成球培养基中，培养基PH值均为5.8，培养条件均为光照强度2000-2200lx，14h/d，温度23-25℃，直至成球。
本发明的优点在于：其一，在百合成球培养基中通过添加矮壮素(CCC)，可明显提高种球得直径和鲜重；其二，利用试管内成球技术可明显缩短东方百合种球在大田的生长周期，提高种球移栽成活率，加快百合种苗的抽茎，缩短东方百合商品种球的繁育周期，从而降低生产成本。
具体实施方式：
东方百合试管内种球繁育技术涉及东方百合组织培养技术，包括：
A、鳞片的选择和消毒程序；
选取东方百合种球中层鳞片，用牙刷蘸上洗衣粉除去鳞片表面杂质，用清水冲洗干净后，在超净工作台上先用无菌水冲洗5-7遍，70％酒精处理45s，无菌水冲洗3-4遍，0.1％升汞消毒13min，无菌水冲洗5-7遍后备用，污染率小于2％。(用于建立百合的无菌体系)
B、鳞片的诱导；
将消毒过的鳞片切取靠近基部1-1.5cm长的鳞片，内侧朝上接种于MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L的诱导培养基上进行鳞片诱导，诱导率达到100％。(用于从鳞片上诱导小鳞茎)
C、小鳞茎的增殖；
30-40d后将诱导出来的小鳞茎转接至MS+6-BA 2mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L的增殖培养基上进行小鳞茎增殖，正常光照培养，增殖系数达到5.9，试管苗长势强健，叶色浓绿。正常光照培养有利于植株对营养元素的吸收和利用。(用于小鳞茎增殖，从而满足工厂化的规模要求)
D、试管内成球(创新点：成球培养基中添加矮壮素CCC(一种生长调节剂)，可明显增加种球直径和鲜重)。
待种球数量达到预期值时，将小鳞茎转入MS+6-BA 0.2mg/L+NAA 0.5mg/L+CCC 150mg/L+蔗糖80g/L+琼脂7g/L成球培养基中，试管成球率100％，鲜重平均增重13.5倍，平均直径增加6.1倍。(用于试管成球，提高试管种球的直径和鲜重，从而提高种苗移栽成活率，并加快百合种球抽茎)
培养基PH值均为5.8，培养条件均为光照强度2000-2200lx，14h/d，温度23-25℃。
其原理为：通过影响试管成球率及质量的多个因素进行试验研究，主要因素包括：无机盐浓度、激素种类及浓度、蔗糖浓度、矮壮素(CCC)浓度以及有无光照。评价指标包括：成球率、鳞茎直径和鳞茎鲜重。试验研究结果显示，无机盐浓度对东方百合试管内成球率、鳞茎直径及鳞茎鲜重均无显著影响。细胞分裂素6-BA在一定范围内随浓度的提高，鳞茎的直径和鲜重也增加，但同时鳞茎的畸形率也相应提高；细胞生长素NAA对于东方百合的成球率、鳞茎直径及鲜重有显著影响。蔗糖浓度对东方百合的试管成球率有显著影响。蔗糖含量越高、所含淀粉也越多，它分解的糖元有利于细胞的生长发育，使得鳞茎的直径和鲜重也增加。本技术首次利用矮壮素(CCC)来促进百合鳞茎生长，研究结果显示矮壮素对于控制东方百合植株高度有显著作用，同时也有利于鳞茎的生长和膨大。
本发明英文名词说明：
MS：组培中用到的一种基本培养基(包含大量元素、微量元素、铁盐和有机成分)
6-BA：6-苄氨基嘌呤，一种植物细胞分裂素
NAA：萘乙酸，一种植物细胞生长素
PP333：多效唑，植物生长调节剂
KT：6-糖基氨基嘌呤，一种植物细胞分裂素
CCC：矮壮素，一种植物生长调节剂
Lx：勒克斯，光照强度单位

Claims (1)

1.东方百合种球的试管繁育方法，包括：①鳞片的选择和消毒程序；②鳞片的诱导；③小鳞茎的增殖；④试管的成球；其特征在于：鳞片的诱导工序是将消毒过的鳞片切取靠近基部1-1.5cm长的鳞片，内侧朝上接种于MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L的诱导培养基上进行鳞片诱导；小鳞茎的增殖工序是30-40d后将诱导出来的小鳞茎转接至MS+6-BA 2mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖40g/L+琼脂7g/L的增殖培养基上进行小鳞茎增殖，正常光照培养；两个月以后进入试管的成球，将小鳞茎转入MS+6-BA 0.2mg/L+NAA 0.5mg/L+CCC 150mg/L+蔗糖80g/L+琼脂7g/L成球培养基中，培养基PH值均为5.8，培养条件均为光照强度2000-2200lx，14h/d，温度23-25℃，直至成球。
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