CN103563746A - 黄山贡菊茎尖组织培养的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种黄山贡菊茎尖组织培养的方法，包括以下步骤：培养基的配制，外植体的选取与消毒、茎尖剥离、茎尖诱导培养、继代增殖培养、生根诱导培养、组培苗驯化与栽培。基本培养基选用MS培养基，0.4～0.6%的琼脂，3%的蔗糖，PH值为5.6～5.8，温度25℃±2；茎尖启动诱导培养基为MS+6-BA1.0～2.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L；不定芽继代增殖培养基为MS+6-BA1.0～3.0mg/L+NAA0.01～0.1mg/L；试管内生根培养基为2/1MS+NAA0.5～1.5mg/L；试管外生根基质为蛭石和珍珠岩等量混合而成。本发明的优点：建立黄山贡菊组织培养快繁技术体系，试管黄山贡菊不带病，质量好，试管黄山贡菊培养条件可控，可周年工厂化生产，种苗繁殖速度快，周期短，繁殖系数高；健壮均匀，移栽成活率高，可达90%以上，适合规模化生产。
Description
技术领域
本发明涉及黄山贡菊茎尖组织培养的方法，具体来说是利用组织培养技术来繁殖黄山贡菊的方法。
背景技术
黄山贡菊(Dendranthema morifolium Pamat ‘Gongju’)，属于菊科多年生草本植物，分布在黄山周围的一些地区，茎嫩绿色，直立单株，单叶互生，卵圆至披针形，浅裂，头状花顶上，花色多样，花蒂嫩绿，质柔软，气味清香，均匀不散朵。是具有地方特色名贵中药材，在中医临床治疗上有疏风清热的功效，可用于内热感冒、头昏目眩等诸多症，，对动脉硬化、血压偏高及动脉硬化等症也有显著功效，不仅可以药用而且可以作为高级饮料佳品，可以泡茶、泡酒，常饮者不仅可以排除体内的毒素，有美容的功效闻名中外，是全国四大名菊之一，深受国内外广大客户的青睐。
黄山贡菊由于长期利用无性繁殖方式进行育苗，不仅质量差，速度慢，而且会使贡菊苗木体内的病毒数量日益增多，导致其发生严重病虫害，生产中大量使用农药防治，污染严重，农药的残留量大，造成商品品质和产量都大幅度降低，严重影响到了黄山贡菊的经济价值和产业发展。因此，通过组组织培养的方法快速繁殖黄山贡菊，可以将植物体内的一些病毒消除，提高黄山贡菊的质量和产量。
发明内容
本发明的目的是针对黄山贡菊长期利用无性繁殖的方式进行繁殖，导致贡菊苗木带病和种性退化问题，提供一种组织培养快速繁殖黄山贡菊的方法，提高黄山贡菊的品质和产量，用这种方法培养的贡菊生根率达95%以，成活率在95%以上，从而实现了本发明目的。
本发明黄山贡菊茎尖组织培养的方法，包括以下步骤：
（1）外植体的消毒处理：剪取生长健壮无病虫害的黄山贡菊顶芽作为组织培养外植体，放入加少许洗衣粉的溶液浸泡10 min，用自来水冲洗1h左右，在超净工作台上用70%的酒精中浸没15 s，用无菌水冲洗2遍，再用0.1%的氯化汞溶液加两滴吐温灭菌4 min，最后用无菌水冲洗4～5遍备用。
（2）茎尖诱导分化：将消毒过的黄山贡菊顶芽，用镊子和解剖刀剥去嫩叶，露出生长锥，用刀尖切下0.3～0.5mm的生长点，并带2～3对叶原基，立即接种到启动培养基中，所术启动培养基以MS基本培养基，添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）1.0～2.0mg/L、奈乙酸（NAA）0.1～0.5mg/L、0.4～0.6%的琼脂， 3%的蔗糖，PH值为5.6～5.8，温度25℃±2，每天光照12h，光照强度为1500～2000LX，直至萌发形成黄山贡菊小芽。
（3）继代增殖：将茎尖诱导的再生小植株转接到增殖培养基中进行继代增殖培养，所术增殖培养基为MS基本培养基，添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）1.0～3.0mg/L、奈乙酸（NAA）0.01～0.1mg/L、0.4～0.6%的琼脂， 3%的蔗糖，PH值为5.6～5.8，温度25℃±2，每天光照12h，光照强度为1500～2000LX进行不定芽的增殖。
（4）试管内生根：当步骤（3）的芽高长到瓶口时，将苗剪成茎段接种到生根培养基中，所述的培养基为1/2MS基本培养基，添加奈乙酸（NAA）0.5～1.5mg/L、0.4～0.6%的琼脂，3%的蔗糖，PH值为5.6～5.8。在温度为25℃±2，每天光照12h，光照强度为1500～2000LX培养至正常生根。
（5）试管外炼苗：当步骤（4）的生根试管苗长至4～5cm时，在自然光炼苗3～4天，洗净根部培养基，移至蛭石、珍珠岩和泥碳土等量混合而成的基质中，用塑料薄膜搭成小拱棚保持其湿度为85%～95%，遮荫60%～70%，保温20～30℃培养。
（6）试管外生根：当步骤（3）的芽高长到瓶口时，将其剪成茎段，用生根粉处理后，扦插到蛭石和珍珠岩等量混合而成的基质中，用塑料薄膜搭成小拱棚保持其湿度为85%～95%，遮荫60%～70%，保温20～30℃培养，10 d左右开始生根，成活率达90%以上。
步骤（1）在外植体消毒处理中，用70%的酒精中浸没15 s，添加两滴吐温（表面活性剂），提高杀菌的效果，提高黄山贡菊茎尖成活率5～10百分点。
步骤（2）芽诱导培养中，15～20 d能在外植体上形成不定芽。
步骤（3）中的一个继代周期为25～30d，每个继代增殖周期后的增殖倍数为10～20倍，继代10代后仍能保持增殖率。
步骤（4）所述的茎段为2～3cm，培养的时间一般是15～20 d，每株苗有根数5～15条，在1/2MS基本培养基中添加奈乙酸生根快、生根整齐且粗壮，不添加奈乙酸生根快慢不一且细弱。
步骤（5）中移栽7～15 d即可移至大田栽培。
步骤（6）所述茎段4～5cm，用0.5～0.8g/L的生根粉速蘸5 s，基质在扦插之前用0.3%～0.5%高锰酸钾消毒，培养20～25 d即可移至大田栽培，每株苗有根数10～15条，和试管内长出根的数量、质量相当。试管外生根由于减少了一个无菌操作步骤，因而可降低成本。
本发明通过组织培养进行试管黄山贡菊的繁殖，具有以下优点：
1，繁殖系数高，繁殖周期短，且整个繁殖均在人工控制的条件下进行，不受外界环境的影响，可以周年进行生产，一年可可繁殖7～9代，而黄山贡菊常规生产用苗一年只可繁殖1～2代。本发明极大提高了黄山贡菊繁殖速度，有利于优新黄山贡菊品种的推广应用。
2，试管黄山贡菊苗不带病，解决了黄山贡菊常规用苗易带病的问题，通过茎尖组织快繁脱去黄山贡菊苗各种病毒，恢复贡菊的优良品质，提高产量。田间生长抗病能力强，表现为叶色浓绿，茎杆粗壮，生长势强，开花时间比常规苗提前10天左右、且花朵大、层次多，色泽洁白，整株无病虫害、无枯叶。经测算，预计干花亩产达到90kg，比常规苗增产40%左右，各项指标均优于常规苗。
综上所述，本发明为黄山贡菊产业的发展，为满足优质种苗市场的需要，提供了一种快速、方便、有效的繁殖方法。
3、黄山贡菊现有的育苗方式是农户各自用扦插、分株等无性繁殖方式，速度慢，苗木质量标准不能统一，不能满足生产需求，本发明可以进行黄山贡菊的规模化、工厂化育苗，为市场提供规格整齐一致的优质种苗。
4、生产中黄山贡菊长期利用无性繁殖方式进行育苗，会使贡菊苗木体内的病毒数量日益增多，导致其发生严重病虫害，生产中大量使用农药防治，污染严重，且农药的残留量大，造成商品品质和产量都大幅度降低，严重影响到了黄山贡菊的产业发展。本发明用黄山贡菊茎尖组织培养生产出脱毒的黄山贡菊种苗，解决了品质退化问题。
具体实施方式
以下的实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1：
在生长季节选取生长健壮无病虫害的黄山贡菊顶芽，放入加少许洗衣粉的溶液浸泡10 min，用自来水冲洗1h左右，在超净工作台上用70%的酒精中浸没15 s，用无菌水冲洗2遍，再用0.1%的氯化汞溶液加两滴吐温灭菌4min，最后用无菌水冲洗4～5遍。将消毒过的黄山贡菊顶芽，用镊子和解剖刀剥去嫩叶，露出生长锥，用刀尖切下0.5mm的生长点，接种到诱导培养基中（ MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L+0.5%琼脂+3%蔗糖），PH值为5.8，温度25℃±2，每天光照12h，光照强度为1500～2000LX，进行培养至长出小芽，25天后将诱导出贡菊小芽，转接到增殖培养基中（MS+ 6-BA3.0mg/L+NAA0.01mg/L+0.5%琼脂+3%蔗糖）PH值为5.8，温度25℃±2，每天光照12h，光照强度为2000～3000LX进行不定芽的增殖，25 d为1个继代增殖周期，1个继代增殖周期后的增殖倍数为10倍。当芽高长到6～8cm时，将苗剪成2～3cm茎段接种到生根培养基中（1/2MS+NAA1mg/L+0.5%琼脂+3%蔗糖），PH值为5.8，在温度为25℃±2，每天光照12h，光照强度为1500～2000LX培养至正常生根。培养15 d生根时生根率为95%以上，每株苗有根数5～10条。当生根试管苗长至4～5cm时，在自然光炼苗3～4 d，洗净根部培养基，移至蛭石、珍珠岩和泥碳土等量混合而成的基质中，用塑料薄膜搭成小拱棚保持其湿度为85%～95%，遮荫60%～70%，保温20～30℃培养，成活率达90%以上，移栽后15 d即可移至大田栽培。
实施例2：
在生长季节选取生长健壮无病虫害的黄山贡菊顶芽，放入加少许洗衣粉的溶液浸泡10 min，用自来水冲洗1h左右，在超净工作台上用70%的酒精中浸没15 s，用无菌水冲洗2遍，再用0.1%的氯化汞溶液加两滴吐温灭菌4min，最后用无菌水冲洗4～5遍。将消毒过的黄山贡菊顶芽，用镊子和解剖刀剥去嫩叶，露出生长锥，用刀尖切下0.5mm的生长点，接种到诱导培养基中（ MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L+0.5%琼脂+3%蔗糖），PH值为5.8，温度25℃±2，每天光照12h，光照强度为1500～2000LX，进行培养至长出小芽，25天后将诱导出贡菊小芽，转接到增殖培养基中（MS+ 6-BA2.0mg/L+NAA0.01mg/L+0.5%琼脂+3%蔗糖）PH值为5.8，温度25℃±2，每天光照12h，光照强度为2000～3000LX进行不定芽的增殖，25 d为1个继代增殖周期，1个继代增殖周期后的增殖倍数为8倍。当芽高长到6～8cm时，将苗剪成2～3cm茎段接种到生根培养基中（1/2MS+NAA1mg/L+0.5%琼脂+3%蔗糖），PH值为5.8，在温度为25℃±2，每天光照12h，光照强度为1500～2000LX培养至正常生根。培养15 d生根时生根率为95%以上，每株苗有根数5～10条。当生根试管苗长至4～5cm时，在自然光炼苗3～4 d，洗净根部培养基，移至蛭石、珍珠岩和泥碳土等量混合而成的基质中，用塑料薄膜搭成小拱棚保持其湿度为85%～95%，遮荫60%～70%，保温20～30℃培养，成活率达90%以上，移栽后15 d即可移至大田栽培。
实施例3：
在生长季节选取生长健壮无病虫害的黄山贡菊顶芽，放入加少许洗衣粉的溶液浸泡10 min，用自来水冲洗1h左右，在超净工作台上用70%的酒精中浸没15 s，用无菌水冲洗2遍，再用0.1%的氯化汞溶液加两滴吐温灭菌4min，最后用无菌水冲洗4～5遍。将消毒过的黄山贡菊顶芽，用镊子和解剖刀剥去嫩叶，露出生长锥，用刀尖切下0.5mm的生长点，接种到诱导培养基中（ MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L+0.5%琼脂+3%蔗糖），PH值为5.8，温度25℃±2，每天光照12h，光照强度为1500～2000LX，进行培养至长出小芽，25天后将诱导出贡菊小芽，转接到增殖培养基中（MS+ 6-BA3.0mg/L+NAA0.01mg/L+0.5%琼脂+3%蔗糖）PH值为5.8，温度25℃±2，每天光照12h，光照强度为2000～3000LX进行不定芽的增殖，30 d为1个继代增殖周期，1个继代增殖周期后的增殖倍数为15倍。当芽高长到6～8cm时，将苗剪成2～3cm茎段接种到生根培养基中（1/2MS+NAA1mg/L+0.5%琼脂+3%蔗糖），PH值为5.8，在温度为25℃±2，每天光照12h，光照强度为1500～2000LX培养至正常生根。培养20天生根时生根率为95%以上，每株苗有根数10～15条。当生根试管苗长至4～5cm时，在自然光炼苗3～4 d，洗净根部培养基，移至蛭石、珍珠岩和泥碳土等量混合而成的基质中，用塑料薄膜搭成小拱棚保持其湿度为85%～95%，遮荫60%～70%，保温20～30℃培养，成活率达90%以上，移栽后15 d即可移至大田栽培。
实施例4：
在生长季节选取生长健壮无病虫害的黄山贡菊顶芽，放入加少许洗衣粉的溶液浸泡10 min，用自来水冲洗1h左右，在超净工作台上用70%的酒精中浸没15 s，用无菌水冲洗2遍，再用0.1%的氯化汞溶液加两滴吐温灭菌4min，最后用无菌水冲洗4～5遍。将消毒过的黄山贡菊顶芽，用镊子和解剖刀剥去嫩叶，露出生长锥，用刀尖切下0.5mm的生长点，接种到诱导培养基中（ MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L+0.5%琼脂+3%蔗糖），PH值为5.8，温度25℃±2，每天光照12h，光照强度为1500～2000LX，进行培养至长出小芽，25天后将诱导出贡菊小芽，转接到增殖培养基中（MS+ 6-BA3.0mg/L+NAA0.01mg/L+0.5%琼脂+3%蔗糖）PH值为5.8，温度25℃±2，每天光照12h，光照强度为2000～3000LX进行不定芽的增殖，30天为1个继代增殖周期，1个继代增殖周期后的增殖倍数为15倍。当芽高长到8～10cm时，
将其剪成3～4m的茎段，用0.5～0.8g/L的生根粉速蘸5 s，扦插到蛭石和珍珠岩等量混合而成的基质中，用塑料薄膜搭成小拱棚保持其湿度为85%～95%，遮荫60%～70%，保温20～30℃培养，10 d左右开始生根，每株苗有根数10～15条，成活率为90%以上，培养20 d即可移至大田栽培。
Claims (10)
1.一种黄山贡菊茎尖组织培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一，对外植体进行消毒处理；
步骤二，将消毒处理后的茎尖外植体进行诱导培养，获得不定芽；
步骤三，将诱导培养出不定芽进行继代增殖培养；
步骤四，将增殖培养后的不定芽进行试管内生根培养，试管外炼苗，得到再生植株；
步骤五，将增殖培养后的不定芽进行试管外生根培养，得到再生植株。
2.根据权利要求1所述的黄山贡菊茎尖组织培养的方法，其特征在于，步骤一中，所述消毒处理包括以下步骤：剪取生长健壮无病虫害的黄山贡菊顶芽作为组织培养外植体，放入饱和洗衣粉的溶液中浸泡10 min左右，用自来水冲洗1h左右，在超净工作台上用浓度为70%左右的酒精中浸没15 s左右，用无菌水冲洗2遍，再用浓度为0.1%左右的氯化汞溶液加两滴吐温灭菌4 min，最后用无菌水冲洗4-5遍。
3.根据权利要求1所述的黄山贡菊茎尖组织培养的方法，其特征在于，在进行步骤二前，先将所述将消毒过的黄山贡菊顶芽外植体用镊子和解剖刀剥去嫩叶，露出生长锥，用刀尖切下0.3-0.5mm的生长点，并带2-3对叶原基 ，立即接种到诱导培养基中。
4.根据权利要求1所述的黄山贡菊茎尖组织培养的方法，其特征在于，步骤二中，所述诱导培养需要使用诱导培养基，其原料配比为：在MS基本培养基中添加6-苄氨基嘌呤1.0～2.0mg/L、奈乙酸0.1～0.5mg/L、0.4～0.6%的琼脂， 3%左右的蔗糖，PH值为5.6～5.8，温度25℃±2，每天光照12h，光照强度为1500～2000LX，时间为20～25 d。
5.根据权利要求1所述的黄山贡菊茎尖组织培养的方法，其特征在于，步骤三中，所述的增殖培养需要使用增殖培养基，其原料配比为：在MS基本培养基中添加6-苄氨基嘌呤（6-BA）1.0～3.0mg/L、奈乙酸（NAA）0.01～0.1mg/L、0.4～0.6%的琼脂，3%左右的蔗糖，PH值为5.6～5.8，温度25℃±2，每天光照12h左右，光照强度为1500～2000LX，时间为25～30 d。
6.根据权利要求1所述的黄山贡菊茎尖组织培养的方法，其特征在于，步骤四中，所述的生根培养需要使用生根培养基，其原料配比为：在1/2MS基本培养基中添加奈乙酸（NAA）0.5～1.5mg/L、0.4～0.6%的琼脂，3%的蔗糖，PH值为5.6～5.8，在温度为25℃±2，每天光照12h，光照强度为1500～2000LX，时间为15～20 d。
7.根据权利要求1所述的黄山贡菊茎尖组织培养的方法，其特征在于，步骤四中，所述试管苗外炼苗：在蛭石、珍珠岩和泥碳土等量混合而成的基质中，用塑料薄膜搭成小拱棚保持其湿度为85%～95%，遮荫60%～70%，保温20～30℃培养，时间为7～15 d。
8.根据权利要求1所述的黄山贡菊茎尖组织培养的方法，其特征在于，步骤五中，所述试管外生根培养的方法为：当贡菊芽长到8～10cm时，将其剪成茎段，用生根粉处理后，扦插到基质中，用塑料薄膜搭成小拱棚保持其湿度为85%～95%，遮荫60%～70%，保温20～30℃培养，时间为20～25 d。
9.根据权利要求7所述的黄山贡菊茎尖组织培养的方法，其特征在于，步骤五中，所述茎段为4～5cm， ABT生根粉浓度为0.5～0.8g/L，处理时间为5 s，基质为蛭石和珍珠岩等量混合而成，基质在扦插之前用浓度为0.3%～0.5%的高锰酸钾溶液消毒。
10. 根据权利要求1所述的黄山贡菊茎尖组织培养的方法，其特征在于:
基本培养基选用MS培养基，0.4～0.6%的琼脂， 3%的蔗糖，PH值为5.6～5.8，温度25℃±2；茎尖启动诱导培养基为MS+6-BA1.0～2.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L；不定芽继代增殖培养基为MS+6-BA1.0～3.0mg/L+NAA0.01～0.1mg/L；试管内生根培养基为2/1MS +NAA0.5～1.5mg/L；试管外生根基质为蛭石和珍珠岩等量混合而成。
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Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104303849A (zh) * | 2014-09-02 | 2015-01-28 | 徐玉文 | 一种药用滁菊的嫁接培育方法 |
| CN104429959A (zh) * | 2014-12-03 | 2015-03-25 | 河南农业大学 | 一种切花菊剑叶黄的组织培养方法 |
| CN107646362A (zh) * | 2017-09-27 | 2018-02-02 | 界首市五季果源家庭农场 | 一种贡菊侧芽幼茎微扦插的方法 |
| CN108522278A (zh) * | 2018-03-15 | 2018-09-14 | 洋县鹮居花茶产业发展有限公司 | 一种提高菊花品质的种植方法 |
| CN109258460A (zh) * | 2018-09-07 | 2019-01-25 | 广州田园牧歌农林有限公司 | 微茎尖培养结合热处理获得增城蜜菊脱毒苗的培育方法 |
| CN109997695A (zh) * | 2019-04-09 | 2019-07-12 | 河南中医药大学 | 一种怀菊组织培养快速育苗方法 |
| CN110651717A (zh) * | 2019-11-20 | 2020-01-07 | 四川云辰园林科技有限公司 | 一种菊花苗组培脱毒与快速繁殖的方法 |
| CN111837960A (zh) * | 2020-08-05 | 2020-10-30 | 贵州茗香茶业发展有限公司 | 一种适用于喀斯特地貌金丝黄菊的育种方法 |
| CN114916440A (zh) * | 2022-01-14 | 2022-08-19 | 亳州兴禾农业发展有限公司 | 一种亳菊的组培培养基及其组培方法 |
| CN116806696A (zh) * | 2023-05-06 | 2023-09-29 | 南昌和博生态农业开发有限公司 | 一种一朵一泡绣球黄菊育种、种植及菊花茶的制备方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101156550A (zh) * | 2007-11-12 | 2008-04-09 | 杭州师范大学 | 新花型菊花的选育方法 |
-
2013
- 2013-10-21 CN CN201310494252.XA patent/CN103563746A/zh active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101156550A (zh) * | 2007-11-12 | 2008-04-09 | 杭州师范大学 | 新花型菊花的选育方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 刘丽辉等: "黄山贡菊的组织培养与快速繁殖", 《植物生理学通讯》 * |
| 薛建平等: "安徽药菊茎尖组织培养技术的研究", 《中国中药杂志》 * |
| 陈黎等: "黄山贡菊组织培养与快速繁殖技术研究", 《黄山学院学报》 * |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104303849A (zh) * | 2014-09-02 | 2015-01-28 | 徐玉文 | 一种药用滁菊的嫁接培育方法 |
| CN104429959A (zh) * | 2014-12-03 | 2015-03-25 | 河南农业大学 | 一种切花菊剑叶黄的组织培养方法 |
| CN104429959B (zh) * | 2014-12-03 | 2017-01-11 | 河南农业大学 | 一种切花菊剑叶黄的组织培养方法 |
| CN107646362A (zh) * | 2017-09-27 | 2018-02-02 | 界首市五季果源家庭农场 | 一种贡菊侧芽幼茎微扦插的方法 |
| CN108522278A (zh) * | 2018-03-15 | 2018-09-14 | 洋县鹮居花茶产业发展有限公司 | 一种提高菊花品质的种植方法 |
| CN109258460A (zh) * | 2018-09-07 | 2019-01-25 | 广州田园牧歌农林有限公司 | 微茎尖培养结合热处理获得增城蜜菊脱毒苗的培育方法 |
| CN109258460B (zh) * | 2018-09-07 | 2020-02-21 | 广州田园牧歌农林有限公司 | 微茎尖培养结合热处理获得增城蜜菊脱毒苗的培育方法 |
| CN109997695A (zh) * | 2019-04-09 | 2019-07-12 | 河南中医药大学 | 一种怀菊组织培养快速育苗方法 |
| CN110651717A (zh) * | 2019-11-20 | 2020-01-07 | 四川云辰园林科技有限公司 | 一种菊花苗组培脱毒与快速繁殖的方法 |
| CN111837960A (zh) * | 2020-08-05 | 2020-10-30 | 贵州茗香茶业发展有限公司 | 一种适用于喀斯特地貌金丝黄菊的育种方法 |
| CN114916440A (zh) * | 2022-01-14 | 2022-08-19 | 亳州兴禾农业发展有限公司 | 一种亳菊的组培培养基及其组培方法 |
| CN116806696A (zh) * | 2023-05-06 | 2023-09-29 | 南昌和博生态农业开发有限公司 | 一种一朵一泡绣球黄菊育种、种植及菊花茶的制备方法 |
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