CN103782912B - 红桂木组织培养培养基 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种红桂木组织培养培养基,该培养基包括继代培养基和生根培养基。首次采用组织培养的方式进行种苗无性繁殖,该技术比通过种子繁殖更快,可达到规模化生产的要求,而且能有效保持种苗的优良遗传性状,保证了种苗的品质和质量。

Description

红桂木组织培养培养基
技术领域
本发明涉及组织培养基,尤其涉及一种红桂木组织培养培养基。
背景技术
红桂木(Artocarpus nitidus ssp.Lingnanensis(Merr.)Jarr.)又名狗果树、大叶胭脂、胭脂木等,属桑科桂木属常绿乔木,喜高温多湿气候,较耐旱,主要分布于广东中部至西南部、广西、海南、福建南部。其种子富含红桂木凝集素,可用于疾病检测治疗,临床应用潜力很大;果酸甜可口,可生津止渴,开胃化痰,消食敛气,药用价值颇高。木材坚硬,纹理通直,可供建筑、家具及器具等用。红桂木树形优美,枝叶繁茂,树干通直,抗污染及抗火性较强,适应性亦强,绿化效果好,苗木供不应求,特别是中大径级苗木更为匮乏,是一种应用前景广阔的优良乡土树种。
红桂木常用种子播种育苗,繁殖较慢,满足不了市场的需求,通过组织培养育苗则能提高繁殖速度,保证苗木质量,达到规模化生产的要求。有关红桂木树的组培育苗技术方面的研究目前还未见有报道。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足,提供一种红桂木组织培养培养基,该培养基包括继代培养基和生根培养基,其中:
每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下:
(1)大量元素:硝酸钾1260mg/L、硝酸铵1320mg/L、二水氯化钙440mg/L、七水硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L;
(2)微量元素:四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L;
(3)有机物:肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇(VB6)0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素(VB1)0.1mg/L、半胱氨酸15mg/L;
(4)植物生长调节剂:6-苄基腺嘌呤0.3-1.0mg/L、萘乙酸0.1-0.2mg/L;
余量为蒸馏水。
每升(L)生根培养基的组分及各组分的含量如下:
(1)大量元素:硝酸钾475mg/L、硝酸铵412.5mg/L、二水氯化钙110mg/L、七水硫酸镁92.5mg/L、磷酸二氢钾42.5mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L;
(2)微量元素:四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L;
(3)有机物:肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇(VB6)0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素(VB1)0.1mg/;
(4)植物生长调节剂:ABT6号0.4-0.6mg/L、吲哚乙酸0.1-0.3mg/L;
余量为蒸馏水。
本发明红桂木组织培养基中的继代、生根培养基的配制方法为:
1母液的配制与保存
1.1为便于取样,宜先配制各种母液,分为大量元素母液、微量元素母液、有机物母液和各种植物生长调节剂母液。蔗糖、琼脂不宜配成母液,需要时直接称样;
1.2大量元素母液浓度成100倍溶液,有机物、微量元素母液配成200倍溶液,植物生长调节试剂母液的浓度配成1mg/ml;
1.3母液选用无菌的蒸馏水、去离子水或超纯水配制,大量生产时用煮沸过的水;
1.4配制大量元素母液时,每个组分应单独溶解,后按氮、钙、镁、磷的顺序逐个混合,否则容易引起沉淀;
1.5微量元素、有机物、植物生长调节剂母液应用棕色瓶装好并置于冰箱中保存;
1.6母液配制后应及时使用,贮存时间不宜超过1个月;
1.7发现母液有沉淀,或有微生物生长,或有藻类生长,应废弃不用。
2培养基的配制
2.1依照培养基配方,按比例量取各种母液;
2.2在定量容器内放入准备配制培养基总量的约1/2以上的纯净水,并加入适量的糖,然后边搅拌边逐一加入所需量的母液;
2.3琼脂可加热熔化后加入,如有搅拌设备时也可直接加入琼脂粉,然后用纯净水补足所需配制培养基的总量,搅拌均匀即可;
2.4培养基中的糖,在大量组培苗生产中,一般可用市售白糖,但最好是用蔗糖而不要用甜菜糖;
2.5用1.0摩尔/升的盐酸或1.0摩尔/升的氢氧化钠调节培养基的pH值至5.8;
2.6配制好的培养基要尽快分装到培养容器中,以免培养基凝固或变稠而难以分装;
2.7分装培养基时应注意避免培养基粘在瓶口上,如果粘有培养基,在盖瓶盖或瓶塞前必须用干净纱布擦净瓶口。
3培养基消毒灭菌
3.1将分装好的培养基装于高压灭菌锅内消毒;
3.2加热初期,当消毒锅消毒室的气压达0.05Mpa时,打开冷凝阀,排尽消毒室内冷空气;
3.3当消毒室内气压达到0.11Mpa、温度达121℃时,开始计时,保持温度与压力消毒15-20分钟;
3.4关闭加热电源开关,按慢排气方式排放热气,待消毒室内的气压降至大气压时打开消毒锅盖或门,取出培养基;
3.5培养基应置于空气少流动和少灰尘的干净环境冷却,否则在降温进气过程中导致霉菌孢子进入培养器皿,产生霉菌污染。
4培养基储藏
4.1培养基应尽量现配现用;
4.2可在空气干净且不流动的环境短时间储藏培养基,但储藏超过1个月的培养基应废弃不用。
本发明红桂木组织培养的方法为:
1.无菌芽的获取
胭脂树果实为肉质果,7-8月份成熟,当果实由青色转为黄色带红,果肉变软时采摘,将果实揉搓,用清水洗净后得种子,并将其及时置于阴凉处晾干,剥去外壳。在超净台上用75%酒精浸泡消毒10s,无菌水漂洗2-3次,再用0.1%升汞溶液消毒15min,无菌水漂洗5次。将经消毒处理的种子接种在诱导培养基上进行初始培养,诱导种子发芽以获取无菌材料。外植体初次培养时,需全暗培养10天左右,再放到弱光下进行培养,大约经过20天左右的种子开始萌芽,然后再移至见光的地方培养。
2.芽的增殖培养
将诱导获得的无菌芽接种至继代培养基上进行芽的继代增殖,一般40天继代一次,继代材料均放在培养室内培养,培养室温度为(25±2)℃,光照12h.d-1,光照度2000lx。
3.生根的诱导
芽条长至约2-3cm时,将较健壮的芽苗由丛生芽上单个切下转至生根培养基上诱导生根,其余芽苗转至继代培养基上继续进行增殖培养。生根培养需要在弱光下培养15天左右,此时小苗的基部形成白色突起,并逐渐伸长,20天后可形成明显根系,逐渐长成完整的小植株,此时期宜逐步增加光照使小苗变得粗壮。
4.生根苗的移栽
待生根小苗充分木质化,叶片舒展,叶色浓绿,茎轴伸长,苗高约3-4cm时即可进行大棚移栽。移栽时先取出小苗,洗净基部的培养基后,移栽于经0.1%高锰酸钾消毒过用营养袋装好的育苗基质上,移栽后浇透定根水,保持一定的温度和湿度,并要定期进行喷药进行防病处理。
本发明的优点是:
1、首次采用组织培养的方法对红桂木进行苗木繁殖,该技术比通过种子繁殖更快,可达到规模化生产的要求,而且能有效保持母本的优良遗传性状,保证了种苗的品质和质量;
2、以继代培养基进行红桂木增殖培养,培养温度保持在25-28℃左右,继代苗年繁殖系数为3.512,继代苗分化芽多,芽健壮,生长整齐,叶色浓绿;
3、用生根培养基进行生根苗培养生根率达92.0%,温度为25-28℃时,培养20天左右可出根,根系发达,平均出根量有3-5条,40天可移栽,移栽成活率达91.0%。
具体实施方式
下面以实施例对本发明作进一步说明,但本发明并不局限于这些实施例。
实施例1:
红桂木组织培养的培养基配方,该培养基包括继代培养基和生根培养基,其中:
每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下:
(1)大量元素:硝酸钾1260mg/L、硝酸铵1320mg/L、二水氯化钙440mg/L、七水硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L;
(2)微量元素:四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L;
(3)有机物:肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇(VB6)0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素(VB1)0.1mg/L、半胱氨酸15mg/L;
(4)植物生长调节剂:6-苄基腺嘌呤1.0mg/L、萘乙酸0.2mg/L;
余量为蒸馏水。
(1)大量元素:硝酸钾475mg/L、硝酸铵412.5mg/L、二水氯化钙110mg/L、七水硫酸镁92.5mg/L、磷酸二氢钾41mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L;
(2)微量元素:四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L;
(3)有机物:肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇(VB6)0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素(VB1)0.1mg/;
(4)植物生长调节剂:ABT6号0.5mg/L、吲哚乙酸0.3mg/L;
余量为蒸馏水。
实施例2:
红桂木组织培养的培养基配方,该培养基包括继代培养基和生根培养基,其中:
每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下:
(1)大量元素:硝酸钾1260mg/L、硝酸铵1320mg/L、二水氯化钙440mg/L、七水硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L;
(2)微量元素:四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L;
(3)有机物:肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇(VB6)0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素(VB1)0.1mg/L、半胱氨酸15mg/L;
(4)植物生长调节剂:6-苄基腺嘌呤0.5mg/L、萘乙酸0.15mg/L;
余量为蒸馏水。
(1)大量元素:硝酸钾475mg/L、硝酸铵412.5mg/L、二水氯化钙110mg/L、七水硫酸镁92.5mg/L、磷酸二氢钾41mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L;
(2)微量元素:四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L;
(3)有机物:肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇(VB6)0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素(VB1)0.1mg/;
(4)植物生长调节剂:ABT6号0.4mg/L、吲哚乙酸0.2mg/L;
余量为蒸馏水。
实施例3:
红桂木组织培养的培养基配方,该培养基包括继代培养基和生根培养基,其中:
每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下:
(1)大量元素:硝酸钾1260mg/L、硝酸铵1320mg/L、二水氯化钙440mg/L、七水硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L;
(2)微量元素:四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L;
(3)有机物:肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇(VB6)0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素(VB1)0.1mg/L、半胱氨酸15mg/L;
(4)植物生长调节剂:6-苄基腺嘌呤0.3mg/L、萘乙酸0.1mg/L;
余量为蒸馏水。
(1)大量元素:硝酸钾475mg/L、硝酸铵412.5mg/L、二水氯化钙110mg/L、七水硫酸镁92.5mg/L、磷酸二氢钾41mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L;
(2)微量元素:四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L;
(3)有机物:肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇(VB6)0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素(VB1)0.1mg/;
(4)植物生长调节剂:ABT6号0.6mg/L、吲哚乙酸0.1mg/L;
余量为蒸馏水。
通过以上实施例对红桂木进行组培繁殖,用继代培养基进行增殖培养,培养温度保持在25-28℃左右,继代苗年繁殖系数为3.512,继代苗分化芽多,芽健壮,生长整齐,叶色浓绿;用生根培养基进行生根苗培养生根率达92.0%,温度为25-28℃时,培养20天左右可出根,根系发达,平均出根量有3-5条,40天可移栽,移栽成活率达91.0%。采用本发明的技术比通过种子繁殖更快,可达到规模化生产的要求,而且能有效保持母本的优良遗传性状,保证了种苗的品质和质量。

Claims (1)

1.一种红桂木组织培养的培养基,该培养基包括继代培养基和生根培养基,其特征在于:
每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下:
(1)大量元素:硝酸钾1260mg/L、硝酸铵1320mg/L、二水氯化钙440mg/L、七水硫酸镁370mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L;
(2)微量元素:四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L;
(3)有机物:肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇(VB6)0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素(VB1)0.1mg/L、半胱氨酸15mg/L;
(4)植物生长调节剂:6-苄基腺嘌呤0.3-1.0mg/L、萘乙酸0.1-0.2mg/L;
余量为蒸馏水;
每升(L)生根培养基的组分及各组分的含量如下:
(1)大量元素:硝酸钾475mg/L、硝酸铵412.5mg/L、二水氯化钙110mg/L、七水硫酸镁92.5mg/L、磷酸二氢钾41mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L;
(2)微量元素:四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L;
(3)有机物:肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇(VB6)0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素(VB1)0.1mg/;
(4)植物生长调节剂:ABT6号0.4-0.6mg/L、吲哚乙酸0.1-0.3mg/L;
余量为蒸馏水。
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Granted publication date: 20150422

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