CN105191795B - 一种金叶水杉组培快繁方法 - Google Patents

一种金叶水杉组培快繁方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种金叶水杉组培快繁方法，由于金叶水杉嫁接繁殖的繁殖系数低，扦插和压条繁殖的苗木易老化，现有组培方法存在污染率高、繁殖系数低，方法不稳定等问题，为了解决以上问题，金叶水杉组培快繁方法包括如下步骤：外植体消毒、初代培养、继代培养、生根壮苗培养、炼苗移栽，在不同培养阶段使用不同的培养基组成，并采用合理的炼苗措施，从而建立金叶水杉组培快繁技术体系。采用本方法得到的再生植株，植物学性状稳定，重复性良好，增殖系数达到4‑6，生根率达72%，移栽成活率达96%，能进行大规模商品化育苗生产。

Description

一种金叶水杉组培快繁方法
技术领域
本发明属于植物组织培养研究领域，具体涉及一种金叶水杉组培快繁方法。
背景技术
金叶水杉（Metasequoia glyptostroboides‘Gold Rush’）别名黄金杉，为杉科水杉属植物，原产于日本，是近几年发展起来的一个水杉栽培变种。金叶水杉树形端庄、生长迅速，树冠常年呈金色，叶片在春、夏、秋三季始终保持鲜艳亮丽的黄色。金叶水杉对环境小气候及空气湿度的要求不高，抗逆性强，耐寒耐热，耐水湿，管理容易，是城市绿化不可多得的彩叶类大型乔木，在辽宁、浙江、四川等地均有引种，具有广阔的发展前景。
目前，金叶水杉生产中一般采用扦插、嫁接和压条的繁殖方法培育种苗，扦插繁殖易受扦插基质、温湿度和植物生长调节剂的影响，扦插苗和压条苗根系均为不定根，吸收能力差，形成的树体直立性差，顶端优势不明显，生长缓慢；嫁接繁殖是现在金叶水杉主要的繁殖方法，但嫁接方法易受季节和地域限制，只能在春、秋两季进行，操作复杂，繁殖系数低，小苗生长速度不一，管理繁杂，不适宜批量、规模化繁殖。因此，在生产中如果能筛选出金叶水杉组培快繁方法，既可简化繁殖过程，又可迅速扩大苗木数量，满足市场需求，国内外有关金叶水杉组培研究鲜有报道，龚维红等研究发现初代培养在春、秋两季污染率达60%以上，夏季达85%以上，增殖系数只有1.8，远低于组培增殖系数3.5的常规要求。
发明内容
本发明提供一种金叶水杉组培快繁方法，目的在于解决现有技术存在的问题，降低污染率，使增殖系数达到常规要求，其特征在于包括以下步骤：
1. 一种金叶水杉组培快繁方法的步骤为：
（1）外植体采集及消毒：选取金叶水杉春季萌发的新稍幼茎，剪成4～5cm茎段用清水冲洗1～2h，转入超净工作台中，用75%乙醇溶液消毒40s，无菌水冲洗5～6次，用2%次氯酸钠溶液消毒12min，用无菌水冲洗5～6次；
（2）初代培养：将经步骤（1）消毒后的茎段剪成长约1cm茎段，接种至初代培养基进行丛生芽诱导培养，温度25±1℃，光照12～14 h/d，光照强度1500～2000Lx，空气相对湿度70%～75%；
（3）继代培养：将步骤（2）初代培养得到的丛生芽接种至继代培养基进行增殖培养，温度25±1℃，光照12～14 h/d，光照强度1500～2000Lx，空气相对湿度70%～75%；
（4）生根壮苗培养：将步骤（3）继代培养中获得的植株，选取2～3cm嫩梢从基部切下接种至生根壮苗培养基进行诱导生根，温度25±1℃，光照12～14 h/d，光照强度2500～3000Lx，空气相对湿度70%～75%；
（5）驯化移栽：将苗高6～8cm的壮苗带瓶移至温度20～30℃、空气相对湿度75～85%、光照强度3500～4000Lx、通风良好的环境下，逐渐打开瓶盖，炼苗2～3天，取出组培苗，洗净培养基后栽至苗床中，苗床基质由腐殖土、蛭石、珍珠岩按体积比2：1：1混合而成；
2.前述的一种金叶水杉组培快繁方法，其中所述的初代培养基组成为：GD+1.0～2.0mg/L 2，4-D +0.5～0.8mg/L NAA +4.0～7.0mg/L 6-BA +20～25g/L蔗糖+1.0～1.5g/LAC+5.5～7.0g/L琼脂，pH为5.6～5.8；
3.前述的一种金叶水杉组培快繁方法，其中所述的继代培养基组成为：GD+0.8～1.0mg/L NAA+6.0～8.0mg/L 6-BA+20～25g/L蔗糖+1.0～1.5g/L AC +5.5～7.0g/L琼脂，pH为5.6～5.8；
4.前述的一种金叶水杉组培快繁方法，其中所述的生根壮苗培养基组成为：GD+0.8～1.0mg/L NAA+1.0～3.0mg/L IBA+20～25g/L蔗糖+1.0～1.5g/L AC +5.5～7.0g/L琼脂，pH为5.6～5.8。
有益效果
本发明以春天萌发的嫩枝为外植体，经过初代培养、继代培养、生根培养、炼苗移栽，可得到完整的再生植株。采用本方法得到的再生植株，植物学性状稳定，增殖系数达到4～6，生根率达72%，移栽成活率达96%，快繁方法稳定性好，可用来快速、批量繁殖金叶水杉种苗。
具体实施方式
实施例1
1.外植体采集及消毒：选择金叶水杉外植体时，早春材料比夏季和秋季材料褐变的程度弱，冬季的芽进入深休眠状态，不容易生长，所以最好选用早春的材料作为外植体，将春季选取的新稍幼茎剪成4～5cm茎段用清水冲洗1～2h，转入超净工作台中，用75%乙醇溶液消毒40s，无菌水冲洗5～6次，用2%次氯酸钠溶液消毒12min，用无菌水冲洗5～6次；
2.初代培养：为了阻止褐变对外植体的影响，将经步骤（1）消毒后的茎段剪成长约1cm茎段，放到空白琼脂培养基中培养5-7天，使组织中的酚类物质部分渗入培养基中，切口愈合后再转移至初代培养基进行丛生芽诱导培养，初代培养基组成为：GD+1.0～2.0mg/L2，4-D +0.5～0.8mg/L NAA +4.0～7.0mg/L 6-BA +20～25g/L蔗糖+1.0～1.5g/L AC+5.5～7.0g/L琼脂，pH为5.6～5.8，环境条件为：温度25±1℃，光照12～14 h/d，光照强度1500～2000Lx，空气相对湿度70%～75%；
3.继代培养：将步骤（2）初代培养得到的丛生芽接种至继代培养基进行增殖培养，继代培养基组成为：GD+0.8～1.0mg/L NAA+6.0～8.0mg/L 6-BA+20～25g/L蔗糖+1.0～1.5g/L AC +5.5～7.0g/L琼脂，pH为5.6～5.8，环境条件为：温度25±1℃，光照12～14 h/d，光照强度1500～2000Lx，空气相对湿度70%～75%；
4.生根壮苗培养：将步骤（3）继代培养中获得的植株，选取2～3cm嫩梢从基部切下接种至生根壮苗培养基进行诱导生根，生根壮苗培养基组成为：GD+0.8～1.0mg/L NAA+1.0～3.0mg/L IBA+20～25g/L蔗糖+1.0～1.5g/L AC +5.5～7.0g/L琼脂，pH为5.6～5.8，环境条件为：温度25±1℃，光照12～14 h/d，光照强度2500～3000Lx，空气相对湿度70%～75%，采用此方法增殖系数可达4～6，幼苗生根率可达72%；
5.驯化移栽：将苗高6～8cm的壮苗带瓶移至温度20～30℃、空气相对湿度75～85%、光照强度3500～4000Lx、通风良好的移栽环境下，逐渐打开瓶盖，炼苗2～3天，取出组培苗，洗净培养基后栽至苗床中，苗床基质由腐殖土、蛭石、珍珠岩按体积比2：1：1混合而成，最终幼苗移栽成活率达可达96%。
实施例2
方法及步骤与实施例1相同，不同的是：所述的初代培养基组成为：GD+1.0mg/L 2，4-D +0.5mg/L NAA +4.0mg/L 6-BA +20g/L蔗糖+1.0g/L AC+5.5g/L琼脂，pH为5.8；所述继代培养基组成为：GD+0.8mg/L NAA+6.0mg/L 6-BA+20g/L蔗糖+1.0g/L AC +5.5g/L琼脂，pH为5.8；所述生根培养基组成为：GD+0.8mg/L NAA+1.0mg/L IBA+20g/L蔗糖+1.0g/L AC +5.5g/L琼脂，pH为5.8。
实施例3
方法及步骤与实施例1相同，不同的是：所述的初代培养基组成为：GD+2.0mg/L 2，4-D +0.8mg/L NAA +7.0mg/L 6-BA +25g/L蔗糖+1.5g/L AC+7.0g/L琼脂，pH为5.6；所述继代培养基组成为：GD+1.0mg/L NAA+8.0mg/L 6-BA+25g/L蔗糖+1.5g/L AC+7.0g/L琼脂，pH为5.6；所述生根培养基组成为：GD+1.0mg/L NAA+3.0mg/L IBA+25g/L蔗糖+1.5g/L AC +7.0g/L琼脂，pH为5.6。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围。

Claims (1)

1.一种金叶水杉组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)外植体采集及消毒：选取金叶水杉春季萌发的新稍幼茎，剪成4～5cm茎段用清水冲洗1～2h，转入超净工作台中，用75％乙醇溶液消毒40s，无菌水冲洗5～6次，用2％次氯酸钠溶液消毒12min，用无菌水冲洗5～6次；
(2)初代培养：将经步骤(1)消毒后的茎段剪成长约1cm茎段，接种至初代培养基进行丛生芽诱导培养，温度25±1℃，光照12～14h/d，光照强度1500～2000Lx，空气相对湿度70％～75％；
(3)继代培养：将步骤(2)初代培养得到的丛生芽接种至继代培养基进行增殖培养，温度25±1℃，光照12～14h/d，光照强度1500～2000Lx，空气相对湿度70％～75％；
(4)生根壮苗培养：将步骤(3)继代培养中获得的植株，选取2～3cm嫩梢从基部切下接种至生根壮苗培养基进行诱导生根，温度25±1℃，光照12～14h/d，光照强度2500～3000Lx，空气相对湿度70％～75％；
(5)驯化移栽：将苗高6～8cm的壮苗带瓶移至温度20～30℃、空气相对湿度75～85％、光照强度3500～4000Lx、通风良好的环境下，逐渐打开瓶盖，炼苗2～3天，取出组培苗，洗净培养基后栽至苗床中，苗床基质由腐殖土、蛭石、珍珠岩按体积比2：1：1混合而成；
步骤(2)所述的初代培养基组成为：GD+1.0～2.0mg/L2，4-D+0.5～0.8mg/LNAA+4.0～7.0mg/L6-BA+20～25g/L蔗糖+1.0～1.5g/LAC+5.5～7.0g/L琼脂，pH为5.6～5.8；
步骤(3)所述的继代培养基组成为：GD+0.8～1.0mg/LNAA+6.0～8.0mg/L6-BA+20～25g/L蔗糖+1.0～1.5g/LAC+5.5～7.0g/L琼脂，pH为5.6～5.8；
步骤(4)所述的生根壮苗培养基组成为：GD+0.8～1.0mg/LNAA+1.0～3.0mg/LIBA+20～25g/L蔗糖+1.0～1.5g/LAC+5.5～7.0g/L琼脂，pH为5.6～5.8。
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