CN104335903B - 一种促进白及快速繁殖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明建立了一种白及种子的组织培养和快速繁殖体系，以白及种子为外材料，依次经过硕果播种、继代培养以及生根培养后得到完整植株。本发明的方法操作容易，生产成本低，不污染环境，可以实现规模化生产。通过本发明培育出的白及种苗，其遗传性状稳定，具备包括不变性、投入少、产出高、周期短在内的诸多优势。
Description
技术领域
本发明涉及药用植物种植领域，尤其涉及一种促进白及快速繁殖的方法。
背景技术
白及(Bletilla Striata(Thunb.)Reichb.f.)是一味传统中药，始载于《神农本草经》：“主痈肿，恶创，败疽，伤阴，死肌，胃中邪气，赋风，鬼击，痱缓，不收”。李时珍曰：“其根白色，连及而生，故曰白及”，能收敛止血，消肿生肌；治肺结核咳血，支气管扩张咯血、胃溃疡吐血、尿血、便血等症。外用治外伤出血、烧烫伤、手足皲裂等症。现代研究表明：白及具有止血，保护胃黏膜，抗菌、抗真菌，防癌及抗癌，促进伤口愈合等作用，在生物医药、保健食品、纺织印染、特种涂料和日用化工等方面有巨大的商业利用价值。
由于白及人工栽培量并不大，目前的市场供应仍主要依靠采挖野生白及。2007年市场总需求量达到了1500吨。由于白及市场需求急剧增加，野生资源逐年锐减。据从药材公司和药材收购商走访后估算，2012年白及产量为：主产区贵州约有100吨，安徽大约有50吨左右，云南约有100吨，广西约有55吨，其余地区约50吨，总产量约有400吨，而2012年白及的市场总需求量达到了2000吨，市场严重缺货，与市场发展相反的是，野生白及资源蕴藏量每年正以20～30％的速度递减。
本发明采用现代生物技术，采取种子培养模式，规模化生产种苗，得到优质的整齐的白及种苗，解决白及人工种植的种苗问题，为白及的发展做出贡献。
发明内容
为了解决背景技术中存在的白及生长慢，继代多次会变异、玻璃化、种质衰退等问题，本发明提供了一种促进白及快速繁殖的方法，其技术方案如下：
1)硕果播种：在白及授粉20周后，取硕果，在流水下清洗干净，置于浓度为75-80％的乙醇溶液浸泡30-40秒，然后置于浓度为1-1.2％的升汞溶液中消毒15-20分钟，无菌水清洗5-6遍，在灭菌盘内利用手术刀切开硕果，取出种子，播种于硕果播种基中，其中硕果播种基是以MS为基本培养基附加：6-苄基腺嘌呤0.07-5.0mg/L，萘乙酸0.02-3.75mg/L，异戊稀基腺嘌呤0.2-2.0mg/L、2，4-二氯苯氧乙酸0.2-3.0mg/L、茶多酚5-30.0mg/L、香蕉2％-20％、椰子汁5％-30％、蔗糖2％-30％、琼脂3-6g/L，PH值为5.6.培养温度为29-32℃，光照强度为2100-2500lux，光照时间为14-16小时/天，培养16-20天后形成白及拟原球茎；
2)白及拟原球茎继代培养：将步骤1)获得的大量的白及拟原球茎置于继代培养基中培养，其中继代培养基是按照以下的原料比例制备而成2，MS-H为基本培养基附加6-苄基腺嘌呤0.2-5.0mg/L，吲哚乙酸0.1-10.0mg/L，异戊稀基腺嘌呤0.2-2.0mg/L、吲哚丁酸0.1-3.0mg/L、茶多酚5-30.0mg/L、香蕉2％-20％、椰子汁5％-30％、活性炭0.2-0.4％、蔗糖2％-30％、琼脂3-6g/L，PH值为5.6.培养温度为29-32℃，培养时间为14-16小时/天，光照强度为100-2500lux，62-70天左右可获得2cm左右高度的白及组培分化苗；
3)白及组培分化苗的生根培养：将步骤2)中获得的大量的白及分化苗移栽到生根培养基，其中生根培养基是按照以下的原料比例制备而成，1/2MS为基本培养基附加萘乙酸0.2-5.0mg/L，吲哚乙酸0.1-10.0mg/L，异戊稀基腺嘌呤0.2-2.0mg/L、吲哚丙酸0.5-3.0mg/L、茶多酚5-30.0mg/L、香蕉2％-20％、椰子汁5％-30％、蔗糖2％-30％、琼脂3-6g/L，活性炭0.2-0.4％，PH5.6，培养温度为28℃，光照强度2100-2500lux，光照时间为14-16小时/天的条件下培养62-70天后，把组培苗移到自然光下培养，25-28天后可得到具有3-4条根的白及生根组培苗；
4)炼苗与移栽：清洗掉步骤3)中得到的白及生根组培苗根部的培养基，晾干水汽，将白及生根组培苗带根的完整植株移栽到带基质的苗床上，待1-2个月后白及小苗生长稳定，长出新的根和芽就可移栽到种植大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，光照强度为3000-3500lux，湿度控制在50-60％，温度控制在20-25℃。
优选的是，所述的促进白及快速繁殖的方法，其特征在于，步骤1)中的硕果播种基为：MS为基本培养基附加：6-苄基腺嘌呤2-5.0mg/L，萘乙酸0.05-3.75mg/L、异戊稀基腺嘌呤1-2.0mg/L、2，4-二氯苯氧乙酸1-3.0mg/L、茶多酚8-25.0mg/L、香蕉5％-10％、椰子汁5％-20％、蔗糖2％-15％、琼脂3-6g/L，PH值为5.6。
优选的是，所述的促进白及快速繁殖的方法，其特征在于，步骤2)中继代培养基为：MS-H为基本培养基附加6-苄基腺嘌呤2.0-5.0mg/L，吲哚乙酸3-10.0mg/L，异戊稀基腺嘌呤0.5-2.0mg/L、吲哚丁酸1.0-3.0mg/L、茶多酚5-25mg/L、香蕉2％-10％、椰子汁5％-25％、活性炭0.2-0.4％、蔗糖2％-25％、琼脂3-6g/L，PH值为5.6。
优选的是，所述的促进白及快速繁殖的方法，其特征在于，步骤3)中的生根培养基为：1/2MS为基本培养基附加萘乙酸0.3-5.0mg/L，吲哚乙酸2.0-10.0mg/L，异戊稀基腺嘌呤0.5-2.0mg/L、吲哚丙酸1-3.0mg/L、茶多酚5-25.0mg/L、香蕉2％-15％、椰子汁5％-25％、蔗糖2％-22％、琼脂3-6g/L，活性炭0.2-0.4％，PH5.6。
本发明的有益效果：
1、采用生物克隆技术对白及进行组培快速繁殖，通过种子的无菌繁殖，在短时间内获得大量的优质种苗，显著提高了白及传统的繁殖系数，改进了传统的假鳞茎繁殖方法，为大规模的生产提供了基础保障，同时提高了经济效益。
2、利用本技术，白及组培快繁系数可达50倍，在培养过程中控制好条件，无需壮苗即可获得大量健壮的白及组培苗。
3、本技术后期生根培养利用自然光培养，节省了大量的电能，节约了成本，同时又可获得优质的白及组培生根苗，移栽基质成活率98％以上，基本无死亡，高效，节能，节约的实现了白及组培苗的产业化生产，为保护资源，合理利用自然资源提供了保障。
4、培养基的优选，由基本培养基配合不同浓度激素再添加不同的有机物和茶多酚组成在现所使用的培养基，其中添加的茶多酚作用于菌体细胞，能逐步破坏其细胞壁的完整性，使得碱性磷酸酶渗出，继而使细胞膜的通透性增强，导致金属离子，蛋白质的渗漏使细胞代发生紊乱，逐渐破坏细胞结构，从而起到抑菌的作用，香蕉、椰子汁和土豆泥和的加入引用天然符合物，促愈伤组织，促进种苗茁壮成长。经过多次尝试的基础上，按照一定的原则筛选出来的对白及具有很好诱导，能在保持原植物的优良特性情况下，不变异情况下，增值率高，生长快的优良培养基
具体实施方式
实施例1
1)硕果播种：在白及授粉20周后，取硕果，在流水下清洗干净，利用75％乙醇浸泡30秒，浓度为1％的升汞消毒15分钟，无菌水清洗5遍，在灭菌盘内利用手术刀切开硕果，取出种子，播种于适当的培养基中，培养温度为29℃，光照强度为2100lux，光照时间为14小时/天，培养16天后可见白及拟原球茎发出，其中培养基为MS为基本培养基附加：6-苄基腺嘌呤2mg/L，萘乙酸0.05mg/L、异戊稀基腺嘌呤1mg/L、2，4-二氯苯氧乙酸1mg/L、茶多酚10mg/L、香蕉5％、椰子汁10％、蔗糖2％、琼脂3g/L，PH值为5.6；
2)白及拟原球茎的继代培养：将步骤1)获得的大量的白及拟原球茎置于MS-H为基本培养基附加6-苄基腺嘌呤2.0mg/L，吲哚乙酸3mg/L，异戊稀基腺嘌呤0.5mg/L、吲哚丁酸1.0mg/L、茶多酚5mg/L、香蕉5％、椰子汁5％％、活性炭0.2％、蔗糖2％％、琼脂3g/L，PH值为5.6的培养基中培养，培养温度为29℃，培养时间为14小时/天，光照强度为2100lux，44天左右可获得2cm左右高度的整齐的白及组培分化苗；
3)白及分化苗生根培养，将步骤2)获得的大量的白及分化苗移栽到生根培养基，培养温度为29℃，，光照强度2500lux，光照时间为14小时/天的条件下培养40天后，把组培苗移到自然光下培养，40天后可得到具有4条根的白及生根组培苗，其中生根培养基为：1/2MS为基本培养基附加萘乙酸0.3mg/L，吲哚乙酸2.0mg/L，异戊稀基腺嘌呤0.5mg/L、吲哚丙酸1mg/L、茶多酚5mg/L、香蕉2％、椰子汁5％、蔗糖2％、琼脂3g/L，活性炭0.2-0.4％，PH5.6；
4)炼苗与移栽：清洗掉步骤3)中得到的白及生根组培苗根部的培养基，晾干水汽，将白及生根组培苗带根的完整植株移栽到带基质的苗床上，待2个月后白及小苗生长稳定，长出新的根和芽就可移栽到种植大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，光照强度为3200lux，湿度控制在60％，温度控制在20℃。
实施例2
1)硕果播种：在白及授粉20周后，取硕果，在流水下清洗干净，利用80％乙醇浸泡40秒，浓度为1.2％的升汞消毒15分钟，无菌水清洗6遍，在灭菌盘内利用手术刀切开硕果，取出种子，播种于适当的培养基中，培养温度为30℃，光照强度为2200lux，光照时间为16小时/天，培养20天后可见白及拟原球茎发出，其中培养基为：MS为基本培养基附加：6-苄基腺嘌呤3mg/L，萘乙酸0.075mg/L、异戊稀基腺嘌呤1.5mg/L、2，4-二氯苯氧乙酸2mg/L、茶多酚12mg/L、椰子汁12％、蔗糖2.5％、琼脂3.2g/L；
2)白及拟原球茎的继代培养：将步骤1)获得的大量的白及拟原球茎置于MS-H为基本培养基附加6-苄基腺嘌呤2.0mg/L，吲哚乙酸3mg/L，异戊稀基腺嘌呤0.5mg/L、吲哚丁酸1.0mg/L、茶多酚5mg/L、椰子汁5％、活性炭0.2％、蔗糖2％％、琼脂3g/L，PH值为5.6的培养基中培养，培养温度为30℃，培养时间为16小时/天，光照强度为2200lux，70天左右可获得2cm左右高度的整齐的白及组培分化苗；
3)白及分化苗生根培养，将步骤2)获得的大量的白及分化苗移栽到生根培养基，培养温度为30℃，，光照强度2500lux，光照时间为16小时/天的条件下培养35天后，把组培苗移到自然光下培养，55天后可得到具有4条根的白及生根组培苗，其中生根培养基为：1/2MS为基本培养基附加萘乙酸1.5mg/L，吲哚乙酸2.2mg/L，异戊稀基腺嘌呤0.8mg/L、吲哚丙酸2mg/L、茶多酚10mg/L、椰子15％、蔗糖15％、琼脂4g/L，PH值为5.6；
4)炼苗与移栽：清洗掉步骤3)中得到的白及生根组培苗根部的培养基，晾干水汽，将白及生根组培苗带根的完整植株移栽到带基质的苗床上，待2个月后白及小苗生长稳定，长出新的根和芽就可移栽到种植大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，光照强度为3200lux，湿度控制在60％，温度控制在20℃。
实施例3
1)硕果播种：在白及授粉20周后，取硕果，在流水下清洗干净，利用75％乙醇浸泡35秒，浓度为1.2％的升汞消毒15分钟，无菌水清洗6遍，在灭菌盘内利用手术刀切开硕果，取出种子，播种于适当的培养基中，培养温度为32℃，光照强度为2300lux，光照时间为16小时/天，培养20天后可见白及拟原球茎发出，其中培养基为：MS为基本培养基附加：6-苄基腺嘌呤4mg/L，萘乙酸0.1mg/L、异戊稀基腺嘌呤2mg/L、2，4-二氯苯氧乙酸2.2mg/L、茶多酚12mg/L、香蕉10％、蔗糖2.5％、琼脂3.2g/L；
2)白及拟原球茎的继代培养：将步骤1)获得的大量的白及拟原球茎置于MS-H为基本培养基附加6-苄基腺嘌呤2.0mg/L，吲哚乙酸3mg/L，异戊稀基腺嘌呤0.5mg/L、吲哚丁酸1.0mg/L、茶多酚5mg/L、香蕉5％、活性炭0.2％、蔗糖2％％、琼脂3g/L，PH值为5.6的培养基中培养，培养温度为30℃，培养时间为16小时/天，光照强度为2200lux，55天左右可获得2cm左右高度的整齐的白及组培分化苗；
3)白及分化苗生根培养，将步骤2)获得的大量的白及分化苗移栽到生根培养基，培养温度为30℃，，光照强度2500lux，光照时间为16小时/天的条件下培养35天后，把组培苗移到自然光下培养，50天后可得到具有4条根的白及生根组培苗，其中生根培养基为：1/2MS为基本培养基附加萘乙酸1.5mg/L，吲哚乙酸2.2mg/L，异戊稀基腺嘌呤0.8mg/L、吲哚丙酸2mg/L、茶多酚10mg/L、香蕉15％、蔗糖15％、琼脂4g/L，PH值为5.6；
4)炼苗与移栽：清洗掉步骤3)中得到的白及生根组培苗根部的培养基，晾干水汽，将白及生根组培苗带根的完整植株移栽到带基质的苗床上，待2个月后白及小苗生长稳定，长出新的根和芽就可移栽到种植大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，光照强度为3200lux，湿度控制在60％，温度控制在20℃。
实施例4
1)硕果播种：在白及授粉20周后，取硕果，在流水下清洗干净，利用75％乙醇浸泡35秒，浓度为1.2％的升汞消毒15分钟，无菌水清洗6遍，在灭菌盘内利用手术刀切开硕果，取出种子，播种于适当的培养基中，培养温度为32℃，光照强度为2300lux，光照时间为16小时/天，培养20天后可见白及拟原球茎发出，其中培养基为：MS为基本培养基附加：6-苄基腺嘌呤4mg/L，萘乙酸0.1mg/L、异戊稀基腺嘌呤2mg/L、2，4-二氯苯氧乙酸2.2mg/L、香蕉10％、椰子汁15％，蔗糖2.5％、琼脂3.2g/L；
2)白及拟原球茎的继代培养：将步骤1)获得的大量的白及拟原球茎置于MS-H为基本培养基附加6-苄基腺嘌呤2.0mg/L，吲哚乙酸3mg/L，异戊稀基腺嘌呤0.5mg/L、吲哚丁酸1.0mg/L、香蕉5％、椰子汁10％，活性炭0.2％、蔗糖2％％、琼脂3g/L，PH值为5.6的培养基中培养，培养温度为30℃，培养时间为16小时/天，光照强度为2200lux，60天左右可获得2cm左右高度的整齐的白及组培分化苗；
3)白及分化苗生根培养，将步骤2)获得的大量的白及分化苗移栽到生根培养基，培养温度为30℃，，光照强度2500lux，光照时间为16小时/天的条件下培养35天后，把组培苗移到自然光下培养，35天后可得到具有4条根的白及生根组培苗，其中生根培养基为：1/2MS为基本培养基附加萘乙酸1.5mg/L，吲哚乙酸2.2mg/L，异戊稀基腺嘌呤0.8mg/L、吲哚丙酸2mg/L、香蕉15％、椰子汁10％，蔗糖15％、琼脂4g/L；
4)炼苗与移栽：清洗掉步骤3)中得到的白及生根组培苗根部的培养基，晾干水汽，将白及生根组培苗带根的完整植株移栽到带基质的苗床上，待2个月后白及小苗生长稳定，长出新的根和芽就可移栽到种植大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，光照强度为3200lux，湿度控制在60％，温度控制在20℃。
实施例5
1)硕果播种：在白及授粉20周后，取硕果，在流水下清洗干净，利用75％乙醇浸泡35秒，浓度为1.2％的升汞消毒15分钟，无菌水清洗6遍，在灭菌盘内利用手术刀切开硕果，取出种子，播种于适当的培养基中，培养温度为32℃，光照强度为2300lux，光照时间为16小时/天，培养30天后可见白及拟原球茎发出，其中培养基为：MS为基本培养基附加：6-苄基腺嘌呤4mg/L，萘乙酸0.1mg/L、异戊稀基腺嘌呤2mg/L、2，4-二氯苯氧乙酸2.2mg/L、蔗糖2.5％、琼脂3.2g/L；PH值为5.6；
2)白及拟原球茎的继代培养：将步骤1)获得的大量的白及拟原球茎置于MS-H为基本培养基附加6-苄基腺嘌呤2.0mg/L，吲哚乙酸3mg/L，异戊稀基腺嘌呤0.5mg/L、吲哚丁酸1.0mg/L，活性炭0.2％、蔗糖2％％、琼脂3g/L，PH值为5.6的培养基中培养，培养温度为30℃，培养时间为16小时/天，光照强度为2200lux，70天左右可获得2cm左右高度的整齐的白及组培分化苗；
3)白及分化苗生根培养，将步骤2)获得的大量的白及分化苗移栽到生根培养基，培养温度为30℃，，光照强度2500lux，光照时间为16小时/天的条件下培养45天后，把组培苗移到自然光下培养，65天后可得到具有4条根的白及生根组培苗，其中生根培养基为：1/2MS为基本培养基附加萘乙酸1.5mg/L，吲哚乙酸2.2mg/L，异戊稀基腺嘌呤0.8mg/L、吲哚丙酸2mg/L、蔗糖15％、琼脂4g/L，PH值为5.6；
4)炼苗与移栽：清洗掉步骤3)中得到的白及生根组培苗根部的培养基，晾干水汽，将白及生根组培苗带根的完整植株移栽到带基质的苗床上，待2个月后白及小苗生长稳定，长出新的根和芽就可移栽到种植大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，光照强度为3200lux，湿度控制在60％，温度控制在20℃。
实施例6
1)硕果播种：取白及嫩芽于75％乙醇浸泡30秒，浓度为1％的升汞消毒15分钟，无菌水清洗5遍，在灭菌盘内利用手术刀切开硕果，取出种子，播种于适当的培养基中，培养温度为29℃，光照强度为2100lux，光照时间为14小时/天，培养40天后可见白及拟原球茎发出，其中培养基为：MS为基本培养基附加：6-苄基腺嘌呤2mg/L，萘乙酸0.05mg/L、异戊稀基腺嘌呤1mg/L、2，4-二氯苯氧乙酸1mg/L、茶多酚10mg/L、香蕉5％、椰子汁10％、蔗糖2％、琼脂3g/L；
2)白及拟原球茎的继代培养：将步骤1)获得的大量的白及拟原球茎置于于MS-H为基本培养基附加6-苄基腺嘌呤2.0mg/L，吲哚乙酸3mg/L，异戊稀基腺嘌呤0.5mg/L、吲哚丁酸1.0mg/L、茶多酚5mg/L、香蕉5％、椰子汁5％％、活性炭0.2％、蔗糖2％％、琼脂3g/L，PH值为5.6的培养基中培养，培养温度为29℃，培养时间为14小时/天，光照强度为2100lux，70天左右可获得白及组培分化苗；
3)白及分化苗生根培养，将步骤2)获得的大量的白及分化苗移栽到生根培养基，培养温度为29℃，光照强度2500lux，光照时间为14小时/天的条件下培养50天后，把组培苗移到自然光下培养，80天后可得到具有4条根的白及生根组培苗，其中生根培养基为：1/2MS为基本培养基附加萘乙酸0.3mg/L，吲哚乙酸2.0mg/L，异戊稀基腺嘌呤0.5mg/L、吲哚丙酸1mg/L、茶多酚5mg/L、香蕉2％、椰子汁5％、蔗糖2％、琼脂3g/L，活性炭0.2-0.4％；
4)炼苗与移栽：清洗掉步骤3)中得到的白及生根组培苗根部的培养基，晾干水汽，将白及生根组培苗带根的完整植株移栽到带基质的苗床上，待3个月后白及小苗生长稳定，长出新的根和芽就可移栽到种植大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，光照强度为3200lux，湿度控制在60％，温度控制在20℃。
实施例7
1)硕果播种：取白及嫩芽于75％乙醇浸泡30秒，浓度为1％的升汞消毒15分钟，无菌水清洗5遍，在灭菌盘内利用手术刀切开硕果，取出种子，播种于适当的培养基中，培养温度为29℃，光照强度为2100lux，光照时间为14小时/天，培养40天后可见白及拟原球茎发出，其中培养基为：MS为基本培养基附加：6-苄基腺嘌呤2mg/L，萘乙酸0.05mg/L、异戊稀基腺嘌呤1mg/L、2，4-二氯苯氧乙酸1mg/L、茶多酚10mg/L、香蕉5％、椰子汁10％、蔗糖2％、琼脂3g/L，PH值5.6。
2)白及拟原球茎的继代培养：将步骤1)获得的大量的白及拟原球茎置于MS-H为基本培养基附加6-苄基腺嘌呤2.0mg/L，吲哚乙酸3mg/L，异戊稀基腺嘌呤0.5mg/L、吲哚丁酸1.0mg/L、茶多酚5mg/L、香蕉5％、椰子汁5％％、活性炭0.2％、蔗糖2％％、琼脂3g/L，PH值为5.6的培养基中培养，培养温度为29℃，培养时间为14小时/天，光照强度为2100lux，60天完成一次继代培养，重复继代培养步骤十四次，继代培养到十五次后，将得到的白及分化苗进行生根培养；
3)白及分化苗生根培养，将步骤2)获得的大量的白及分化苗移栽到生根培养基，培养温度为29℃，光照强度2500lux，光照时间为14小时/天的条件下培养30天后，把组培苗移到自然光下培养，30天后可得到具有4条根的白及生根组培苗，其中生根培养基为：1/2MS为基本培养基附加萘乙酸0.3mg/L，吲哚乙酸2.0mg/L，异戊稀基腺嘌呤0.5mg/L、吲哚丙酸1mg/L、茶多酚5mg/L、香蕉2％、椰子汁5％、蔗糖2％、琼脂3g/L，活性炭0.2-0.4％，PH5.6；
4)炼苗与移栽：清洗掉步骤3)中得到的白及生根组培苗根部的培养基，晾干水汽，将白及生根组培苗带根的完整植株移栽到带基质的苗床上，待2个月后白及小苗生长稳定，长出新的根和芽就可移栽到种植大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，光照强度为3200lux，湿度控制在60％，温度控制在20℃。
实施例1-实施例7的组培方法试验数据对比
| 序号 | 出苗时间/天 | 发芽率 | 继代成苗率 | 生根率 | 炼苗成活率 |
| 实施例1 | 200 | 98％ | 96％ | 98％ | 99％ |
| 实施例2 | 240 | 82％ | 80％ | 78％ | 80％ |
| 实施例3 | 220 | 89％ | 88％ | 85％ | 86％ |
| 实施例4 | 210 | 88％ | 86％ | 88％ | 90％ |
| 实施例5 | 270 | 75％ | 72％ | 72％ | 78％ |
| 实施例6 | 360 | 40％ | 41％ | 39％ | 48％ |
| 实施例7 | 1060 | 80％ | 78％ | 78％ | 82％ |
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。
Claims (4)
1.一种促进白芨快速繁殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)白芨硕果播种：在白芨授粉20周后，取硕果，在流水下清洗干净，置于浓度为75-80％的乙醇溶液浸泡30-40秒，然后置于浓度为1-1.2％的升汞溶液中消毒15-20分钟，无菌水清洗5-6遍，在灭菌盘内利用手术刀切开硕果，取出种子，播种于硕果播种基中，其中硕果播种基是以MS为基本培养基附加：6-苄基腺嘌呤0.07-5.0mg/L，萘乙酸0.02-3.75mg/L，异戊稀基腺嘌呤0.2-2.0mg/L、2，4-二氯苯氧乙酸0.2-3.0mg/L、茶多酚5-30.0mg/L、香蕉2％-20％、椰子汁5％-30％、蔗糖2％-30％、琼脂3-6g/L，pH值为5.6培养温度为29-32℃，光照强度为2100-2500lux，光照时间为14-16小时/天，培养16-20天后形成白芨拟原球茎；
2)白芨拟原球茎的继代培养：将步骤1)获得的大量的白芨拟原球茎置于继代培养基中培养，其中继代培养基是按照以下的原料比例制备而成，MS-H为基本培养基附加6-苄基腺嘌呤0.2-5.0mg/L，吲哚乙酸0.1-10.0mg/L，异戊稀基腺嘌呤0.2-2.0mg/L、吲哚丁酸0.1-3.0mg/L、茶多酚5-30.0mg/L、香蕉2％-20％、椰子汁5％-30％、活性炭0.2-0.4％、蔗糖2％-30％、琼脂3-6g/L，pH值为5.6培养温度为29-32℃，培养时间为14-16小时/天，光照强度为100-2500lux，62-70天获得2cm高度的白芨组培分化苗；
3)白芨组培分化苗的生根培养：将步骤2)中获得的大量的白芨分化苗移栽到生根培养基，其中生根培养基是按照以下的原料比例制备而成，1/2MS为基本培养基附加萘乙酸0.2-5.0mg/L，吲哚乙酸0.1-10.0mg/L，异戊稀基腺嘌呤0.2-2.0mg/L、吲哚丙酸0.5-3.0mg/L、茶多酚5-30.0mg/L、香蕉2％-20％、椰子汁5％-30％、蔗糖2％-30％、琼脂3-6g/L，活性炭0.2-0.4％，pH5.6，培养温度为28℃，光照强度2100-2500lux，光照时间为14-16小时/天的条件下培养62-70天后，把组培苗移到自然光下培养，25-28天后得到具有3-4条根的白芨生根组培苗；
4)炼苗与移栽：清洗掉步骤3)中得到的白芨生根组培苗根部的培养基，晾干水汽，将白芨生根组培苗带根的完整植株移栽到带基质的苗床上，待1-2个月后白芨小苗生长稳定，长出新的根和芽就移栽到种植大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，光照强度为3000-3500lux，湿度控制在50-60％，温度控制在20-25℃。
2.根据权利要求1所述的促进白芨快速繁殖的方法，其特征在于，步骤1)中的硕果播种基为：MS为基本培养基附加：6-苄基腺嘌呤2-5.0mg/L，萘乙酸0.05-3.75mg/L、异戊稀基腺嘌呤1-2.0mg/L、2，4-二氯苯氧乙酸1-3.0mg/L、茶多酚8-25.0mg/L、香蕉5％-10％、椰子汁5％-20％、蔗糖2％-15％、琼脂3-6g/L，pH值为5.6。
3.根据权利要求1所述的促进白芨快速繁殖的方法，其特征在于，步骤2)中继代培养基为：MS-H为基本培养基附加6-苄基腺嘌呤2.0-5.0mg/L，吲哚乙酸3-10.0mg/L，异戊稀基腺嘌呤0.5-2.0mg/L、吲哚丁酸1.0-3.0mg/L、茶多酚5-25mg/L、香蕉2％-10％、椰子汁5％-25％、活性炭0.2-0.4％、蔗糖2％-25％、琼脂3-6g/L，pH值为5.6。
4.根据权利要求1所述的促进白芨快速繁殖的方法，其特征在于，步骤3)中的生根培养基为：1/2MS为基本培养基附加萘乙酸0.3-5.0mg/L，吲哚乙酸2.0-10.0mg/L，异戊稀基腺嘌呤0.5-2.0mg/L、吲哚丙酸1-3.0mg/L、茶多酚5-25.0mg/L、香蕉2％-15％、椰子汁5％-25％、蔗糖2％-22％、琼脂3-6g/L，活性炭0.2-0.4％，pH5.6。
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