CN105432466B - 一种海桐体细胞胚胎发生和植株再生的方法 - Google Patents

一种海桐体细胞胚胎发生和植株再生的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105432466B
CN105432466B CN201510779403.5A CN201510779403A CN105432466B CN 105432466 B CN105432466 B CN 105432466B CN 201510779403 A CN201510779403 A CN 201510779403A CN 105432466 B CN105432466 B CN 105432466B
Authority
CN
China
Prior art keywords
culture
explant
embryo
pittosporum tobira
obtains
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201510779403.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105432466A (zh
Inventor
李刚
缪剑华
唐美琼
李正文
周琼
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants
Original Assignee
Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants filed Critical Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants
Priority to CN201510779403.5A priority Critical patent/CN105432466B/zh
Publication of CN105432466A publication Critical patent/CN105432466A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105432466B publication Critical patent/CN105432466B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01HNEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008Methods for regeneration to complete plants

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

一种海桐体细胞胚胎发生和植株再生的方法,包括如下步骤:(1)取海桐新鲜种子为外植体,进行消毒;(2)将消毒外植体置于MS基本培养基中诱导无菌试管苗;(3)将所述无菌试管苗的子叶置于MS胚性愈伤诱导培养基中,诱导胚性愈伤组织;(4)将所述胚性愈伤组织置于MS胚状体萌发培养基中,诱导再生植株;(5)将所述再生植株置于MS壮苗培养基中培养,获得完整小苗;(6)将所述完整小苗组培瓶瓶盖打开,室温炼苗4‑7d,取出幼苗并洗净根部培养基,移栽到浇透水的蛭石基质中,室温生长一个月后,移栽到大田,每天早晚各喷雾一次。采用本发明能够在短时间内获得大量、优质海桐种苗,移栽成活率在95%以上,有效解决规模化育苗问题,也为实现海桐转基因研究、生物技术育种等提供了基础。

Description

一种海桐体细胞胚胎发生和植株再生的方法
技术领域
本发明涉及一种植物繁殖方法,特别是一种海桐体细胞胚胎发生和植株再生方法。
背景技术
海桐(Pittosporum tobira(Thunb.)Ait))主要分布于长江流域以南各省区,海桐属常绿灌木或小乔木,对二氧化硫、氯气、氟化氢等有害气体有较强抗性,是国内外首次发现各部位均具有较强化感作用的园林绿化植物。海桐枝叶,异名七里香叶(台湾),具有解毒、杀虫的功能,主要用于治疗疥疮、肿毒(国家中医药管理局《中华本草》编委会编,中华本草4,上海科学技术出版社,1999:65-66)。
现代研究表明,海桐的根、茎、叶、花、果实和种子中均含有类胡萝卜素、萜类等复杂化学成分,表现抗菌、抗肿瘤、杀虫、神经保护、除草等多种生物活性和很高的药用价值,海桐具有保护谷氨酸诱导的神经毒性的活性,其枝叶可以止血、解毒、抗菌,根可以散瘀止痛、祛风活络,果实总皂苷能抑制肿瘤细胞的增生,种子具有固精、涩肠、保护心血管系统、预防冠心病等功效,因此,海桐具有医药工业、食品(保健型食用油)、日用化妆品等广泛开发前景,其种植需求量日益增长(孙卓,刘红星与黄初升,海桐植物化学成分以及生物活性的研究,化工技术与开发,2014(01),22-26)。
海桐的传统繁育方法为压条、扦插和播种,但压条繁殖既破坏树形又难以大量繁殖,扦插繁殖的繁殖系数受生根效率的影响,且根系不发达,株型不丰满;经长期栽培,海桐雄蕊常表现退化而不育,结实率低,播种种源有限,且受生理休眠影响,海桐种子在自然条件下难以萌发,种子成苗率低(米银法,宋乾江与李巍,不同浓度NAA和IBA处理对海桐扦插生根的影响,山东农业科学,2011(08):44-47;),(唐安军与柳建平,海桐种子的休眠解除与萌发,种子,2011(05):46-49;),(http://frps.eflora.cn/frps/Pittosporum:中国植物志第35(2)卷,海桐花科海桐花属3,海桐)。
发明内容
本发明的目的是提供一种海桐体细胞胚胎发生和植株再生的方法,能够解决海桐种子在 自然条件下难以萌发,种子成苗率低的问题。
本发明的技术方案是:一种海桐体细胞胚胎发生和植株再生的方法,包括以下步骤:
(1)外植体的选择与消毒:取海桐新鲜种子作为外植体,依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min,线状自来水冲洗15-30min,添加了2-3滴吐温-20的0.1v/v%升汞100mL消毒8-10min,无菌水冲洗3-5次,最后用消毒滤纸除去表面水分,得到外植体,其中,无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水;
(2)外植体诱导获得无菌试管苗:将步骤(1)得到的外植体置于超净工作台内,接种到MS培养基中,在培养温度为23-27℃,黑暗的条件下培养20d得到无菌试管苗,其中,MS培养基中添加GA30.1-0.5mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L,培养基pH值为5.8;
(3)胚性愈伤组织的诱导:将步骤(2)中得到的无菌试管苗的子叶置于MS胚性伤组织诱导培养基中,在培养温度为23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为8-10h/d的条件下培养30d,得到胚性愈伤组织,其中,MS胚性伤组织诱导培养基添加2,4-D0.5-2.5mg/L、TDZ0.5-2.0、CH200mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L,培养基pH值5.8;
(4)胚状体诱导与萌发:将步骤(3)中得到胚性愈伤组织置于MS萌发培养基中,在培养温度为23-27℃,光照强度1500lux,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,得到体细胞胚胎再生小植株,其中,MS萌发培养基中中添加蔗糖30g/L和琼脂5g/L,培养基pH值为5.8;
(5)壮苗培养:将步骤(4)中得到的体细胞胚胎再生小植株置于MS壮苗培养基中,在培养温度为23-27℃,光照强度1500lux,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,得到完整自根苗,其中,MS壮苗培养基中添加6-BA0.1-0.5mg/L、NAA0.05-0.1mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L,培养基pH值5.8;
(6)炼苗移栽:将所述完整自根苗在温度为25℃的室内炼苗4-7d,待培养基表面形成角质后,取出幼苗,洗净根部培养基,移栽到灭菌蛭石的基质中,生长一个月后移栽到大田。
本发明的突出优点在于:海桐体细胞胚胎发生和植株再生方法技术方法简便,从外植体到植株再生,炼苗移栽整个培养周期打破传统组培繁殖方式,将芽诱导和得根一步完成,缩短培养周期,提高繁殖系数,移栽成活率高,出苗整齐一致,便于管理。
实施例1
本发明所述的海桐体细胞胚胎发生和植株再生方法,包括以下步骤:
(1)外植体的选择与消毒:取海桐新鲜种子作为外植体,依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min,线状自来水冲洗15-30min,添加了2-3滴吐温-20的0.1v/v%升汞100mL消毒8-10min,无菌水冲洗3-5次,最后用消毒滤纸除去表面水分,得到外植体。其中,无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水。
(2)外植体诱导获得无菌试管苗:将步骤(1)得到的外植体置于超净工作台内,接种到MS培养基中,在培养温度为23-27℃,黑暗条件下培养20d得到无菌试管苗。其中,MS培养基中添加GA30.1mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L,培养基pH值为5.8。
(3)胚性愈伤组织的诱导:将步骤(2)中得到的无菌试管苗的子叶,在超净台内用解剖刀划伤子叶,平贴于MS胚性愈伤诱导培养基上,在培养温度为23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为8-10h/d的条件下培养30d,得到胚性愈伤组织,其中,MS胚性愈伤组织诱导培养基中添加2,4-D0.5mg/L、TDZ0.5mg/L、CH200mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L,培养基pH值5.8;
(4)胚状体诱导与萌发:将步骤(3)中得到胚性愈伤置于MS萌发培养基中在培养温度为23-27℃,光照强度1500lux,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,得到体细胞胚胎再生小植株。其中,MS萌发培养基中添加蔗糖30g/L和琼脂5g/L,培养基pH值为5.8。
(5)壮苗培养:将步骤(4)中得到的体细胞胚胎再生小植株置于MS壮苗培养基中,在培养温度为23-27℃,光照强度1500lux,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,得到完整自根苗。其中,MS壮苗培养基中添加6-BA0.5mg/L、NAA 0.1mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L,培养基pH值为5.8。
(6)炼苗移栽:将所述完整自根苗在室温下炼苗4-7d,待培养基表面形成角质后,取出幼苗,洗净根部培养基,移栽到灭菌蛭石的基质中,生长一个月后,移栽到大田。每天早晚各喷雾一次。
实施例2
(1)外植体的选择与消毒:取海桐新鲜种子作为外植体,依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min,线状自来水冲洗15-30min,添加了2-3滴吐温-20的0.1v/v%升汞100mL消毒8-10min,无菌水冲洗3-5次,最后用消毒滤纸除去表面水分,得到外植体。其中,无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水。
(2)外植体诱导获得无菌试管苗:将步骤(1)得到的外植体置于超净工作台内,接种到MS培养基中,在培养温度为23-27℃,黑暗条件下培养20d得到无菌试管苗。其中,MS培养基中添加GA30.1mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L,培养基pH值为5.8。
(3)胚性愈伤组织的诱导:将步骤(2)中得到的无菌试管苗的子叶,在超净台内用解剖刀划伤子叶,平贴于MS胚性愈伤诱导培养基上,在培养温度为23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为8-10h/d的条件下培养30d,得到胚性愈伤组织,其中,MS胚性愈伤组织诱导培养基中添加2,4-D1.0mg/L、TDZ2.0mg/L、CH200mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L,培养基pH值5.8;
(4)胚状体诱导与萌发:将步骤(3)中得到胚性愈伤置于MS萌发培养基中在培养温度 为23-27℃,光照强度1500lux,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,得到体细胞胚胎再生小植株。其中,MS萌发培养基中添加蔗糖30g/L和琼脂5g/L,培养基pH值为5.8。
(5)壮苗培养:将步骤(4)中得到的体细胞胚胎再生小植株置于MS壮苗培养基中,在培养温度为23-27℃,光照强度1500lux,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,得到完整自根苗。其中,MS壮苗培养基中添加6-BA0.5mg/L、NAA 0.1mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L,培养基pH值为5.8。
(6)炼苗移栽:将所述完整自根苗在室温下炼苗4-7d,待培养基表面形成角质后,取出幼苗,洗净根部培养基,移栽到灭菌蛭石的基质中,生长一个月后,移栽到大田。每天早晚各喷雾一次。
实施例3
(1)外植体的选择与消毒:取海桐新鲜种子作为外植体,依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min,线状自来水冲洗15-30min,添加了2-3滴吐温-20的0.1v/v%升汞100mL消毒8-10min,无菌水冲洗3-5次,最后用消毒滤纸除去表面水分,得到外植体。其中,无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水。
(2)外植体诱导获得无菌试管苗:将步骤(1)得到的外植体置于超净工作台内,接种到MS培养基中,在培养温度为23-27℃,黑暗条件下培养20d得到无菌试管苗。其中,MS培养基中添加GA30.1mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L,培养基pH值为5.8。
(3)胚性愈伤组织的诱导:将步骤(2)中得到的无菌试管苗的子叶,在超净台内用解剖刀划伤子叶,平贴于MS胚性愈伤诱导培养基上,在培养温度为23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为8-10h/d的条件下培养30d,得到胚性愈伤组织,其中,MS胚性愈伤组织诱导培养基中添加2,4-D1.5mg/L、TDZ1.5mg/L、CH200mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L,培养基pH值5.8;
(4)胚状体诱导与萌发:将步骤(3)中得到胚性愈伤置于MS萌发培养基中在培养温度为23-27℃,光照强度1500lux,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,得到体细胞胚胎再生小植株。其中,MS萌发培养基中添加蔗糖30g/L和琼脂5g/L,培养基pH值为5.8。
(5)壮苗培养:将步骤(4)中得到的体细胞胚胎再生小植株置于MS壮苗培养基中,在培养温度为23-27℃,光照强度1500lux,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,得到完整自根苗。其中,MS壮苗培养基中添加6-BA0.5mg/L、NAA 0.1mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L,培养基pH值为5.8。
(6)炼苗移栽:将所述完整自根苗在室温下炼苗4-7d,待培养基表面形成角质后,取出幼苗,洗净根部培养基,移栽到灭菌蛭石的基质中,生长一个月后,移栽到大田。每天早晚各喷雾一次。
实施例4
本发明所述的海桐体细胞胚胎发生和植株再生方法,包括以下步骤:
(1)外植体的选择与消毒:取海桐新鲜种子作为外植体,依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min,线状自来水冲洗15-30min,添加了2-3滴吐温-20的0.1v/v%升汞100mL消毒8-10min,无菌水冲洗3-5次,最后用消毒滤纸除去表面水分,得到外植体。其中,无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水。
(2)外植体诱导获得无菌试管苗:将步骤(1)得到的外植体置于超净工作台内,接种到MS培养基中,在培养温度为23-27℃,黑暗条件下培养20d得到无菌试管苗。其中,MS培养基中添加GA30.1mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L,培养基pH值为5.8。
(3)胚性愈伤组织的诱导:将步骤(2)中得到的无菌试管苗的子叶,在超净台内用解剖刀划伤子叶,平贴于MS胚性愈伤诱导培养基上,在培养温度为23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为8-10h/d的条件下培养30d,得到胚性愈伤组织,其中,MS胚性愈伤组织诱导培养基中添加2,4-D2.5mg/L、TDZ0.5mg/L、CH200mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L,培养基pH值5.8;
(4)胚状体诱导与萌发:将步骤(3)中得到胚性愈伤置于MS萌发培养基中在培养温度为23-27℃,光照强度1500lux,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,得到体细胞胚胎再生小植株。其中,MS萌发培养基中添加蔗糖30g/L和琼脂5g/L,培养基pH值为5.8。
(5)壮苗培养:将步骤(4)中得到的体细胞胚胎再生小植株置于MS壮苗培养基中,在培养温度为23-27℃,光照强度1500lux,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,得到完整自根苗。其中,MS壮苗培养基中添加6-BA0.5mg/L、NAA 0.1mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L,培养基pH值为5.8。
(6)炼苗移栽:将所述完整自根苗在室温下炼苗4-7d,待培养基表面形成角质后,取出幼苗,洗净根部培养基,移栽到灭菌蛭石的基质中,生长一个月后,移栽到大田。每天早晚各喷雾一次。

Claims (1)

1.一种海桐体细胞胚胎发生和植株再生的方法,其特征在于:该方法包括以下步骤:
(1)外植体的选择与消毒:取海桐新鲜种子作为外植体,依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min,线状自来水冲洗15-30min,添加了2-3滴吐温-20的0.1v/v%升汞100mL消毒8-10min,无菌水冲洗3-5次,最后用消毒滤纸除去表面水分,得到外植体,其中,无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水;
(2)外植体诱导获得无菌试管苗:将步骤(1)得到的外植体置于超净工作台内,接种到MS培养基中,在培养温度为23-27℃,黑暗的条件下培养20d得到无菌试管苗,其中,MS培养基中添加GA30.1-0.5mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L,培养基pH值为5.8;
3)胚性愈伤组织的诱导:将步骤(2)中得到的无菌试管苗的子叶置于MS胚性伤组织诱导培养基中,在培养温度为23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为8-10h/d的条件下培养30d,得到胚性愈伤组织,其中,MS胚性伤组织诱导培养基添加2,4-D0.5-2.5mg/L、TDZ0.5-2.0、CH200mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L,培养基pH值5.8;
(4)胚状体诱导与萌发:将步骤(3)中得到胚性愈伤组织置于MS萌发培养基中,在培养温度为23-27℃,光照强度1500lux,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,得到体细胞胚胎再生小植株,其中,MS萌发培养基中中添加蔗糖30g/L和琼脂5g/L,培养基pH值为5.8;
(5)壮苗培养:将步骤(4)中得到的体细胞胚胎再生小植株置于MS壮苗培养基中,在培养温度为23-27℃,光照强度1500lux,光照时间8-10h/d的条件下培养30d,得到完整自根苗,其中,MS壮苗培养基中添加6-BA0.1-0.5mg/L、NAA0.05-0.1mg/L、蔗糖30g/L和琼脂5g/L,培养基pH值5.8;
(6)炼苗移栽:将所述完整自根苗在温度为25℃的室内炼苗4-7d,待培养基表面形成角质后,取出幼苗,洗净根部培养基,移栽到灭菌蛭石的基质中,生长一个月后移栽到大田。
CN201510779403.5A 2015-11-13 2015-11-13 一种海桐体细胞胚胎发生和植株再生的方法 Expired - Fee Related CN105432466B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510779403.5A CN105432466B (zh) 2015-11-13 2015-11-13 一种海桐体细胞胚胎发生和植株再生的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510779403.5A CN105432466B (zh) 2015-11-13 2015-11-13 一种海桐体细胞胚胎发生和植株再生的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105432466A CN105432466A (zh) 2016-03-30
CN105432466B true CN105432466B (zh) 2017-08-15

Family

ID=55543463

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510779403.5A Expired - Fee Related CN105432466B (zh) 2015-11-13 2015-11-13 一种海桐体细胞胚胎发生和植株再生的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105432466B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106258735A (zh) * 2016-08-11 2017-01-04 江苏沿江地区农业科学研究所 一种海桐种子简约育苗方法及由其育成的海桐苗
CN114027189B (zh) * 2021-11-03 2022-11-18 黄冈师范学院 一种普通油茶成熟胚通过体细胞胚胎发生方式获得再生植株的方法
CN115005097A (zh) * 2022-05-26 2022-09-06 桂林医学院 一种瑶药少花海桐的快速繁殖方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002209575A (ja) * 2001-01-19 2002-07-30 Univ Hiroshima トベラの培養細胞及び該培養細胞を用いた組織培養法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
光叶海桐愈伤组织诱导剂增殖研究;蒋炜;《绵阳师范学院学报》;20071115;第26卷(第11期);第61-65页 *
植物组织培养中胚状体诱导的研究;范双喜;《北京农学院学报》;19931031;第8卷(第2期);142页第1段,145页3.4.2植物激素 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN105432466A (zh) 2016-03-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104335903B (zh) 一种促进白及快速繁殖的方法
CN103314855A (zh) 白芨的种子组培繁殖方法
CN102246694B (zh) 一种白背三七的组织培养方法
CN103190347B (zh) 一种茶壶枣组织培养方法
CN102499088B (zh) 一种利用广西金线莲蒴果快速繁育其种苗的方法
CN103348920B (zh) 一种奇楠沉香优质种苗快速繁殖方法
CN102845313A (zh) 狗枣猕猴桃的离体快速繁殖方法
CN109258460A (zh) 微茎尖培养结合热处理获得增城蜜菊脱毒苗的培育方法
CN104082138A (zh) 一种通城虎的组织培养快繁方法
CN105993956A (zh) 一种茅苍术快速繁殖方法
CN105432466B (zh) 一种海桐体细胞胚胎发生和植株再生的方法
CN109819892B (zh) 一种草果优良单株的组织培养方法
CN103314856A (zh) 白芨的侧芽组培繁殖方法
CN106305427A (zh) 一种茶条槭组织培养快速繁殖的方法
CN106665367B (zh) 一种黄花风铃木组织培养快速繁殖方法
CN106106138B (zh) 一种红掌杂交育种及快速繁殖方法
CN106165648B (zh) 一种紫荆组培培养基及培养方法
CN105557515B (zh) 一种圆叶鸟巢蕨的组培快繁方法
CN104604680B (zh) 能够促进白芨种子萌发和幼苗生长的培养基及其配方和制备方法
CN108142281A (zh) 一种杜仲组织培养方法
CN105532452A (zh) 一种欧亚瑞香种子诱导及快速繁殖的方法
CN105409779A (zh) 牛樟树组织培养快速繁殖的方法
CN106613973B (zh) 利用组培苗叶片再生不定芽快速繁育羊踯躅的方法
CN108739403A (zh) 一种黄花梨木的组培快繁方法
CN105230488B (zh) 一种兔耳兰叶片组织培养快速繁殖方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20170815

Termination date: 20191113

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee