CN104255496B - 一种快速繁殖白芨试管苗的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种快速繁殖白芨试管苗的方法，它是将白芨的种子经萌发培养、原球茎分化培养、鳞茎诱导培养和驯化后，得到白芨幼苗的方法。与现有技术相比，本发明方法具有萌发率高、培养时间短、整齐性好和变异率小的优点，具有良好的市场前景。

Description

一种快速繁殖白芨试管苗的方法
技术领域
本发明属于植物栽培技术领域，具体涉及一种快速繁殖白芨试管苗的方法。
背景技术
白芨，(学名：Bletillastriata)又名连及草、甘根、白给、箬兰、朱兰、紫兰、紫蕙、百笠，多年生草本球根植物(块根)，植株高18～60厘米。主要分布在中国、日本以及缅甸北部。主要花期在春季，但依各地气候之不同，晚冬至夏初都可能开花。白芨有广泛的药用价值及园林价值。主要用于收敛止血，消肿生肌。花有紫红、白、蓝、黄和粉等色，可盆栽室内观赏，亦可点缀于较为荫蔽的花台、花境或庭院一角。
白芨喜温暖、阴湿的环境，如野生山谷林下处。稍耐寒，长江中下游地区能露地栽培。耐阴性强，忌强光直射，夏季高温干旱时叶片容易枯黄。宜排水良好含腐殖质多的沙壤土。白芨常生长于较湿润的石壁、苔藓层中，常与灌木相结合，或者生长于林缘、草丛、有山泉的地方，亦生于海拔100～3200米的常绿阔叶林下，栋树林或针叶林下，在北京和天津有栽培。白芨生长的石头均是砂岩类，这样白芨才能吸收到毛管水、从而牢牢地吸在上面。
长期以来，白芨市场主要依靠野生资源。由于用途的广泛、需求量的增加以及价格的高涨，导致资源被掠夺式采挖，加上生态环境的破坏，野生资源日渐枯竭，白芨已成为我国二级保护植物。因此，在快速繁殖白芨方面，有着的良好的市场前景。
发明内容
本发明所要解决的技术问题，是提供一种快速繁殖白芨试管苗的方法。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
一种快速繁殖白芨试管苗的方法，它包括以下步骤：
(1)选取白芨人工授粉后120d的塑果，依次用去污剂和水清洗后移入接种室内，在超净工作台上用75v/v％酒精水溶液浸泡45～60s后，放置于氯化汞水溶液中浸泡10～15min，得到白芨无菌塑果；
(2)将步骤(1)中所得的白芨无菌塑果在超净台上用解剖刀剖开，取出种子，接种于液体培养基上，在22～25℃、80～120转/min的条件下，培养45d，过滤得到白芨原球茎；
(3)将步骤(2)中所得的白芨原球茎接种于原球茎分化培养基上，在25～28℃、光照强度1000～1500lux、光照时间11～13h/d的条件下培养75d，得到白芨小苗；
(4)将步骤(3)中所得的白芨小苗接种到鳞茎诱导培养基中，在25～28℃、光照度1000～1500lux、光照时间11～13h/d的条件下培养70d，选取基部形成直径4～7mm鳞茎的白芨；
(5)将步骤(4)中选取的白芨用水清洗后，移置到铺有驯化栽培基质的苗床上，遮阴80％，驯化6个月后，即可进行大田移栽。
其中，步骤(1)中，所述的去污剂为普通家用洗衣液；所述的氯化汞水溶液中，氯化汞的质量分数为0.1％～0.15％。
其中，步骤(2)中，所述的液体培养基为的组分为：N6培养基+萘乙酸0.5～1.0mg/L+蔗糖25～30g/L，pH5.6～5.8。
其中，步骤(2)中的培养条件为：在22～25℃条件下，前7d给予暗培养，之后光照强度为1000～1500lux，光照时间11～13h/d。
其中，步骤(3)中，所述的原球茎分化培养基的组分为：N6培养基+萘乙酸0.5～1.5mg/L+蔗糖25～30g/L+香蕉泥60～80g/L+琼脂4.5～6g/L，pH5.6～5.8。
其中，步骤(4)中，所述的鳞茎诱导培养基的组分为：1/2MS培养基+萘乙酸1～2mg/L+蔗糖25～30g/L+香蕉泥60～80g/L+琼脂4.5～6g/L，pH5.6～5.8；
其中，步骤(5)中，所述的的驯化栽培基质由田园土、泥炭土和蛭石以重量比1：1：0.5组成。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优点：
1、白芨塑果消毒后，置于超净工作台上用解剖刀剖开塑果，取出种子，接种到步骤(2)中液体培养基上，采用N6培养基并配以生长素NAA0.5～1.0mg/L，在转速为80～120转/min条件下进行培养，与现有的白芨种子萌发培养基相比，该方法腋芽萌发时间缩短了一倍，且萌发率高(80％以上)，整齐性好，变异率小于1％。
2、步骤(4)所述的鳞茎诱导培养基中，采用1/2MS(大量元素减半)并配以生长素NAA1～2mg/L，与传统的培养技术相比，该方法能更好更快的促进白芨小苗基部膨大，形成鳞茎，70d内即可使白芨组培苗的鳞茎膨大到直径4～7mm。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1：一种高效快速繁殖白芨试管苗的方法，该方法包括以下步骤：
(1)9月，剪取白芨人工授粉后120d的塑果，用去污剂清洗10min，再用流水冲洗10min，带入接种室，在超净工作台上用75v/v％酒精浸泡45～60s，再放置于氯化汞水溶液中浸泡；
(2)将步骤(1)得到的白芨无菌塑果在超净工作台上用解剖刀剖开，取出种子，接种于液体培养基上，在22～25℃、120转/min的条件下，培养20d，种子开始萌发，45d后，通过显微镜观察，约85％的种子形成直茎0.7～1mm的原球茎，变异率约为0.8％，滤出原球茎备用；其中，光照条件为：前7d给予暗培养，以后光照度为1000～1500lux、光照时间12h/d；所述的液体培养基组成为：萘乙酸0.5mg/L+蔗糖30g/L+N6培养基+pH5.8；
(3)将步骤(2)得到的白芨原球茎置于原球茎分化培养基中，在25～28℃、光照度1000～1500lux、光照时间12h/d的条件下培养75d，白芨长至5cm高左右；其中，所述的原球茎分化培养基组成为：萘乙酸1.0mg/L+蔗糖30g/L+N6培养基+香蕉泥80g/L+琼脂6g/L+pH5.8；
(4)将步骤(3)中得到的白芨小苗接种到鳞茎诱导培养基中，在25～28℃、光照度1000～1500lux、光照时间12h/d的条件下培养70d，白芨的基部膨大形成鳞茎，经过测量，形成的鳞茎大多直径为4～7mm，平均直径为5.81mm，这时可进行驯化移栽，其中，所述的鳞茎诱导培养基组成为：萘乙酸2mg/L+蔗糖230g/L+香蕉泥80g/L+1/2MS培养基+琼脂6g/L+pH5.8；
(5)将步骤(4)得到的成苗从瓶内取出用清水冲洗去除培养基后，移置铺有驯化栽培基质的苗床上，并遮阴保湿，驯化6个月后，即可进行大田移栽。
实施例2：
与实施例1基本相同，步骤(2)、步骤(3)、步骤(4)中种子萌发，原球茎分化培养、鳞茎诱导培养三个阶段分别以表1所列培养基组合进行筛选，以优选最适培养基组合配方。表1说明如下：
①培养基配方优化主要是设计不同的基础培养基、激素浓度、天然附加物等对培养基进行了优化设计，培养环境为温度25℃、光照度1000～1500lux、光照时间12h/d培养室内。
②针对生产，不同的培养阶段设计了三组培养基配方，种子萌发阶段主要观察种子萌发的快慢、长势、颜色(翠绿为佳)等指标判断配方是否合理；原球茎分化阶段主要观察白芨原球茎的分化率及分化后小苗高度(越高越好)、粗度(越粗越好)、玻璃化程度(越低越好)等指标判断配方是否合理；鳞茎诱导培养阶段，主要通关观察白芨苗基部的膨大程度(越大越好)、玻璃化程度(越低越好)、颜色等指标来判断配方的好坏。通过观察和各项指标的测定，并用“★”和“☆”的多少代表配方的好坏，★越多表示越好，☆比★要低一个等次。
表1培养基配方筛选
试验表明，种子萌发阶段(步骤2)27种配方组合中，基础培养基和激素组合范围为萘乙酸0.5～1.0mg/L+蔗糖25～30g/L+N6培养基，在22～25℃条件下，液体震荡培养(120转/min)时，种子萌发率高、生长快且整齐性好，是较适宜的组合配方组合，培养20d种子开始萌发，45d时，超过80％的种子萌发并形成0.7～1.2mm大小的原球茎；原球茎分化培养阶段(步骤3)36种配方组合中，基础培养基、激素组合范围为萘乙酸1.0～2.0mg/L+香蕉汁60～80g/L+蔗糖25～30g/L+N6培养基+琼脂4.5～6g/L培养基范围内，原球茎分化率高，分化后，苗的生长势良好、生长速度快、玻璃化程度低，75d左右，苗的高度可达5cm左右且较为健壮；鳞茎诱导阶段(步骤4)，结果表明，萘乙酸1.0～3.0mg/L+香蕉汁60～80g/L+蔗糖25～30g/L+1/2MS培养基+琼脂4.5～6g/L为优选培养基配方组合，培养70d后，白芨苗基部膨大，形成4mm～7mm的鳞茎，大大提高了移栽成活率。

Claims (4)

1.一种快速繁殖白芨试管苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)选取白芨人工授粉后120d的塑果，依次用去污剂和水清洗后移入接种室内，在超净工作台上用75v/v％酒精水溶液浸泡45～60s后，放置于氯化汞水溶液中浸泡10～15min，得到白芨无菌塑果；
(2)将步骤(1)中所得的白芨无菌塑果在超净台上用解剖刀剖开，取出种子，接种于液体培养基上，在22～25℃、80～120转/min的条件下，培养45d，过滤得到白芨原球茎；
(3)将步骤(2)中所得的白芨原球茎接种于原球茎分化培养基上，在25～28℃、光照强度1000～1500lux、光照时间11～13h/d的条件下培养75d，得到白芨小苗；
(4)将步骤(3)中所得的白芨小苗接种到鳞茎诱导培养基中，在25～28℃、光照度1000～1500lux、光照时间11～13h/d的条件下培养70d，选取基部形成直径4～7mm鳞茎的白芨；
(5)将步骤(4)中选取的白芨用水清洗后，移植到铺有驯化栽培基质的苗床上，遮阴80％，驯化6个月后，进行大田移栽；
步骤(2)中，所述的液体培养基的组分为：N6培养基+萘乙酸0.5～1.0mg/L+蔗糖25～30g/L，pH5.6～5.8；
步骤(3)中，所述的原球茎分化培养基的组分为：N6培养基+萘乙酸1～2mg/L+蔗糖25～30g/L+香蕉泥60～80g/L+琼脂4.5～6g/L，pH5.6～5.8；
步骤(4)中，所述的鳞茎诱导培养基的组分为：1/2MS培养基+萘乙酸1～3mg/L+蔗糖25～30g/L+香蕉泥60～80g/L+琼脂4.5～6g/L，pH5.6～5.8。
2.根据权利要求1所述的快速繁殖白芨试管苗的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的去污剂为普通家用洗衣液；所述的氯化汞水溶液中，氯化汞的质量分数为0.1％～0.15％。
3.根据权利要求1所述的快速繁殖白芨试管苗的方法，其特征在于，步骤(2)中的培养条件为：在22～25℃条件下，前7d给予暗培养，之后光照强度为1000～1500lux，光照时间11～13h/d。
4.根据权利要求1所述的快速繁殖白芨试管苗的方法，其特征在于，步骤(5)中，所述的的驯化栽培基质由田园土、泥炭土和蛭石以重量比1：1：0.5组成。
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