CN103004604B - 一种万代兰品种的繁育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种万代兰品种的繁育方法，选取当年萌发饱满顶芽为材料，去除多余的叶片进行诱导培养，15～20天即萌发出生长健壮的新芽；再经过20～30天的增殖培养，20～25天诱导生根后即可成苗、移栽，成活率高达95%以上；扩繁系数高，苗木成活后生长健壮，长势良好。由于万代兰为单轴类茎洋兰，极少能有侧芽产生，而且茎尖中含有较多的活性较强的多酚类物质，切取的茎尖在培养中极易褐变，培养较难成功，而自然有性繁殖因种子萌发需靠共生菌滋养也难以攻克。本发明的技术方案解决现有技术中存活率低，繁殖慢等问题，具备显著的经济和社会效益。
Description
技术领域
本发明属于万代兰植株快速繁殖技术领域，特别是涉及珍稀观赏型植物万代兰属新品种选育及产业化关键技术研究与开发。
背景技术
万代兰(Vandaspp)为多年生附生草本,该属植物全世界约有60个原生种，全部为附生植物。广泛分布于东半球的热带和亚热带地区，自印度往东至中国南部、东南亚、新几内亚、澳大利亚及菲律宾、所罗门群岛等太平洋岛屿均有分布。
大多数种类花较大，花色鲜艳，有粉红色、黄色、紫红色、纯白色，也有其他兰花很少见的茶褐色、天蓝色等。总状花序从叶腋间抽出，有花10-20朵；花期长，每朵花能开放2-3周，通常从下往上顺序开放，所以每支花序在高温条件下可开放一个多月。花萼片特别发达，尤其两枚侧萼更大，是欣赏的重点；花瓣较小，不甚显著，唇瓣更小。有直立的茎干和发达的肉质气生根。叶片在茎的两侧排成两列，通常有扁平、圆柱和半圆柱三种形态。杂交种甚多，并有20余个属间杂种。育种家用鸟舌兰和万带兰杂交产生了植株较为矮小，有万代兰般的中型花新属"鸟舌万代兰"（Ascocenda），台湾称为千代兰，她们的花色千变万化，但植株的大小却仅及万代兰的一半。万带兰是很具有观赏价值的花卉，即可作盆栽花卉，也能做切花，是世界上栽培较多和受欢迎的热带兰花之一。近5年来，万带兰在全球产销量不断增加，目前全球年需求量很多，欧、美、日占一半以上，现已成为全球花卉市场销售量较大、生产值较高的品种。
外植体的选取在组织培养过程中是一个很重要的步骤。一般洋兰组织培养采用切取茎尖、叶片、花穗、腋芽等营养器官作为外植体，其诱导的成功率较低，无法满足实际生产需要和大面积推广要求，目前没有一个有关万代兰属新品种选育及产业化关键技术研究与开发的相关报道，本试验是采用顶芽作为外植体进行诱导芽体萌发，其成功率大大高于其他营养器官。
发明内容
本发明的目的在于提供一种万代兰品种的繁育方法，由于万代兰为单轴类茎洋兰，极少能有侧芽产生，而且茎尖中含有较多的活性较强的多酚类物质，切取的茎尖在培养中极易褐变，培养较难成功，而自然有性繁殖因种子萌发需靠共生菌滋养也难以攻克。本发明的技术方案解决现有技术中存活率低，繁殖慢等问题，具备显著的经济和社会效益。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种万代兰品种的繁育方法，选取当年萌发饱满顶芽为材料，去除多余的叶片进行诱导培养，15～20天即萌发出生长健壮的新芽；再经过20～30天的增殖培养，20～25天诱导生根后即可成苗、移栽。具体包括以下步骤：
（1）取材方法：选取当年萌发饱满顶芽，去除多余的叶片，采摘后用湿布包好，带回实验室置冰箱保鲜隔层备用；
（2）培养基的配制
芽诱导培养基：MOREL +1.0mg/L NAA +6.5g/L Ag +30g/L Su +2g/L Ac +200L椰子汁+3g/L蛋白胨；
丛芽诱导培养基：MOREL +0.5mg/L NAA +6.5g/L Ag +30g/L Su + 2g/L Ac +200L椰子汁+3g/L蛋白胨；
芽增殖培养基：MOREL+0.5mg/L NAA + 6.5g/L Ag +30g/L Su + 2 g/L Ac+150L椰子汁+3 g/L蛋白胨；
生根培养基：MOREL + 0.3mg/L NAA +0.5mg/LIBA +6. 5g/L Ag +30g/L Su +2 g/L Ac +150 g/L香蕉汁；
（3）材料处理：由于万代兰为单茎性类兰花，茎芽材料少，茎尖深存于叶片夹缝中，分离和消毒都比较困难，要先对材料进行适当的修剪，用自来水冲洗，置饱和漂白粉上清液中浸泡15min，并用软毛刷轻轻刷洗，冲洗干净后，自来水下滴冲1～2h，双蒸水冲洗2～3次，置超净工作台用质量分数为75%的酒精消毒30s后倒去酒精，加入质量分数为0.1%的HgCl2溶液处理10～13min，将汞液倒入废汞瓶，用无菌水冲4～6遍后，用消毒滤纸吸干表面水分，然后即可进行接种，接种室取出要接种的材料放在灭过菌的培养皿上，用手术刀切掉与HgCl2接触的切口；
（4）诱导培养：将经灭菌后成株苗的顶芽，在超净工作台上剥取生长点，切成1.5cm长，接种在诱导培养基中；
（5）培养条件：芽诱导和继代增值前期用微光培养，有利于芽的分化，在增值后期适当增强光照，会使芽体较粗壮，在生根过程中加强光照，能提高植株质量，培养室温度为25±2℃，光照时间为10～12h/d，光照强度为1500～2000lx；
（6）增殖培养：将诱导的原球茎在变绿之前取出，横切成小块，直径为3mm，转移到增殖培养基中；
（7）诱导生根：当瓶苗丛生芽长至0.8cm～2cm，高2～3片叶时，将其分成单个植株，转移到不同的生根培养基中诱导生根；
（8）小苗移栽：当瓶苗长至1.5cm～3cm高，3～5片叶，叶色深翠绿健壮，根系数3~5条，根长1~5cm，单轴茎较明显时，就可进行移栽，将试管苗放在自然光下炼苗一周，打开瓶盖先进行炼苗2～4天，以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出，用清水洗净附着在根部的培养基，移栽到水苔的基质中，保持基质湿润和空气湿度及通风，通常在瓶苗移栽前一天，把水苔浸泡在清水中，使其充分透水并浸洗2~3遍，去除硬枝和杂草，再脱水至挤不出水滴为止，成活率达95%以上。
本发明的有益效果在于：由于万代兰为单轴类茎洋兰，极少能有侧芽产生，而且茎尖中含有较多的活性较强的多酚类物质，切取的茎尖在培养中极易褐变，培养较难成功，而自然有性繁殖因种子萌发需靠共生菌滋养也难以攻克。本发明的技术方案解决现有技术中存活率低，繁殖慢等问题，具备显著的经济和社会效益。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
（1）取材方法：选取当年萌发饱满顶芽，去除多余的叶片，采摘后用湿布包好，带回实验室置冰箱保鲜隔层备用；
（2）培养基的配制
芽诱导培养基：MOREL +1.0mg/L NAA +6.5g/L Ag +30g/L Su +2g/L Ac +200L椰子汁+3g/L蛋白胨；
丛芽诱导培养基：MOREL +0.5mg/L NAA +6.5g/L Ag +30g/L Su + 2g/L Ac +200L椰子汁+3g/L蛋白胨；
芽增殖培养基：MOREL+0.5mg/L NAA + 6.5g/L Ag +30g/L Su + 2 g/L Ac+150L椰子汁+3 g/L蛋白胨；
生根培养基：MOREL + 0.3mg/L NAA +0.5mg/LIBA +6. 5g/L Ag +30g/L Su +2 g/L Ac +150 g/L香蕉汁；
（3）材料处理：由于万代兰为单茎性类兰花，茎芽材料少，茎尖深存于叶片夹缝中，分离和消毒都比较困难，要先对材料进行适当的修剪，用自来水冲洗，置饱和漂白粉上清液中浸泡15min，并用软毛刷轻轻刷洗，冲洗干净后，自来水下滴冲1～2h，双蒸水冲洗2～3次，置超净工作台用质量分数为75%的酒精消毒30s后倒去酒精，加入质量分数为0.1%的HgCl2溶液处理10～13min，将汞液倒入废汞瓶，用无菌水冲4～6遍后，用消毒滤纸吸干表面水分，然后即可进行接种，接种室取出要接种的材料放在灭过菌的培养皿上，用手术刀切掉与HgCl2接触的切口；
（4）诱导培养：将经灭菌后成株苗的顶芽，在超净工作台上剥取生长点，切成1.5cm长，接种在诱导培养基中；
（5）培养条件：芽诱导和继代增值前期用微光培养，有利于芽的分化，在增值后期适当增强光照，会使芽体较粗壮，在生根过程中加强光照，能提高植株质量，培养室温度为25±2℃，光照时间为10～12h/d，光照强度为1500～2000lx；
（6）增殖培养：将诱导的原球茎在变绿之前取出，横切成小块，直径为3mm，转移到增殖培养基中；
（7）诱导生根：当瓶苗丛生芽长至0.8cm～2cm，高2～3片叶时，将其分成单个植株，转移到不同的生根培养基中诱导生根；
（8）小苗移栽：当瓶苗长至1.5cm～3cm高，3～5片叶，叶色深翠绿健壮，根系数3~5条，根长1~5cm，单轴茎较明显时，就可进行移栽，将试管苗放在自然光下炼苗一周，打开瓶盖先进行炼苗2～4天，以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出，用清水洗净附着在根部的培养基，移栽到水苔的基质中，保持基质湿润和空气湿度及通风，通常在瓶苗移栽前一天，把水苔浸泡在清水中，使其充分透水并浸洗2~3遍，去除硬枝和杂草，再脱水至挤不出水滴为止，成活率达95%以上。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
Claims (1)
1.一种万代兰品种的繁育方法，其特征在于：选取当年萌发饱满顶芽为材料，去除多余的叶片进行诱导培养，15～20天即萌发出生长健壮的新芽；再经过20～30天的增殖培养，20～25天诱导生根后即可成苗、移栽；
包括以下步骤：
（1）取材方法：选取当年萌发饱满顶芽，去除多余的叶片，采摘后用湿布包好，带回实验室置冰箱保鲜隔层备用；
（2）培养基的配制
芽诱导培养基：MOREL +1.0mg/L NAA +6.5g/L Ag +30g/L Su +2g/L Ac +200L椰子汁+3g/L蛋白胨；
丛芽诱导培养基：MOREL +0.5mg/L NAA +6.5g/L Ag +30g/L Su + 2g/L Ac +200L椰子汁+3g/L蛋白胨；
芽增殖培养基：MOREL+0.5mg/L NAA + 6.5g/L Ag +30g/L Su + 2 g/L Ac+150L椰子汁+3 g/L蛋白胨；
生根培养基：MOREL + 0.3mg/L NAA +0.5mg/LIBA +6. 5g/L Ag +30g/L Su +2 g/L Ac +150 g/L香蕉汁；
（3）材料处理：由于万代兰为单茎性类兰花，茎芽材料少，茎尖深存于叶片夹缝中，分离和消毒都比较困难，要先对材料进行适当的修剪，用自来水冲洗，置饱和漂白粉上清液中浸泡15min，并用软毛刷轻轻刷洗，冲洗干净后，自来水下滴冲1～2h，双蒸水冲洗2～3次，置超净工作台用质量分数为75%的酒精消毒30s后倒去酒精，加入质量分数为0.1%的HgCl2溶液处理10～13min，将汞液倒入废汞瓶，用无菌水冲4～6遍后，用消毒滤纸吸干表面水分，然后即可进行接种，接种室取出要接种的材料放在灭过菌的培养皿上，用手术刀切掉与HgCl2接触的切口；
（4）诱导培养：将经灭菌后成株苗的顶芽，在超净工作台上剥取生长点，切成1.5cm长，接种在诱导培养基中；
（5）培养条件：芽诱导和继代增殖前期用微光培养，有利于芽的分化，在增殖后期适当增强光照，会使芽体较粗壮，在生根过程中加强光照，能提高植株质量，培养室温度为25±2℃，光照时间为10～12h/d，光照强度为1500～2000lx；
（6）增殖培养：将诱导的原球茎在变绿之前取出，横切成小块，直径为3mm，转移到增殖培养基中；
（7）诱导生根：当瓶苗丛生芽长至0.8cm～2cm，高2～3片叶时，将其分成单个植株，转移到不同的生根培养基中诱导生根；
（8）小苗移栽：当瓶苗长至1.5cm～3cm高，3～5片叶，叶色深翠绿健壮，根系数3~5条，根长1~5cm，单轴茎较明显时，就可进行移栽，将试管苗放在自然光下炼苗一周，打开瓶盖先进行炼苗2～4天，以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出，用清水洗净附着在根部的培养基，移栽到水苔的基质中，保持基质湿润和空气湿度及通风，通常在瓶苗移栽前一天，把水苔浸泡在清水中，使其充分透水并浸洗2~3遍，去除硬枝和杂草，再脱水至挤不出水滴为止，成活率达95%以上。
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