CN101595845A

CN101595845A - 圆齿野鸦椿离体胚培养及植株再生方法

Info

Publication number: CN101595845A
Application number: CNA2009103046025A
Authority: CN
Inventors: 何碧珠; 邹双全; 李玉平
Original assignee: Fujian Agriculture and Forestry University
Current assignee: Fujian Agriculture and Forestry University
Priority date: 2009-07-21
Filing date: 2009-07-21
Publication date: 2009-12-09
Anticipated expiration: 2029-07-21
Also published as: CN101595845B

Abstract

本发明提供一种圆齿野鸦椿离体胚培养及植株再生方法，属于圆齿野鸦椿胚的栽培技术。解决现有技术中圆齿野鸦椿胚种子发芽率低，不能大量的提供优良纯化的组培苗的问题，本发明选取当年籽粒饱满的种子为材料，胚经过诱导培养，15～20天即可萌发出生长健壮的新芽；再经过20～30天的增殖，20～25天诱导生根后即可成苗、移栽，成活率高达95％以上；扩繁系数较高，苗术成活后健壮挺拔，长势良好。

Description

圆齿野鸦椿离体胚培养及植株再生方法

技术领域

本发明属于圆齿野鸦椿胚的栽培技术，更具体涉及一种圆齿野鸦椿离体胚培养及植株再生方法。

背景技术

圆齿野鸦椿(Eascaphis kohlshli Hayata)为省沽油科野鸦椿属，别名花溴木、秤杆木、淡椿子、开口椒，是我国特有的乡土观赏树种。夏季开花，冬季结果，果期长，红色的果成熟时沿腹缝线开裂，与其黑色的种子一起，犹如一只美丽栩栩如生的红蝴蝶，极具观赏价值，可作园景树或行道树。挂果时间很长，从外果皮变红到果皮脱落，时间长达半年。因此，可供观赏时间长，是优良的观果树种。其种子含脂肪油25％-30％，可制皂，也可作其它工业用油；树皮可以提烤漆及器具用材。此外，它的根或根皮、花及干果都可供药用，性辛、甘、平，根祛风除湿，健脾，治痢疾、泄泻、疝痛、风湿疼痛、跌打损伤；花镇痛，治头痛眩晕；干果有温重理气、消肿止痛的功效，主治胃痛、寒疝、泻疾、脱肛，对漆过敏疗效甚佳，是一种良好的中草药材。但由于圆齿野鸦椿的种子有外壳坚硬、深休眠的特点，致使育苗时间长、出苗率低，因此很难获得理想的发芽率和较多的健壮苗。赣州市林木种苗站等单位开展了播种育苗方法研究，对种子进行湿沙贮藏催芽，使种子的发芽率提高到51％65％，但仍无法满足实际生产需要和大面积推广要求，特别是对其进行药用价值开发时，更不能提供大量的优良纯化的组培苗，因此急需完善的组织培养技术体系，但在专利公开以前没有一个有关圆齿野鸦椿胚的离体培养及植株再生的组织培养方法，更没有成功的实例。

发明内容

本发明的目的是提供一种圆齿野鸦椿胚的离体培养及植株再生的组织培养方法，解决现有技术中圆齿野鸦椿胚种子发芽率低，不能大量的提供优良纯化的组培苗的问题，该方法培养的芽健康、茁壮、增殖时间短、成苗移植后的成活率高。

本发明的技术内容为圆齿野鸦椿离体胚培养及植株再生方法：所述方法的具体步骤包括：

1)取材方法：选取当年籽粒饱满的种子，采摘后用湿布包好；

2)培养基配制：在基本培养基为MS中分别添加生长激素：BA、NAA、IAA、或IBA中的几种，分别配置成芽诱导培养基、芽增殖培养基和生根培养基，所述这些培养基中还加入Su为20g/L，Ag⁺为7.5g/L，PH值为5.8，附加物为活性炭Ac；所述这些培养基的厚度为1.4～1.6cm；

3)材料消毒处理：将选取的种子用机械力去除坚硬的种子外壳，用洗涤剂漂洗干净，流水冲3小时后沥干，在超净工作台内以重量浓度75％的酒精消毒，摇荡，3～5秒钟后倒出酒精，加入0.1％升汞HgCl₂处理8～12分钟，所述0.1％升汞配制为1克升汞加1000毫升蒸馏水；将汞液倒入废汞瓶，用无菌水冲3～4遍后，用消毒滤纸吸干表面水分；

4)诱导培养：用眼科镊和手术刀在无菌的条件下取生长饱满的胚，直接接种于所述芽诱导培养基上；100～150g的芽诱导培养基接种3个胚；所述诱导培养的培养条件：培养室温度为25±2℃，光照时间12h/d，光照强度1200～2000Lx；诱导培养的时间15～20天；

5)增殖培养：将经过诱导培养的生长健壮的圆齿野鸦椿幼苗切成带腋芽的茎段，接种在所述芽增殖培养基中；100～150g的增殖培养基接种3个胚；所述增殖培养的培养条件：培养室温度为25±2℃，光照时间12h/d，光照强度1200～2000Lx，增殖培养的时间20～30天；

6)诱导生根培养：将经过增殖培养培养出来的幼苗单株切下，带有2～3片叶子，株高1～2cm，转移到所述生根培养基中；100～150g的生根培养基接种3个胚；所述生根培养的培养条件：培养室温度为25±2℃，光照时间12h/d，光照强度1200～2000Lx，生根培养的时间20～25天；

7)试管苗完成：当试管苗长至3～4cm高，有3～5条根，5～7片叶片，长度2～3cm，完成圆齿野鸦椿的离体胚培养及植株再生试管苗培养。

8)试管苗移栽：将所述步骤7)的完成试管苗的圆齿野鸦椿进行移栽，将试管苗放在自然光下炼苗3～5天后再打开瓶盖先进行炼苗2～4天，以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出，洗去根部培养基，移入椰糠和腐殖土的(质量比)1∶2混合的基质中，保湿遮阴培养，所述移植的圆齿野鸦椿试管苗成活率达95％以上。

本发明的显著优点是：采用本发明方法进行，胚经过诱导培养，15～20天即可萌发出生长健壮的新芽；再经过20～30天的增殖，20～25天诱导生根后即可成苗、移栽，成活率高达95％以上；扩繁系数在17倍以上，苗木成活后生长健壮，长势良好，基本上解决了现有技术中圆齿野鸦椿胚种子发芽率低，不能大量的提供优良纯化的组培苗的问题，具有显著的经济效益。

附图说明

图1是本发明的圆齿野鸦椿种子及去除坚硬外壳后的胚状体。

图2是本发明的圆齿野鸦椿胚状体形成的芽苗。

图3是本发明的增殖繁殖的胚芽组织。

图4是圆齿野鸦椿胚芽形成的丛芽。

图5是圆齿野鸦椿形成根系的芽苗。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。

实施例

取材方法：选取当年籽粒饱满的种子，采摘后用湿布包好；

培养基：

MS基本培养基采用1986，北京高等教育出版社出版，陈正华主编的《木本植物组织培养及其应用》中的配方进行配制的。

培养基的配制：基本培养基为MS，加入生长激素为BA、NAA、IAA、IBA，培养基中还加入Su(蔗糖)为20g/L，Ag⁺为7.5g/L，PH值为5.8，附加物为活性炭Ac；培养基厚度一般为1.4～1.6cm；

芽诱导培养基→MS+BA(1.0mg/L)+NAA(0.5mg/L)+IAA(1.0mg/L)+Ag⁺(7.5g/L)+Su(20g/L)+Ac(2～2.5g/L)

芽增殖培养基→MS+BA(2.0mg/L)+NAA(0.3mg/L)+IAA(1.0mg/L)+Ag⁺(7.5g/L)+Su(20g/L)+Ac(2～2.5g/L)

生根培养基→1/2MS+NAA(0.1mg/L)+IBA(0.5mg/L)+Ag⁺(7.5g/L)+Su(20g/L)+Ac(2～2.5g/L)

培养基中Ag⁺来源于AgNO₃。

1/2MS：MS中大量元素减半，其余不变。

材料消毒处理：将选取的种子用机械力去除坚硬的种子外壳，用洗涤剂漂洗干净，流水冲3小时后沥干，在超净工作台内以重量浓度75％的酒精消毒，摇荡，3～5秒钟后倒出酒精，加入0.1％升汞HgCl₂处理8～12分钟，所述0.1％升汞配制为1克升汞加1000毫升蒸馏水；将汞液倒入废汞瓶，用无菌水冲3～4遍后，用消毒滤纸吸干表面水分；

诱导培养：用眼科镊和手术刀在无菌的条件下取生长饱满的胚，直接接种于所述芽诱导培养基上；100～150g的芽诱导培养基接种3个胚；所述诱导培养的培养条件：培养室温度为25±2℃，光照时间12h/d，光照强度1200～2000Lx；诱导培养的时间15～20天；

增殖培养：将经过诱导培养的生长健壮的圆齿野鸦椿幼苗切成带腋芽的茎段，接种在所述芽增殖培养基中；100～150g的增殖培养基接种3个胚；所述增殖培养的培养条件：培养室温度为25±2℃，光照时间12h/d，光照强度1200～2000Lx，增殖培养的时间20～30天；

诱导生根培养：将经过增殖培养培养出来的幼苗单株切下，带有2～3片叶子，株高1～2cm，转移到所述生根培养基中；100～150g的生根培养基接种3个胚；所述生根培养的培养条件：培养室温度为25±2℃，光照时间12h/d，光照强度1200～2000Lx，生根培养的时间20～25天；

试管苗完成：当试管苗长至3～4cm高，有3～5条根，5～7片叶片，长度2～3cm，完成圆齿野鸦椿的离体胚培养及植株再生。

试管苗移栽：完成试管苗的圆齿野鸦椿进行移栽，将试管苗放在自然光下炼苗3～5天后再打开瓶盖先进行炼苗2～4天，以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出，洗去根部培养基，移入椰糠和腐殖土的(质量比)1∶2混合的基质中，保湿遮阴培养，所述移植的圆齿野鸦椿试管苗成活率达95％以上。

按照以上方法进行，胚经过诱导培养，15～20天即可萌发出生长健壮的新芽；再经过20～30天的增殖，20～25天诱导生根后即可成苗、移栽，成活率高达95％以上；扩繁系数在17倍以上，苗木成活后生长健壮，长势良好。

Claims

1.一种圆齿野鸦椿离体胚培养及植株再生方法，其特征在于：所述方法的具体步骤包括：

3)材料消毒处理：将选取的种子用机械力去除坚硬的种子外壳，用洗涤剂漂洗干净，流水冲3小时后沥干，在超净工作台内以重量浓度75％的酒精消毒，摇荡，3～5秒钟后倒出酒精，加入0.1％升汞HgCl₂处理8～12分钟；将汞液倒入废汞瓶，用无菌水冲3～4遍后，用消毒滤纸吸干表面水分；

2.根据权利要求1所述的圆齿野鸦椿离体胚培养及植株再生方法，其特征在于：将所述步骤7)的完成试管苗的圆齿野鸦椿进行移栽，将试管苗放在自然光下炼苗3～5天后再打开瓶盖先进行炼苗2～4天，以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出，洗去根部培养基，移入椰糠和腐殖土的质量比＝1∶2混合的基质中，保湿遮阴培养，所述移植的圆齿野鸦椿试管苗成活率达95％以上。

3.根据权利要求1所述的圆齿野鸦椿离体胚培养及植株再生方法，其特征在于：所述步骤2)培养基配制中：

所述芽诱导培养基为：基本培养基MS中再加入：BA 1.0mg/L；NAA 0.5mg/L；IAA1.0mg/L；Ag⁺7.5g/L；Su 20g/L和活性炭Ac 2～2.5g/L；

所述芽增殖培养基为：基本培养基MS再加入；BA 2.0mg/L；NAA 0.3mg/L；IAA1.0mg/L；Ag⁺7.5g/L；Su 20g/L和活性炭Ac 2～2.5g/L；

所述生根培养基为：基本培养基1/2MS再加入：NAA 0.1mg/L；IBA 0.5mg/L；Ag⁺7.5g/L；Su 20g/L和活性炭Ac 2～2.5g/L。

4.根据权利要求3所述的圆齿野鸦椿离体胚培养及植株再生方法，其特征在于：所述培养基中Ag⁺来源于AgNO₃。

5.根据权利要求3所述的圆齿野鸦椿离体胚培养及植株再生方法，其特征在于：所述基本培养基1/2MS是指：MS中大量元素减半，其余不变。

6.根据权利要求1所述的圆齿野鸦椿离体胚培养及植株再生方法，其特征在于：所述步骤3)用的0.1％升汞配制为1克升汞加1000毫升蒸馏水。