CN104221860A - 一种紫珠的组织培养快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种紫珠的组织培养快速繁殖方法，包括S1.种子的采集与预处理：采集紫珠果实，阴干后选择健康的种子，备用；S2.种子的灭菌处理：将种子用酒精和升汞灭菌；S3.初代培养：将灭菌后的种子接种于初代培养基上，暗培培养6～10d后转为光培养13～18d；S4.继代培养：将萌发的种子转接于继代培养基上光培养28～32d；S5.增殖培养：将紫珠苗切成带一叶一节的茎段，接种于增殖培养基上光培养13～18d，得紫珠组培苗；S6.炼苗移栽：将紫珠组培苗炼苗后移栽于珍珠岩和腐殖土的混合基质中。本发明方法操作简单、无季节限制、繁殖率高、繁殖速度快、移栽苗成活率高，可在短时间内提供大量的紫珠苗，满足了园林绿化、中药资源开发的生产需要。
Description
技术领域
本发明属于农业生物技术领域，具体涉及一种紫珠的组织培养快速繁殖方法。
背景技术
紫珠(Callicarpa bodinieri Levl.)，又名白棠子树、紫荆、紫珠草、止血草为马鞭草科、紫珠属落叶灌木，株高1.2米至2米左右，小枝光滑，略带紫红色，有少量的星状毛，单叶对生，叶片倒卵形至椭圆形，长7厘米至15厘米，先端渐尖，边缘疏生细锯齿。聚伞花序腋生，具总梗，花多数，花蕾紫色或粉红色，花朵有白、粉红、淡紫等色，6月至7月开放。果实球形，9月至10月成熟后呈紫色，有光泽，经冬不落。
紫珠形态特征具有相当高的园林应用价值，是较为少见且优异的观果植物。紫珠果美丽，植于庭院观赏，也可盆栽观赏，其果穗还可剪下瓶插或作切花材料；同时，根或全株入药，能通经和血，治月经不调、虚劳、白带、产后血气痛、感冒风寒，调麻油外用，治缠蛇丹毒（《四川中草药》第二卷），民间用根治目红、发热、口渴、痢疾、止痒。用叶治吐血，咯血，便血，崩漏，创伤出血。
目前，关于紫珠繁殖主要集中在播种繁殖和扦插繁殖上，但这两种繁殖手段均受季节限制，且播种繁殖具有发芽率低、种子休眠时间较长的缺点，而扦插繁殖效率低下，因此，播种繁殖和扦插繁殖均无法满足生产的需求。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种紫珠的组织培养快速繁殖方法，该方法具有操作简单、无季节限制、繁殖率高、繁殖速度快、移栽苗成活率高的优点，可在短时间内提供大量的紫珠苗，满足了园林绿化、中药资源开发的生产需要。
本发明的目的通过以下技术方案来实现：一种紫珠的组织培养快速繁殖方法，它包括以下步骤：
S1. 种子的采集与预处理：每年9～10月于晴天中午采集无病害枝条的紫珠果实，阴干后用镊子和刀片去除紫珠果皮，选择健康的种子，备用；
S2. 种子的灭菌处理：将上述种子在流水中冲洗1～2h，用滤纸吸干种子表面多余水分，采用酒精和升汞灭菌；
S3. 初代培养：将灭菌后的种子接种于初代培养基上，暗培养6～10d后转为光培养，光培养时间为13～18d；其中，所述初代培养基为NN69+8～12 g/L蔗糖+5～9 g/L琼脂，pH值为6.2～6.8；
S4. 继代培养：将经初代培养已萌发的紫珠种子转接于继代培养基上进行继代培养，继代培养基为NN69+25～35g/L蔗糖+5～9g/L琼脂，pH值为6.2～6.8，光培养28～32d；
S5. 增殖培养：将经继代培养的紫珠苗切成带一叶一节的茎段，将茎段接种于增殖培养基上，所述增殖培养基为1/2 NN69+0.08～0.12 mg/L IBA+25～35 g/L蔗糖+5～9 g/L琼脂，pH值为6.2～6.8，光培养13～18d，得紫珠组培苗；
S6. 炼苗移栽：将紫珠组培苗同培养瓶一同放置室外2～5d，开盖炼苗7d后洗掉组培苗根部培养基，保持温度22～26℃，湿度65～75%，将其移栽于珍珠岩和腐殖土的混合基质中。
优选地，步骤S1中所述酒精和升汞灭菌的具体方法为：将种子在75%的酒精中灭菌25～35s，无菌水冲洗2～3次，再用0.1%的升汞灭菌15～25min，无菌水冲洗5～7次，用滤纸吸干种子表面多余水分。
优选地，步骤S3、S4、S5中所述光培养的培养温度为20～28℃，光照强度为1800～2200LX，光照时间14～18h/d。
优选地，步骤S6中所述珍珠岩和腐殖土的重量比为1.5～2.5:1。
本发明具有以下优点：
1. 本发明提供的一种紫珠的组织培养快速繁殖方法，紫珠的成熟种子经初代培养萌发率达95%以上、继代培养紫珠苗可达10cm以上、在增殖培养阶段实现了同步增殖和生根，增殖系数达5-7，炼苗移栽后，成活率可达95%以上；
2. 本发明方法具有操作简单、无季节限制、繁殖率高、繁殖速度快、移栽苗成活率高的优点，可在短时间内提供大量的紫珠苗，满足了园林绿化、中药资源开发的生产需要。
附图说明
图1为经初代培养后萌发的紫珠种子萌发示意图；
图2为经继代培养后的紫珠苗示意图；
图3为经增殖培养后的紫珠组培苗示意图；
图4为经炼苗移栽成活的紫珠苗示意图。
具体实施方式
下面结合附图及实施例对本发明做进一步的描述，本发明的保护范围不局限于以下所述。
实施例1：一种紫珠的组织培养快速繁殖方法，它包括以下步骤：
S1. 种子的采集与预处理：每年9月于晴天中午采集无病害枝条的紫珠果实，阴干后用镊子和刀片去除紫珠果皮，选择健康的种子，备用；
S2. 种子的灭菌处理：将上述种子在流水中冲洗1h，用滤纸吸干种子表面多余水分，将种子在75%的酒精中灭菌25s，无菌水冲洗2次，再用0.1%的升汞灭菌15min，无菌水冲洗5次，用滤纸吸干种子表面多余水分；
S3. 初代培养：将灭菌后的种子接种于初代培养基上，暗培养6d后转为光培养，光培养的培养温度为20℃，光照强度为1800LX，光照时间14h/d，光培养时间为13d；其中，所述初代培养基为NN69+8g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为6.2，经初代培养的紫珠种子萌发率达95%以上，如图1所示；
S4. 继代培养：将经初代培养已萌发的紫珠种子转接于继代培养基上进行继代培养，继代培养基为NN69+25g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为6.2，光培养28d，光培养的培养温度为20℃，光照强度为1800LX，光照时间14h/d，经继代培养，紫珠苗可达10cm以上，如图2所示；
S5. 增殖培养：将经继代培养的紫珠苗切成带一叶一节的茎段，将茎段接种于增殖培养基上，所述增殖培养基为1/2NN69+0.08mg/L IBA+25g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH值为6.2，光培养13d，光培养的培养温度为20℃，光照强度为1800LX，光照时间14h/d，得紫珠组培苗，如图3所示，增殖系数可达5～7；
S6. 炼苗移栽：将紫珠组培苗同培养瓶一同放置室外2d，开盖炼苗7d后洗掉组培苗根部培养基，保持温度22℃，湿度65%，将其移栽于重量比为1.5:1珍珠岩和腐殖土的混合基质中，经炼苗移栽成活的紫珠苗如图4所示，成活率可达95%以上。
实施例2：一种紫珠的组织培养快速繁殖方法，它包括以下步骤：
S1. 种子的采集与预处理：每年10月于晴天中午采集无病害枝条的紫珠果实，阴干后用镊子和刀片去除紫珠果皮，选择健康的种子，备用；
S2. 种子的灭菌处理：将上述种子在流水中冲洗2h，用滤纸吸干种子表面多余水分，将种子在75%的酒精中灭菌35s，无菌水冲洗3次，再用0.1%的升汞灭菌25min，无菌水冲洗7次，用滤纸吸干种子表面多余水分；
S3. 初代培养：将灭菌后的种子接种于初代培养基上，暗培养10d后转为光培养，光培养的培养温度为28℃，光照强度为2200LX，光照时间18h/d，光培养时间为18d；其中，所述初代培养基为NN69+12g/L蔗糖+9g/L琼脂，pH值为6.8，经初代培养的紫珠种子萌发率达95%以上，如图1所示；
S4. 继代培养：将经初代培养已萌发的紫珠种子转接于继代培养基上进行继代培养，继代培养基为NN69+35g/L蔗糖+9g/L琼脂，pH值为6.8，光培养32d，光培养的培养温度为28℃，光照强度为2200LX，光照时间18h/d，经继代培养，紫珠苗可达10cm以上，如图2所示；
S5. 增殖培养：将经继代培养的紫珠苗切成带一叶一节的茎段，将茎段接种于增殖培养基上，所述增殖培养基为1/2NN69+0.12 mg/L IBA+35 g/L蔗糖+9g/L琼脂，pH值为6.8，光培养18d，光培养的培养温度为28℃，光照强度为2200LX，光照时间18h/d，得紫珠组培苗，如图3所示，增殖系数可达5～7；
S6. 炼苗移栽：将紫珠组培苗同培养瓶一同放置室外5d，开盖炼苗7d后洗掉组培苗根部培养基，保持温度26℃，湿度75%，将其移栽于重量比为2.5:1珍珠岩和腐殖土的混合基质中，经炼苗移栽成活的紫珠苗如图4所示，成活率可达95%以上。
实施例3：一种紫珠的组织培养快速繁殖方法，它包括以下步骤：
S1. 种子的采集与预处理：每年9月于晴天中午采集无病害枝条的紫珠果实，阴干后用镊子和刀片去除紫珠果皮，选择健康的种子，备用；
S2. 种子的灭菌处理：将上述种子在流水中冲洗1.5h，用滤纸吸干种子表面多余水分，将种子在75%的酒精中灭菌28s，无菌水冲洗2次，再用0.1%的升汞灭菌18min，无菌水冲洗6次，用滤纸吸干种子表面多余水分；
S3. 初代培养：将灭菌后的种子接种于初代培养基上，暗培养7d后转为光培养，光培养的培养温度为24℃，光照强度为2000LX，光照时间15h/d，光培养时间为15d；其中，所述初代培养基为NN69+9g/L蔗糖+6g/L琼脂，pH值为6.4，经初代培养的紫珠种子萌发率达95%以上，如图1所示；
S4. 继代培养：将经初代培养已萌发的紫珠种子转接于继代培养基上进行继代培养，继代培养基为NN69+28g/L蔗糖+6g/L琼脂，pH值为6.4，光培养30d，光培养的培养温度为24℃，光照强度为2000LX，光照时间16h/d，经继代培养，紫珠苗可达10cm以上，如图2所示；
S5. 增殖培养：将经继代培养的紫珠苗切成带一叶一节的茎段，将茎段接种于增殖培养基上，所述增殖培养基为1/2NN69+010mg/L IBA+30g/L蔗糖+6 g/L琼脂，pH值为6.4，光培养15d，光培养的培养温度为24℃，光照强度为2000LX，光照时间15h/d，得紫珠组培苗，如图3所示，增殖系数可达5～7；
S6. 炼苗移栽：将紫珠组培苗同培养瓶一同放置室外3d，开盖炼苗7d后洗掉组培苗根部培养基，保持温度23℃，湿度70%，将其移栽于重量比为2:1珍珠岩和腐殖土的混合基质中，经炼苗移栽成活的紫珠苗如图4所示，成活率可达95%以上。
实施例4：一种紫珠的组织培养快速繁殖方法，它包括以下步骤：
S1. 种子的采集与预处理：每年10月于晴天中午采集无病害枝条的紫珠果实，阴干后用镊子和刀片去除紫珠果皮，选择健康的种子，备用；
S2. 种子的灭菌处理：将上述种子在流水中冲洗1.8h，用滤纸吸干种子表面多余水分，将种子在75%的酒精中灭菌32s，无菌水冲洗3次，再用0.1%的升汞灭菌22min，无菌水冲洗7次，用滤纸吸干种子表面多余水分；
S3. 初代培养：将灭菌后的种子接种于初代培养基上，暗培养8d后转为光培养，光培养的培养温度为26℃，光照强度为2100LX，光照时间17h/d，光培养时间为16d；其中，所述初代培养基为NN69+10g/L蔗糖+8g/L琼脂，pH值为6.6，经初代培养的紫珠种子萌发率达95%以上，如图1所示；
S4. 继代培养：将经初代培养已萌发的紫珠种子转接于继代培养基上进行继代培养，继代培养基为NN69+32g/L蔗糖+8g/L琼脂，pH值为6.6，光培养30d，光培养的培养温度为26℃，光照强度为2100LX，光照时间16h/d，经继代培养，紫珠苗可达10cm以上，如图2所示；
S5. 增殖培养：将经继代培养的紫珠苗切成带一叶一节的茎段，将茎段接种于增殖培养基上，所述增殖培养基为1/2NN69+0.11 mg/L IBA+32g/L蔗糖+8g/L琼脂，pH值为6.6，光培养16d，光培养的培养温度为26℃，光照强度为2100LX，光照时间16h/d，得紫珠组培苗，如图3所示，增殖系数可达5～7；
S6. 炼苗移栽：将紫珠组培苗同培养瓶一同放置室外4d，开盖炼苗7d后洗掉组培苗根部培养基，保持温度24℃，湿度72%，将其移栽于重量比为2.3:1珍珠岩和腐殖土的混合基质中，经炼苗移栽成活的紫珠苗如图4所示，成活率可达95%以上。
Claims (4)
1.一种紫珠的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，它包括以下步骤：
S1. 种子的采集与预处理：每年9～10月于晴天中午采集无病害枝条的紫珠果实，阴干后用镊子和刀片去除紫珠果皮，选择健康的种子，备用；
S2. 种子的灭菌处理：将上述种子在流水中冲洗1～2h，用滤纸吸干种子表面多余水分，采用酒精和升汞灭菌；
S3. 初代培养：将灭菌后的种子接种于初代培养基上，暗培养6～10d后转为光培养，光培养时间为13～18d；其中，所述初代培养基为NN69+8～12 g/L蔗糖+5～9 g/L琼脂，pH值为6.2～6.8；
S4. 继代培养：将经初代培养已萌发的紫珠种子转接于继代培养基上进行继代培养，继代培养基为NN69+25～35g/L蔗糖+5～9g/L琼脂，pH值为6.2～6.8，光培养28～32d；
S5. 增殖培养：将经继代培养的紫珠苗切成带一叶一节的茎段，将茎段接种于增殖培养基上，所述增殖培养基为1/2 NN69+0.08～0.12 mg/L IBA+25～35 g/L蔗糖+5～9 g/L琼脂，pH值为6.2～6.8，光培养13～18d，得紫珠组培苗；
S6. 炼苗移栽：将紫珠组培苗同培养瓶一同放置室外2～5d，开盖炼苗7d后洗掉组培苗根部培养基，保持温度22～26℃，湿度65～75%，将其移栽于珍珠岩和腐殖土的混合基质中。
2.如权利要求1所述的一种紫珠的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤S1中所述酒精和升汞灭菌的具体方法为：将种子在75%的酒精中灭菌25～35s，无菌水冲洗2～3次，再用0.1%的升汞灭菌15～25min，无菌水冲洗5～7次，用滤纸吸干种子表面多余水分。
3.如权利要求1所述的一种紫珠的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤S3、S4、S5中所述光培养的培养温度为20～28℃，光照强度为1800～2200LX，光照时间14～18h/d。
4.如权利要求1所述的一种紫珠的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤S6中所述珍珠岩和腐殖土的重量比为1.5～2.5:1。
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