CN113080063B - 一种粗糠树组织培养快速生根的方法 - Google Patents
一种粗糠树组织培养快速生根的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于粗糠树繁育技术领域,具体涉及一种粗糠树组织培养快速生根的方法。本发明提供了一种粗糠树组织培养快速生根的方法,该方法组织培养周期短,生产成本低:与常见快繁技术相比,生根速度是粗糠树扦插快繁的两倍,而与常见木本植物组织培养周期相比,生根培养过程简单,无需愈伤组织脱分化、再分化培养,培养时间大大缩短。
Description
技术领域
本发明属于粗糠树繁育技术领域,具体涉及一种粗糠树组织培养快速生根的方法。
背景技术
粗糠树(Ehretia macrophylla Wall.)落叶乔木,树皮灰色,小枝褐色,具皮孔;叶面绿色,被糙伏毛,背面色淡,无毛或近无毛;伞房状圆锥花序顶生,花多,芳香,花梗密被短毛,花萼绿色,花冠白色或略带黄,花丝白色,花药黄色,花柱淡绿色;核果绿色转黄色,近球形,花果期3~7月。粗糠树具有较强的吸附灰尘作用,是城市绿化的优良树种,随着国家储备和森林廊道及生态建设工程的发展,粗糠树苗木需求量也越来越大。
目前,粗糠树的繁育方式主要包括扦插、播种等,例如:耿翠芳等人首次采用播种的形式进行育苗并获得成功(耿翠芳,王利.粗糠树播种育苗技术[J].中国林副特产,2005,000(006):32-33.),路买林等人对粗糠物候期、生物学特性,抗逆性、进行了观测记录,对优良单株进行了标记、繁育(路买林,万卉敏.粗糠树种质资源收集及育苗技术研究[J].河南林业科技,2018,v.38;No.139(001):22-23.)。随后路买林等人又深入研究了不同播种时间、不同的基质、不同种子处理对粗糠树发芽的影响(路买林,徐海霞.粗糠树播种及幼苗移栽关键技术优化研究[J].河南林业科技,2020.)。郝改莲以成年粗糠树母树根为材料,设计了不同粗度和长度的根穗进行根插育苗试验,结果表明粗糠树的根易形成愈伤组织,极易形成根蘖,根插育苗是较好的营养繁育方法(郝改莲.粗糠树的扦插育苗技术[J].濮阳职业技术学院学报,2014,27(02):154-155.)。
与传统的繁殖方式相比,组织培养可以不受时间、空间限制且增殖系数高,可以在较短时间内,大量快速地培养无菌苗。但从目前的研究进展来看,关于粗糠树繁育技术的研究还处于刚刚开展的时期,传统的繁育技术仅少数人有所涉及,而利用组织培养技术进行粗糠树的繁育还处于空白。粗糠树所属的紫草科中,已进行过组织培养研究的物种基本都是草本或灌木植物,例如紫草(周立刚,郑光植,徐纯.滇紫草愈伤组织培养的初步研究[J].云南植物研究,1991(02):237-240.张倩怡,张丽莎,郑宏丽,李永德,姜长阳.紫草的组织培养及快速繁殖研究[J].河南科学,2009,27(01):55-58.)、蓝蓟(吴月亮.蓝蓟的组织培养与快速繁殖[J].植物生理学通讯,2008(02):304.)、琉璃苣(张红梅,李思颖,蔡宝宏,杨文平,李明,张红,吴鹏.琉璃苣体外培养技术研究[J].安徽农业科学,2014,42(21):6941-6977.)、轮冠木(Martin K.Rapid in vitro multiplication and ex vitro rooting ofRotula aquatica Lour.a rare rhoeophytic woody medicinal plant[J].Plant CellReports,2003,21(5):415-420.)。
据资料显示,扦插最快约50天出现不定根,扦插生根率若为100%,也只能做到一枝一苗,而组织培养技术能实现大规模、工厂化育苗。但是,木本植物的生理构造远比草本植物复杂,生长繁殖周期远远长于草本植物,筛选适宜外源激素浓度及培养条件,对扩繁意义重大。
发明内容
为了克服现有技术的不足和缺点,本发明的目的在于提供一种粗糠树组织培养快速生根的方法,该方法具有周期短、成本低、生根速度快、生根率高和增殖系数高等优点。
本发明的目的通过下属技术方案实现:
一种粗糠树组织培养快速生根的方法,包含如下步骤:
(1)剪切粗糠枝条,选取粗糠树当年生春季4月初的幼嫩带芽茎段作为外植体并进行预处理和消毒处理;
(2)将步骤(1)中消毒处理后的外植体接种于生根培养基上,在培养温度为22-25℃、光照强度为1800-2400lx,每日光照12h的条件下培养至不定根长出;
(3)生根培养40-50天后,剪取步骤(2)中培养基上的带芽茎段接种于新的生根培养基中,进行二次生根培养,以扩大繁殖数量;
(4)将步骤(2)或步骤(3)生根培养后的组培苗进行炼苗移栽;
步骤(1)中所述的幼嫩带芽茎段优选为长度为3-4cm、带2个芽的幼嫩带芽茎段;
步骤(1)中所述的预处理优选为将粗糠树当年生春季4月初的幼嫩带芽茎段用流水冲洗4h;
步骤(1)中所述的消毒处理的具体操作优选为:
将粗糠树当年生春季4月初的幼嫩带芽茎段用体积分数为75%的酒精浸洗20-40s,再用0.1wt.%的氯化汞溶液消毒8min,无菌水冲洗3-4次;无菌水冲洗后,吸干表面水分并切去切口与消毒液的接触部分;
步骤(2)中所述的生根培养基为:WPM培养基+IBA 1.0mg/L+蔗糖30g/L+AC 3g/L+琼脂4.9g/L,pH=5.8;
步骤(3)中所述的带芽茎段的长度优选为3-4cm;
步骤(3)中所述的生根培养基为:WPM培养基+IBA 1.0mg/L+蔗糖30g/L+AC 3g/L+琼脂4.9g/L,pH=5.8;
步骤(3)中所述的二次生根培养的条件优选为:培养温度为22-25℃,光照强度为1800-2400lx,每日光照12h;
步骤(4)中所述的组培苗优选生有3-4条、3-5cm长的新根;
步骤(4)中所述的炼苗移栽的具体操作优选为:
将生根后的幼苗移至温室,置于自然光照下7-10天,使幼苗健壮并木质化,壮苗后开瓶炼苗1-2天,以便适应外界环境;移栽前用水洗净根部培养基,洗去根部培养基后,移栽到高锰酸钾消毒过的珍珠岩中,移栽后即时浇水;移栽后,环境湿度保持在80-90%,环境温度为20-26℃,前期需要适当遮光,后期要多见阳光;
本发明的原理:
为快速繁殖粗糠树,本发明以不同时间的粗糠树幼嫩茎段、新芽为外植体材料,以MS、1/2MS、WPM培养基为基础培养基,同时添加NAA、IAA、IBA等外源激素,开展组织培养实验,最后确定快速生根的外植体取材类型及时间、消毒条件、基础培养基种类、激素种类及浓度等。多次结果表明,用幼嫩带芽茎段(3-4cm)做外植体培养,无需启动分化培养,可在生根培养中直接生根,且生根快,仅需20天左右即可生根。
多年组织培养研究表明,木本植物组培生根慢,生根难。本发明解决了粗糠树的组培技术问题,外植体能在短时间内(20天左右)生根,比扦插生根时间缩短了一半时间,并且在生根培养40-50天左右,又可剪切无菌苗的带芽茎段(3-4cm)转接到生根培养基中,20天后再次生根。
本发明中粗糠树生根培养过程简单,无需愈伤组织脱分化、再分化培养,因此本发明加快了生根速度,缩短了组织培养周期,降低了生产成本,也极大地扩大了繁殖数量。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果:
(1)本发明提供了粗糠树组织培养快速生根的方法,该方法组织培养周期短,生产成本低:与常见快繁技术相比,生根速度是粗糠树扦插快繁的两倍,而与常见木本植物组织培养周期相比,生根培养过程简单,无需愈伤组织脱分化、再分化培养,培养时间大大缩短。
(2)本发明提供的粗糠树组织培养快速生根的方法苗木扩繁数量大:生根培养过程中,能在第一次生根后剪切茎段再次生根,达到二次快繁的目的。
(3)本发明提供的粗糠树组织培养快速生根的方法生根效果显著:组培过程中,与常见木本植物组织培养相比,污染率低,为30%,生根培养过程中,茎段迅速伸长,新叶茂盛,长势良好,根系发达,生根率达100%。
(4)本发明历时两年完成粗糠树组织培养快繁过程,成功建立其快速生根体系。
附图说明
图1是以春季(3-4月)萌发的新芽为外植体,采用WPM培养基+NAA 1.0mg/L+6-BA2.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂4.9g/L(pH=5.8)进行分化培养后获得的丛生芽的展示图。
图2是以粗糠幼嫩带芽茎段为外植体,采用1/2MS培养基+IBA1.0 mg/L+蔗糖30g/L+AC 3g/L+琼脂4.9g/L(pH=5.8)进行生根培养后的展示图。
图3是以粗糠幼嫩带芽茎段为外植体,采用WPM培养基+IBA 1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂4.9g/L(pH=5.8)(无活性炭)生根培养第30天的展示图。
图4是实施例5中生根培养和二次生根培养的幼苗展示图,其中,A:生根培养第7天,B:生根培养第30天,C:生根培养第40天,D:无菌苗茎段二次生根培养第30天。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述,但本发明的实施方式不限于此。
实施例1当年生春季(3-4月)萌发的新芽作为外植体
一、实验过程
1、外植体取材和消毒
(1)外植体采集:当年生春季(3-4月)萌发的粗糠新芽;
(2)外植体预处理:将当年生春季(3-4月)萌发的粗糠新芽用流水冲洗4h;
(3)外植体消毒:用体积分数为75%的酒精浸洗30s,再用0.1wt.%的氯化汞溶液消毒8min,无菌水冲洗4次,采用无菌滤纸吸干水分;
2、接种和分化培养
将步骤1消毒后的的外植体(粗糠新芽)接种于分化培养基(具体组成见表1-表3,另含琼脂4.9g/L)中,在室内培养温度为22~25℃、光照强度为1800~2400lx、每日光照12h的条件下进行分化培养;
3、生根培养
将步骤2获得的丛芽转至生根培养基(具体组成见表4-表7,另含琼脂4.9g/L)中,在室内培养温度为22~25℃、光照强度为1800~2400lx、每日光照12h的条件下进行生根培养。
二、实验结果及分析
NAA、IAA和IBA属于生长素,6-BA属于细胞分裂素,其中,6-BA可以促进芽的分化和侧芽萌发,本实施例以1/2MS培养基、MS培养基和WPM培养基为基础培养基,添加不同种类、不同浓度的外源激素研究以春季(3-4月)萌发的新芽为外植体进行粗糠组织培养的可能性,结果见表1~3。
以春季(3-4月)萌发的新芽为外植体,采用1/2MS培养基为基础培养基即使添加不同种类、不同浓度的外源激素进行分化培养,无论如何调整外源激素的种类和浓度,所有外植体均无明显分化,部分结果见表1。
以春季(3-4月)萌发的新芽为外植体,采用MS培养基为基础培养基添加不同种类、不同浓度的外源激素进行分化培养,部分结果见表2,其中,处理组3由于污染率极高,没有得到有效统计数据;当NAA、IAA和IBA总含量不超过2mg/L时,6-BA含量即使仅为1mg/L,也可以促进芽的分化和侧芽萌发,进而产生较多的丛生芽;而当NAA、IAA和IBA总含量超过3mg/L时,即使6-BA含量达到2mg/L(处理组7),芽的分化和侧芽萌发也受到影响,仅有少量丛生芽产生,进一步说明了生长素和细胞分裂素的共同添加,在一定范围内是可以促进芽的分化和侧芽萌发。当两者浓度不合适时,即使添加较高浓度的细胞分裂素,仍然不能有效促进丛生芽的生长。
以春季(3-4月)萌发的新芽为外植体,采用WPM培养基为基础培养基添加不同种类、不同浓度的外源激素进行分化培养,部分结果见表3,与采用MS培养基为基础培养基添加不同种类、不同浓度的外源激素进行分化培养的结果相似,其中,图1是表3处理组1获得的丛生芽。
在分化培养的基础上,将表2和表3中获得的丛生芽转至不同生根培养基(表4-表5)中,结果显示:再分化培养生根困难,生根率极低,很难出现再分化现象(表4-表5);将表2和表3中获得的丛生芽转至表6和表7中的生根培养基中进行生根培养,同样出现无法生根的情况。
表1不同1/2MS培养基配方及分化培养结果(以新芽为外植体)
表2不同MS培养基配方及分化培养结果(以新芽为外植体)
表3不同WPM培养基配方及分化培养结果(以新芽为外植体)
表4不同WPM培养基配方及生根培养结果(以新芽为外植体)
表5不同1/2MS培养基配方及生根培养结果(以新芽为外植体)
上述实验结果说明:以春季(3-4月)萌发的新芽为外植体,采用MS或WPM培养基为基础培养基添加不同种类、不同浓度的外源激素进行分化培养虽然获得了丛生芽,但是丛生芽在生根培养基上无法生根。
实施例2粗糠幼嫩带芽茎段为外植体
一、实验过程
1、外植体取材和消毒
(1)外植体采集:当年生春季4月初的幼嫩带芽茎段;
(2)外植体预处理:将当年生春季4月初的幼嫩带芽茎段用流水冲洗4h;其中,粗糠幼嫩带芽茎段的制备方法为:剪切粗糠枝条并剪去叶片,得到粗糠幼嫩带芽茎段,其中,每个粗糠幼嫩带芽茎段的长度为3-4cm、带有2个芽;
(3)外植体消毒:用体积分数为75%的酒精浸洗30s,再用0.1wt.%的氯化汞溶液消毒8min,无菌水冲洗4次,采用无菌滤纸吸干表面水分并切去切口与消毒液的接触部分;
2、接种和生根培养
将步骤1消毒后的的外植体不进行分化培养,直接接种于生根培养基(表6和表7)中,在室内培养温度为22~25℃、光照强度为1800~2400lx、每日光照12h的条件下培养;
3、炼苗移栽
当步骤2生根培养后的幼苗生有3-4条3cm左右长的新根时,即可进行炼苗。具体方法为:将生根后的幼苗移至温室,置于自然光照下7-10天,使幼苗健壮并木质化,壮苗后开瓶炼苗1-2天,以便适应外界环境;移栽前用自来水洗净根部培养基,水流不能大,以防伤根;洗去根部培养基后,移栽到高锰酸钾消毒过的珍珠岩中,移栽后即时浇水;移栽后,要将环境湿度保持在80-90%,环境温度控制在24℃±2℃,前期需要适当遮光,后期要多见阳光。
二、实验结果及分析
本实施例以1/2MS培养基、MS培养基和WPM培养基为基础培养基,添加不同种类、不同浓度的外源激素以及不同浓度的蔗糖等研究以当年生春季4月初的幼嫩带芽茎段为外植体进行粗糠组织培养的可能性,结果见表6~7。
以当年生春季4月初的幼嫩带芽茎段为外植体,采用1/2MS培养基为基础培养基即使添加不同种类、不同浓度的外源激素(NAA、IAA和IBA)进行生根培养,无论如何调整激素的种类和浓度,所有外植体均无法生根(部分结果见表6)。其中,图2是采用1/2MS培养基+IBA1.0 mg/L+蔗糖30g/L+AC 3g/L+琼脂4.9g/L(pH=5.8)(表6中处理组2)进行生根培养后的展示图。
以当年生春季4月初的幼嫩带芽茎段为外植体,采用MS培养基为基础培养基即使添加不同种类、不同浓度的外源激素(NAA、IAA和IBA)进行生根培养,无论如何调整激素的种类和浓度,所有外植体均无法生根。
以当年生春季4月初的幼嫩带芽茎段为外植体,采用WPM培养基为基础培养基(见表7)添加不同种类、不同浓度的外源激素(NAA、IAA和IBA)进行生根培养,结果表明添加激素后可促进生根。但是NAA、IAA对粗糠外植体无明显的生根效果;与NAA、IAA相比,IBA的促进生根作用强,且茎伸长和新叶生长快,能在较短时间内形成根原基;另外,根生长对激素浓度非常敏感:IBA浓度分别为0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L时,根生长差异明显,IBA为1.0mg/L时,根数量多,根长,IBA浓度高时却无生根现象。
一般情况下,适当降低蔗糖浓度有利于生根。但在本实验过程中,发现蔗糖浓度(20g/L)低时,根脆且细,叶缘褐化严重,卷曲呈失水状。
活性炭提供暗培养环境的同时,能有效地减少褐变的发生率,有利于诱导不定根。实验中,处理组9(添加活性炭,3g/L)和处理组10(无活性炭)(图3)相比,生根率高达100%,处理组10无生根。
多次生根实验证实:在WPM培养基中添加IBA 1.0mg/L、蔗糖30g/L、AC3g/L时生根效果显著,生根率100%,而且污染率低,因此,最佳生根培养基为:WPM培养基+IBA 1.0mg/L+蔗糖30g/L+AC 3g/L+琼脂4.9g/L,pH=5.8。
表6不同1/2MS培养基配方及生根培养结果(以粗糠幼嫩带芽茎段为外植体)
表7不同WPM培养基配方及生根培养结果(以粗糠幼嫩带芽茎段为外植体)
实施例3最佳取材时间的选择
一、实验过程
为了进一步确定最佳的取材时间,本发明又分别在当年生春季3月中旬(3月11日-20日)、3月底(3月21日-31日)、4月初(4月1日-10日)、4月中旬(4月11日-20日)时间段取幼嫩带芽茎段进行实验。生根培养基为实施例2获得的最佳生根培养基,其他步骤具体方法同实施例2。
二、实验结果及分析
结果表明:以当年生春季3月份(中旬和月底)的幼嫩带芽茎段做为外植体进行组织培养生根缓慢,需要约60天,同时生根率低,仅为20%;以当年生春季4月份(月初和中旬)的幼嫩带芽茎段做为外植体进行组织培养生根情况良好。其中,取自4月初的幼嫩带芽茎段做为外植体污染率低(污染率为30%),生根快,根系发达,接种30~40天后,根系发达,最长约4cm,生根率高(100%);取自4月中旬的幼嫩带芽茎段做为外植体的污染率为34%,生根率为85%。
因此,用于粗糠树组织培养的最佳外植体取材时间为当年生春季4月初的幼嫩带芽茎段。
实施例4消毒剂种类、浓度和消毒时间的选择
本实施例研究了消毒剂种类、浓度和消毒时间对粗糠树组织培养的影响,具体方法如下:
一、实验过程
1、外植体取材和消毒
(1)外植体预处理:以当年生春季4月初的幼嫩带芽茎段为外植体,预处理方法同实施例2;
(2)外植体消毒:每种消毒处理接种30个外植体,每个处理实验重复3次,具体处理为:用体积分数为75%的酒精浸洗30s,然后再用0.1wt.%的氯化汞溶液(消毒6min、8min或10min)或次氯酸钠(5wt.%消毒20min或10wt.%消毒15min)或84(10wt.%消毒30min或15wt.%消毒20min),最后用无菌水冲洗4次;采用无菌滤纸吸干表面水分并切去切口与消毒液的接触部分;
2、接种和生根培养
具体培养同实施例2;其中,接种3天后开始观察并分别统计每个处理的污染数、死亡数,接种30天后统计每种处理的芽正常萌发数。
3、炼苗移栽
同实施例2。
二、实验结果及分析
本实施例研究了各种消毒剂对外植体消毒的不同效果。从表8中可以看出,常用的次氯酸钠(5wt.%消毒20min、10wt.%消毒15min)和84(10wt.%消毒30min或15wt.%消毒20min),即使高浓度消毒较长时间(超过15min),外植体污染率仍很高,并不适于粗糠外植体的消毒,这也说明了粗槺树外植体消毒难度较大。
从表8可以看出,采用0.1wt.%的氯化汞溶液的消毒效果明显优于高浓度的次氯酸钠和84,且0.1wt.%的氯化汞溶液的消毒时间十分关键,时间短污染率高,时间长褐化严重,死亡率高。其中,0.1wt.%的氯化汞溶液消毒8min后外植体的污染率最低,不超过30%,同时褐化情况也较轻;0.1wt.%的氯化汞溶液消毒6min后外植体的污染率最高,达到69%;0.1wt.%的氯化汞溶液消毒10min后外植体的污染率虽然仅为20%,但褐化比较严重,最后死亡,而且,消毒时间过长,对外植体的伤害非常大,严重影响生长分化。
因此,采用体积分数为75%的酒精浸洗30s后采用0.1wt.%的氯化汞溶液消毒8min这一处理的消毒效果显著,污染率最低,外植体褐化情况较轻,适用于粗糠外植体的消毒。
表8外植体消毒结果
实施例5
一、实验过程
1、外植体取材和消毒
(1)外植体采集:当年生春季4月初的幼嫩带芽茎段;
(2)外植体预处理:将当年生春季4月初的幼嫩带芽茎段用流水冲洗4h;其中,粗糠幼嫩带芽茎段的制备方法为:剪切粗糠枝条并剪去叶片,得到粗糠幼嫩带芽茎段,其中,每个粗糠幼嫩带芽茎段的长度为3-4cm、带有2个芽;
(3)外植体消毒:用体积分数为75%的酒精浸洗30s,再用0.1wt.%的氯化汞溶液消毒8min,无菌水冲洗4次,采用无菌滤纸吸干表面水分并切去切口与消毒液的接触部分;
2、接种和生根培养
将步骤1消毒后的的外植体不进行分化培养,直接接种于生根培养基(WPM培养基+IBA 1.0mg/L+蔗糖30g/L+AC 3g/L+琼脂4.9g/L,pH=5.8)中,在室内培养温度为22~25℃,光照强度为1800~2400lx,每日光照12h的条件下培养;
3、二次生根培养
生根培养约50天后,可再次剪切茎段(长约3-4cm),进行二次生根培养,以扩大繁殖数量。
4、炼苗移栽
当步骤2生根培养或步骤3二次生根培养后的幼苗生有3-4条3cm左右长的新根时,即可进行炼苗。具体方法为:将生根后的幼苗移至温室,置于自然光照下7-10天,使幼苗健壮并木质化,壮苗后开瓶炼苗1-2天,以便适应外界环境;移栽前用自来水洗净根部培养基,水流不能大,以防伤根;洗去根部培养基后,移栽到高锰酸钾消毒过的珍珠岩中,移栽后即时浇水;移栽后,要将环境湿度保持在80-90%,环境温度控制在24℃±2℃,前期需要适当遮光,后期要多见阳光。
二、实验结果及分析
步骤2中生根培养第7天(图4A),茎段伸长,生根培养20天开始生根,生根培养30天后,有数条不定根,最长约4cm(图4B);生根培养40天后,根系发达,根增多增长,茎段伸长,生根率达100%(图4C);图4D是生根培养约50天后,剪切无菌苗茎段进行二次生根培养后第30天的幼苗展示图,从图中可以看出,幼苗长势良好,长有数条不定根。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种粗糠树组织培养快速生根的方法,其特征在于包含如下步骤:
(1)剪切粗糠枝条,选取粗糠树当年生春季4月初的幼嫩带芽茎段作为外植体并进行预处理和消毒处理;
(2)将步骤(1)中消毒处理后的外植体接种于生根培养基上,在培养温度为22-25℃、光照强度为1800-2400lx,每日光照12h的条件下培养至不定根长出;
(3)生根培养40-50天后,剪取步骤(2)中培养基上的带芽茎段接种于新的生根培养基中,进行二次生根培养,以扩大繁殖数量;
(4)将步骤(2)或步骤(3)生根培养后的组培苗进行炼苗移栽;
步骤(1)中所述的消毒处理的具体操作为:
将粗糠树当年生春季4月初的幼嫩带芽茎段用体积分数为75%的酒精浸洗20-40s,再用0.1wt.%的氯化汞溶液消毒8min,无菌水冲洗3-4次;无菌水冲洗后,吸干表面水分并切去切口与消毒液的接触部分;
步骤(2)中所述的生根培养基为:WPM培养基+IBA 1.0mg/L+蔗糖30g/L+AC 3g/L+琼脂4.9g/L,pH=5.8;
步骤(3)中所述的生根培养基为:WPM培养基+IBA 1.0mg/L+蔗糖30g/L+AC 3g/L+琼脂4.9g/L,pH=5.8。
2.根据权利要求1所述的粗糠树组织培养快速生根的方法,其特征在于:
步骤(1)中所述的幼嫩带芽茎段为长度为3-4cm、带2个芽的幼嫩带芽茎段。
3.根据权利要求1所述的粗糠树组织培养快速生根的方法,其特征在于:
步骤(1)中所述的预处理为将粗糠树当年生春季4月初的幼嫩带芽茎段用流水冲洗4h。
4.根据权利要求1所述的粗糠树组织培养快速生根的方法,其特征在于:
步骤(3)中所述的带芽茎段的长度为3-4cm。
5.根据权利要求1所述的粗糠树组织培养快速生根的方法,其特征在于:
步骤(3)中所述的二次生根培养的条件为:培养温度为22-25℃,光照强度为1800-2400lx,每日光照12h。
6.根据权利要求1所述的粗糠树组织培养快速生根的方法,其特征在于:
步骤(4)中所述的炼苗移栽的具体操作为:
将生根后的幼苗移至温室,置于自然光照下7-10天,使幼苗健壮并木质化,壮苗后开瓶炼苗1-2天,以便适应外界环境;移栽前用水洗净根部培养基,洗去根部培养基后,移栽到高锰酸钾消毒过的珍珠岩中,移栽后即时浇水;移栽后,环境湿度保持在80-90%,环境温度为20-26℃。
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