CN112088776B - 一种高价值用材树种香合欢组培快繁方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种高价值用材树种香合欢组培快繁方法，包括以下步骤：选出优良单株，进行伐桩或环割，萌芽后采集嫩枝作为外植体；对外植体进行清洗、杀菌、消毒后用灭过菌的吸水纸吸干水分；然后进行初代诱导，获取初始芽；对初始芽进行继代增殖培养，获取继代丛芽；对继代丛芽进行生根培养，获取组培生根苗；组培生根苗经炼苗后，移栽入消过毒的育苗容器，最后苗木出圃造林。本发明替换掉现有技术中采用种子繁殖的方式，解决了苗木遗传性状不稳定、苗木参差不齐、繁殖效率不高的问题。

Description

一种高价值用材树种香合欢组培快繁方法
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种高价值用材树种香合欢组培快繁方法。
背景技术
香合欢(Albizia odoratissima(L.f.)Benth)，又名牛角森、黑格，是豆科合欢属的高大落叶乔木，其主要分布于海南、四川、广东、广西、贵州、云南，多垂直分布于海拔800m以下的低山、丘陵的中下部，是广西的乡土树种。香合欢喜光，稍耐阴，较速生，心材比降香黄檀、格木成型更快。其幼龄时树皮浅灰色，具有皮孔，长大后变为黑褐色，呈鳞片状脱落。香合欢幼枝密被绒毛，长大后绒毛脱落。其叶为二回羽状复叶，叶柄基处有1枚腺体，小叶5～17对，基部偏斜，中脉明显。花为头状花序，黄色，且芳香，果为荚果，种子近圆形，暗褐有光泽，坚硬。香合欢树干通直，具有较高的观赏价值，且具有较好的抗逆性，可作为园林行道树使用。香合欢木材美观，纹理致密，材质坚硬而厚重，稳定性强，干燥后不易开裂、变形，心材耐腐及抗虫蛀能力强，是做上等家具、雕刻、建筑、造船等的绝佳材料。不仅如此，其树皮含鞣质12～15％，可作为栲胶原料。香合欢具有耐旱、耐高温、耐贫瘠、适应性强的特点，对改良土壤，改善生态环境具有良好的作用。香合欢的经济价值较高，又因其属于豆科植物，有与根瘤菌共生的特性，因而对改良土壤改善林建生态环境具有重要的作用。
香合欢主要依靠种子繁殖，但由于其种子表皮坚硬致密，吸水能力差，阻碍种子的萌发。且种子具有特殊气味，容易引来昆虫啃食，导致种子繁殖效率不高。因此，对香合欢进行植物组织培养方面的研究，对合理开发利用香合欢具有重要的意义与价值。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种高价值用材树种香合欢组培快繁方法，能够提高初始芽诱导率、丛芽诱导率、生根率及缩短继代增殖周期，以替换掉现有技术中采用种子繁殖的方式，解决苗木遗传性状不稳定、苗木参差不齐、繁殖效率不高的问题。
为了解决以上技术问题，本发明采用以下技术方案：
一种高价值用材树种香合欢组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
A.优株选择：选择经审定的香合欢良种或天然群落中干形通直、生长茂盛、健康无病虫害的香合欢植株为优良单株；
B.外植体选取及处理：对选出的优株进行伐桩或环割，萌芽后采集当年生、带有腋芽或顶芽、长度为3～6cm的嫩枝作为外植体，剪去大部分叶片，用清水冲洗干净，再用去磷洗衣粉浸泡5～15min，然后用软毛刷刷洗外植体，再用清水冲洗0.5～1.2h；在超净台上用浓度为75％的酒精浸泡10～20s，再用无菌水冲洗1～3次，将其放入浓度为0.1％的HgCl2溶液中浸泡15～20min，浸泡的过程中用玻璃棒不断搅拌，再用无菌水冲洗4～6次，用灭过菌的吸水纸吸干水分，备用；
C.初代诱导：取吸干水分的外植体，在无菌条件下，将切口部分剪掉后，插入初代诱导培养基，暗培养5～10天，然后在温度为20～26℃、光照强度1500～2500Lx、光照时间10～12h/d下继续培养5～10天，获取初始芽；
D.继代增殖培养：取芽高为1～5cm的初始芽，在超净台上接入继代增殖培养基，将芽体部分压入培养基中，芽与芽之间不接触，连续培养10-20天，获取继代丛芽；芽高不足1cm的初始芽及减掉初始芽之后的愈伤组织在无菌条件下接入初代诱导培养基继续诱导培养，待长到1cm以上时，再接入继代增殖培养基，进行继代增殖培养；
E.生根培养：对继代丛芽进行筛选，选取生长健壮、芽高为2～5cm的单芽，在无菌条件下接种到生根培养基中，进行生根培养，培养15～20天，获取生长健壮的组培生根苗；
F.炼苗移栽及苗木出圃：选取根数3条以上、根长达到1cm以、生长健壮的组培生根苗，移到室外育苗大棚进行炼苗3～7天，之后用清水洗掉根部培养基，移栽入育苗容器中，淋透水；待组培苗苗高达到30cm以上时，生长健壮、无病虫害的苗木可出圃造林。
进一步，所述的步骤C中的初代诱导培养基由包括以下重量份的原料制备而成：
改良MS 3～5份、6-BA 0.2～0.5份、白糖25～35份、琼脂3～5份。
进一步，所述的步骤D中的继代增殖培养基由包括以下重量份的原料制备而成：
改良MS 3～5份、核黄素0.01～0.02份、抗坏血酸0.005～0.015份、2-iP 1.5～3.0份、NAA 0.4～0.8份、赤霉酸0.1～0.5份、水解蛋白0.1～0.5份、白糖25～35份、琼脂3～5份。
进一步，所述的步骤E中的生根培养基由包括以下重量份的原料制备而成：
改良MS1～3份、核黄素0.01～0.02份、IBA 0.4～0.8份、GRR0.8～1.5份、GA30.1～0.5份、白糖25～35份、琼脂3～5份。
进一步，所述的改良MS由包括以下重量份的原料制备而成：
Na2SeO3 0.1-1份、Ce(NH4)2(NO3)6 0.5～1.5份、NH4NO3 1000～1500份、KNO31000～2000份、MgSO4·7H2O 200～600份、CaCl2·2H2O 400～500份、Ca(NO3)2·4H2O200～300份、KH2PO3 150～200份、K2SO4 100～200份、H3BO3 6～7份、MnSO4·4H2O20～25份、CuSO4·5H2O0.02～0.03份、ZnSO4·7H2O 5～10份、CoCl2·6H2O 0.02～0.03份、Na2MoO4·2H2O 0.2～0.7份、KI 0.5～1.0份、FeSO4·7H2O 25～30份、EDTA-2Na30～40份、盐酸硫胺素0.05～0.15份、烟酸0.2～0.7份、甘氨酸1～3份、肌醇50～150份。
进一步，所述的步骤C中的初代诱导培养基、步骤D中的继代增殖培养基、步骤E中的生根培养基的pH值均为5-6。
进一步，控制继代增殖培养、生根培养的培养条件均为：温度为20～26℃，光照强度1500～2500Lx，光照时间10～12h/d。
进一步，所述的步骤F中育苗基质由包括以下重量份的原料制备而成：黄心土20～70份、腐殖质土或火烧土1～5份、泥炭土30～50份、谷壳1～5份。
进一步，所述的步骤F中的苗木移栽前一周，用代森锌或五氯硝基苯消毒，再装入育苗容器，1d后再用清水淋洒冲洗，正式移栽前一天淋透水；移栽后每天早晚各淋透水一次；一周后，用15-15-15水溶性复合肥喷淋，每10天喷淋1次，苗木生长后期施用磷、钾肥，出圃前20d停止施肥。
进一步，所述的代森锌或五氯硝基苯的用量为每方基质用3～4g；所述的15-15-15水溶性复合肥的浓度为0.75～1.25％。
本发明具有以下有益效果：
1.本发明的组培快繁方法，打破常规，替换掉现有技术中采用种子繁殖的方式，解决了繁殖效率不高的问题，形成了高价值用材树种香合欢组培快繁育苗技术体系，能有效保持香合欢树种遗传性状的稳定性，对于推动香合欢产业的发展具有重要意义，适合推广应用。
2.本发明对MS培养基进行改良，根据初代诱导培养、继代增殖培养、生根培养的特点，分别合理添加改良MS，制备初代诱导培养基、继代增殖培养基、生根培养基，各培养基分别作为整体发挥作用，能够针对性的提高初始芽诱导率、丛芽诱导率、生根率，并缩短继代增殖周期、提高增殖系数。
3.本发明的改良MS中添加了Na2SeO3、Ce(NH4)2(NO3)6两种成分，Na2SeO3中含有硒元素，一方面能够刺激香合欢的生长发育并提高产量和品质，另一方面，硒对汞的毒害效应由拮抗作用，能够缓解汞对香合欢生根发芽所产生的抑制作用，降低根部对汞的吸收和转运，从而缓解汞对香合欢的毒性；Ce(NH4)2(NO3)6中含有的铈元素，可以提高植物的叶绿素含量，增强光合作用，促进种子萌发，提高种子发芽率，促进根系发育，促进幼苗生长，增加根系对养分吸收，同时还可以增强幼苗的抗病、抗寒、抗旱能力；铈元素在促进光合作用的同时，能够促进植体对硒元素的吸收。Na2SeO3、Ce(NH4)2(NO3)6与改良MS中的其他成分及各培养基中的其他组分一起促进了香合欢的生根发芽。
4.由表1的数据可见，Na2SeO3、Ce(NH4)2(NO3)6均有提高初始芽诱导率、丛芽诱导率、生根率、苗木长势及缩短继代增殖周期的效果，但Na2SeO3、Ce(NH4)2(NO3)6一起作用的效果更优于Na2SeO3、Ce(NH4)2(NO3)6分别单独作用效果的叠加，因此Na2SeO3、Ce(NH4)2(NO3)6之间具有协同提高初始芽诱导率、丛芽诱导率、生根率及缩短继代增殖周期、提高增殖系数的效果。
附图说明
图1为本发明实施例2获得的组培继代瓶苗；
图2为本发明实施例2获得的组培生根瓶苗；
图3为本发明实施例2获得的苗木移栽成活小苗。
具体实施方式
为便于更好地理解本发明，通过以下实例加以说明，这些实例属于本发明的保护范围，但不限制本发明的保护范围。
下面通过更具体实施例对本发明进行说明。
实施例1
一种高价值用材树种香合欢组培快繁方法，包括以下步骤：
A.优株选择：选择经审定的香合欢良种或天然群落中干形通直、生长茂盛、健康无病虫害的香合欢植株为优良单株；
B.外植体选取及处理：对选出的优株进行伐桩或环割，萌芽后采集当年生、带有腋芽或顶芽、长度为3cm的嫩枝作为外植体，剪去大部分叶片，用清水冲洗干净，再用去磷洗衣粉浸泡5min，然后用软毛刷刷洗外植体，再用清水冲洗0.5h；在超净台上用浓度为75％的酒精浸泡10s，再用无菌水冲洗1次，将其放入浓度为0.1％的HgCl2溶液中浸泡15min，浸泡的过程中用玻璃棒不断搅拌，再用无菌水冲洗4次，用灭过菌的吸水纸吸干水分，备用；
C.用以下原料制备改良MS：Na2SeO3 0.1mg/L、Ce(NH4)2(NO3)6 0.5mg/L、NH4NO31000mg/L、KNO3 1000mg/L、MgSO4·7H2O 200mg/L、CaCl2·2H2O 400g、Ca(NO3)24H2O 200mg/L、KH2PO3 150mg/L、K2SO4 100mg/L、H3BO3 6mg/L、MnSO4·4H2O 20mg/L、CuSO4·5H2O0.02mg/L、ZnSO4·7H2O 5mg/L、CoCl2·6H2O 0.02mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.2mg/L、KI 0.5mg/L、FeSO4·7H2O 25mg/L、EDTA-2Na 30mg/L、盐酸硫胺素0.05mg/L、烟酸0.2mg/L、甘氨酸1mg/L、肌醇50mg/L；
用以下原料制备初代诱导培养基：改良MS 3g/L、6-BA 0.2mg/L、白糖25g/L、琼脂3g/L；
用以下原料制备继代增殖培养基：改良MS 3g/L、核黄素0.01g/L、抗坏血酸0.005g/L、2-iP 1.5mg/L、NAA 0.4mg/L、赤霉酸0.1mg/L、水解蛋白0.1g/L、白糖25g/L、琼脂3g/L；
用以下原料制备生根培养基：改良MS 1g/L、核黄素0.01g/L、IBA 0.4mg/L、GRR0.8mg/L、GA 3 0.1mg/L、白糖25g/L、琼脂3g/L；
用以下原料制备育苗基质：黄心土20g、腐殖质土50g、泥炭土30g、谷壳1g。
D.初代诱导：取吸干水分的外植体，在无菌条件下，将切口部分剪掉后，插入pH值为5的初代诱导培养基，暗培养5天，然后在温度20℃，光照强度1500Lx，光照时间10h/d下继续培养5天，获取初始芽；
E.继代增殖培养：取芽高为1～5cm的初始芽，在超净台上接入pH值为5的继代增殖培养基，将芽体部分压入培养基中，芽与芽之间不接触，连续培养17天，获取继代丛芽；继代增殖培养的增殖系数为7.2；芽高不足1cm的初始芽及减掉初始芽之后的愈伤组织在无菌条件下接入初代诱导培养基继续诱导培养，待长到1cm以上时，再接入继代增殖培养基，进行继代增殖培养；控制培养条件为：温度20℃，光照强度1500Lx，光照时间10h/d；
F.生根培养：对继代丛芽进行筛选，选取生长健壮、芽高为2～5cm的单芽，在无菌条件下接种到pH值为5的生根培养基中，进行生根培养，培养15天开始生根，培养20天，生根率达到98.2％；控制培养条件为：温度20℃，光照强度1500Lx，光照时间10h/d；
G.炼苗移栽及苗木出圃：选取根数3条上、根长达到1cm以上、生长健壮的组培生根苗，移到室外育苗大棚进行炼苗3天，之后用清水洗掉根部培养基，移栽入育苗容器中，淋透水；苗木移栽前一周，每方基质用3g代森锌或五氯硝基苯消毒，再装入育苗容器，1d后再用清水淋洒冲洗，正式移栽前一天淋透水；移栽后每天早晚各淋透水一次；一周后，用浓度为0.75％的15-15-15水溶性复合肥喷淋，每10天喷淋1次，苗木生长后期施用磷、钾肥，出圃前20d停止施肥；待组培苗苗高达到30cm以上时，生长健壮、无病虫害的苗木可出圃造林。
实施例2
一种高价值用材树种香合欢组培快繁方法，包括以下步骤：
A.优株选择：选择经审定的香合欢良种或天然群落中干形通直、生长茂盛、健康无病虫害的香合欢植株为优良单株；
B.外植体选取及处理：对选出的优株进行伐桩或环割，萌芽后采集当年生、带有腋芽或顶芽、长度为4cm的嫩枝作为外植体，剪去大部分叶片，用清水冲洗干净，再用去磷洗衣粉浸泡10min，然后用软毛刷刷洗外植体，再用清水冲洗1h；在超净台上用浓度为75％的酒精浸泡15s，再用无菌水冲洗2次，将其放入浓度为0.1％的HgCl2溶液中浸泡18min，浸泡的过程中用玻璃棒不断搅拌，再用无菌水冲洗5次，用灭过菌的吸水纸吸干水分，备用；
C.用以下原料制备改良MS：Na2SeO3 0.5mg/L、Ce(NH4)2(NO3)6 1mg/L、NH4NO31200mg/L、KNO3 1500mg/L、MgSO4·7H2O 400mg/L、CaCl2·2H2O 450mg/L、Ca(NO3)2·4H2O250mg/L、KH2PO3 170mg/L、K2SO4 150mg/L、H3BO3 6.5mg/L、MnSO4·4H2O 22mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、ZnSO4·7H2O 8mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.5mg/L、KI0.8mg/L、FeSO4·7H2O 28mg/L、EDTA-2Na 35mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、烟酸0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L；
用以下原料制备初代诱导培养基：改良MS 4.5g/L、6-BA0.3mg/L、白糖30g/L、琼脂4g/L；
用以下原料制备继代增殖培养基：改良MS 4.5g/L、核黄素0.015g/L、抗坏血酸0.01g/L、2-iP 2mg/L、NAA 0.6mg/L、赤霉酸0.3mg/L、水解蛋白0.3g/L、白糖30g/L、琼脂4g/L；
用以下原料制备生根培养基：改良MS 2.2g/L、核黄素0.015g/L、IBA 0.6mg/L、GRR1.2mg/L、GA3 0.3mg/L、白糖30g/L、琼脂4g/L；
用以下原料制备育苗基质：黄心土50g、火烧土30g、泥炭土40g、谷壳3g；
D.初代诱导：取吸干水分的外植体，在无菌条件下，将切口部分剪掉后，插入pH值为5.5的初代诱导培养基，暗培养8天，然后在温度23℃，光照强度2000Lx，光照时间11h/d下继续培养8天，获取初始芽；
E.继代增殖培养：取芽高为1～5cm的初始芽，在超净台上接入pH值为5.5的继代增殖培养基，将芽体部分压入培养基中，芽与芽之间不接触，连续培养15天，获取继代丛芽；继代增殖培养的增殖系数为7.6；芽高不足1cm的初始芽及减掉初始芽之后的愈伤组织在无菌条件下接入初代诱导培养基继续诱导培养，待长到1cm以上时，再接入继代增殖培养基，进行继代增殖培养；控制培养条件为：温度为23℃，光照强度2000Lx，光照时间11h/d；
F.生根培养：对继代丛芽进行筛选，选取生长健壮、芽高为2～5cm的单芽，在无菌条件下接种到pH值为5.5的生根培养基中，进行生根培养，培养12天开始生根，培养15天，生根率达到99.6％；控制培养条件为：温度为23℃，光照强度2000Lx，光照时间11h/d；
G.炼苗移栽及苗木出圃：选取根数3条以上、根长达到1cm以上、生长健壮的组培生根苗，移到室外育苗大棚进行炼苗5天，之后用清水洗掉根部培养基，移栽入育苗容器中，淋透水；苗木移栽前一周，每方基质用3.5g代森锌或五氯硝基苯消毒，再装入育苗容器，1d后再用清水淋洒冲洗，正式移栽前一天淋透水；移栽后每天早晚各淋透水一次；一周后，用浓度为1.0％的15-15-15水溶性复合肥喷淋，每10天喷淋1次，苗木生长后期施用磷、钾肥，出圃前20d停止施肥；待组培苗苗高达到30cm以上时，生长健壮、无病虫害的苗木可出圃造林。
实施例3
一种高价值用材树种香合欢组培快繁方法，包括以下步骤：
A.优株选择：选择经审定的香合欢良种或天然群落中干形通直、生长茂盛、健康无病虫害的香合欢植株为优良单株；
B.外植体选取及处理：对选出的优株进行伐桩或环割，萌芽后采集当年生、带有腋芽或顶芽、长度为6cm的嫩枝作为外植体，剪去大部分叶片，用清水冲洗干净，再用去磷洗衣粉浸泡15min，然后用软毛刷刷洗外植体，再用清水冲洗1.2h；在超净台上用浓度为75％的酒精浸泡20s，再用无菌水冲洗3次，将其放入浓度为0.1％的HgCl2溶液中浸泡20min，浸泡的过程中用玻璃棒不断搅拌，再用无菌水冲洗6次，用灭过菌的吸水纸吸干水分，备用；
C.用以下原料制备改良MS：Na2SeO3 1mg/L、Ce(NH4)2(NO3)6 1.5mg/L、NH4NO31500mg/L、KNO3 2000mg/L、MgSO4·7H2O 600mg/L、CaCl2·2H2O 500mg/L、Ca(NO3)2·4H2O300mg/L、KH2PO3 200mg/L、K2SO4 200mg/L、H3BO3 7mg/L、MnSO4·4H2O 25mg/L、CuSO4·5H2O0.03mg/L、ZnSO4·7H2O 10mg/L、CoCl2·6H2O 0.03mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.7mg/L、KI 1mg/L、FeSO4·7H2O 30mg/L、EDTA-2Na 40mg/L、盐酸硫胺素0.15mg/L、烟酸0.7mg/L、甘氨酸3mg/L、肌醇150mg/L；
用以下原料制备初代诱导培养基：改良MS 5g/L、6-BA0.5mg/L、白糖35g/L、琼脂5g/L；
用以下原料制备继代增殖培养基：改良MS 5g/L、核黄素0.02g/L、抗坏血酸0.015g/L、2-iP 3mg/L、NAA 0.8mg/L、赤霉酸0.5mg/L、水解蛋白0.5g/L、白糖35g/L、琼脂5g/L；
用以下原料制备生根培养基：改良MS 3g/L、核黄素0.02g/L、IBA 0.8mg/L、GRR1.5mg/L、GA3 0.5mg/L、白糖35g/L、琼脂5g/L；
用以下原料制备育苗基质：黄心土70g、腐殖质土10g、泥炭土50g、谷壳5g。
D.初代诱导：取吸干水分的外植体，在无菌条件下，将切口部分剪掉后，插入pH值为6的初代诱导培养基，暗培养10天，然后在温度26℃，光照强度2500Lx，光照时间12h/d下继续培养10天，获取初始芽；
E.继代增殖培养：取芽高为1～5cm的初始芽，在超净台上接入pH值为6的继代增殖培养基，将芽体部分压入培养基中，芽与芽之间不接触，连续培养16天，获取继代丛芽；继代增殖培养的增殖系数为7.4；芽高不足1cm的初始芽及减掉初始芽之后的愈伤组织在无菌条件下接入初代诱导培养基继续诱导培养，待长到1cm以上时，再接入继代增殖培养基，进行继代增殖培养；控制培养条件为：温度26℃，光照强度2500Lx，光照时间12h/d；
F.生根培养：对继代丛芽进行筛选，选取生长健壮、芽高为2～5cm的单芽，在无菌条件下接种到pH值为6的生根培养基中，进行生根培养，培养13天开始生根，培养16天，生根率达到99.1％；控制培养条件为：温度26℃，光照强度2500Lx，光照时间12h/d；
G.炼苗移栽及苗木出圃：选取根数3条以上、根长达到1cm以上、生长健壮的组培生根苗，移到室外育苗大棚进行炼苗7天，之后用清水洗掉根部培养基，移栽入育苗容器中，淋透水；苗木移栽前一周，每方基质用4g代森锌或五氯硝基苯消毒，再装入育苗容器，1d后再用清水淋洒冲洗，正式移栽前一天淋透水；移栽后每天早晚各淋透水一次；一周后，用浓度为1.25％的15-15-15水溶性复合肥喷淋，每10天喷淋1次，苗木生长后期施用磷、钾肥，出圃前20d停止施肥；待组培苗苗高达到30cm以上时，生长健壮、无病虫害的苗木可出圃造林。
对比例1
与实施例2基本相同，唯有不同的是改良MS的制备原料缺少Na2SeO3、Ce(NH4)2(NO3)6。
对比例2
与实施例2基本相同，唯有不同的是改良MS的制备原料中缺少Na2SeO3。
对比例3
与实施例2基本相同，唯有不同的是改良MS的制备原料中缺少Ce(NH4)2(NO3)6。
对比例4
与实施例2基本相同，唯有不同的是继代增殖培养基采用“香合欢硬实破除及从芽诱导”公开的最佳从芽诱导培养基。
实施例4
1.分别采用本发明实施例1-3及对比例1-4的处理方式进行处理，将处理结果进行对比。
2.数据统计
初始芽诱导率＝(诱导出初始芽的外植体数/外植体总数)×100％；
丛芽诱导率＝(诱导出丛芽的初始芽数/初始芽总数)×100％；
增殖系数＝增殖数/原个体数；
生根率＝(诱导生根的继代丛芽数/继代丛芽总数)×100％；
苗木长势＝苗高达到30cm以上所用的天数。
3.对比结果
对比结果如下表1所示。
表1各处理初始芽诱导率、继代增殖周期、增殖系数对比
试验组 初始芽诱导率/％ 丛芽诱导率/％ 继代增殖周期 增殖系数 生根率/％ 苗木长势/d
实施例1 97.3 98.5 17 7.2 98.2 60
实施例2 98.3 98.9 15 7.6 99.6 59
实施例3 97.9 98.1 16 7.4 99.1 60
对比例1 89.9 90.6 20 5.1 89.8 73
对比例2 94.8 95.3 18 6.6 95.4 66
对比例3 94.2 95.0 18 6.4 94.9 68
对比例4 93.0 88.5 20 4.5 \ \
由表1可知：实施例2为最优实施例；
(1)与实施例2相比，在其他制备条件相同的基础上，对比例1中制备改良MS的原料中缺少Na2SeO3、Ce(NH4)2(NO3)6，其初始芽诱导率降低8.4％，丛芽诱导率降低8.3％，继代增殖周期增加5天，增殖系数降低2.5，生根率比实施例2降低9.8％，苗木长势增加14天；
(2)与实施例2相比，在其他制备条件相同的基础上，对比例2中制备改良MS的原料中缺少Na2SeO3，其初始芽诱导率降低3.5％，丛芽诱导率降低3.6％，继代增殖周期增加3天，增殖系数降低1.0，生根率降低4.2％；苗木长势增加7天；
(3)与实施例2相比，在其他制备条件相同的基础上，对比例3中制备改良MS的原料中缺少Ce(NH4)2(NO3)6，其初始芽诱导率降低4.1％，丛芽诱导率降低3.9％，继代增殖周期增加3天，增殖系数降低1.2，生根率降低4.7％；苗木长势增加9天；
(4)与实施例2相比，在其他制备条件相同的基础上，对比例4的继代增殖培养基采用“香合欢硬实破除及从芽诱导”公开的最佳从芽诱导培养基，其初始芽诱导率降低5.1％，丛芽诱导率降低10.4％，继代增殖周期增加5天；
(5)由(1)可知，与实施例2相比，Na2SeO3、Ce(NH4)2(NO3)6一起作用时可将初始芽诱导率提高8.4％，将丛芽诱导率提高8.3％，将继代增殖周期缩短5天，将增殖系数提高2.5，将生根率提高9.4％，将苗木长势减少14天；由(2)可知Na2SeO3单独作用时，可将初始芽诱导率提高3.5％，将丛芽诱导率提高3.6％，将继代增殖周期缩短3天，将增殖系数提高1.0，将生根率提高4.2％，苗木长势减少7天；由(3)可知Ce(NH4)2(NO3)6单独作用时，可将初始芽诱导率提高4.1％，将丛芽诱导率提高3.9％，将继代增殖周期缩短3天，将增殖系数提高1.2，将生根率提高4.7％，苗木长势减少9天。
由此可以计算Na2SeO3、Ce(NH4)2(NO3)6一起作用时比Na2SeO3、Ce(NH4)2(NO3)6分别单独作用时，初始芽诱导率提高效果增加了：[8.4-(3.5+4.1)]÷(3.5+4.1)×100％＝10.5％＞10％；丛芽诱导率提高效果增加了：[8.3-(3.6+3.9)]÷(3.6+3.9)×100％＝10.7％＞10％；继代增殖周期缩短效果增加了：[(3+3)-5]÷(3+3)×100％＝16.6％＞10％；增殖系数提高效果增加了：[2.5-(1.0+1.2)]÷(1.0+1.2)×100％＝13.6％＞10％；生根率提高效果增加了：[9.8-(4.2+4.7)]÷(4.2+4.7)×100％＝10.1％＞10％；苗木长势提高效果增加了：[(7+9)-14]÷(7+9)×100％＝12.5％＞10％。因此Na2SeO3、Ce(NH4)2(NO3)6一起使用时产生了协同作用，协同促进了生根发芽及苗木长高，协同缩短了继代增殖周期、提高了增殖系数。
(6)由图1可以看出，本发明实施例2获得的继代丛芽继代从芽出芽数较多，长势均匀，芽株健壮，活力旺盛；由图2可以看出，本发明实施例2获得的组培生根苗根系多且健壮；由图3可以看出，本发明实施例2获得的组培苗移栽后均能成活，且长势好，苗高比较均匀，叶片饱满。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种高价值用材树种香合欢组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
A.优株选择：选择经审定的香合欢良种或天然群落中干形通直、生长茂盛、健康无病虫害的香合欢植株为优良单株；
B.外植体选取及处理：对选出的优株进行伐桩或环割，萌芽后采集当年生带有腋芽或顶芽、长度为3～6cm的嫩枝作为外植体，剪去大部分叶片，用清水冲洗干净，再用去磷洗衣粉浸泡5～15min，然后用软毛刷刷洗外植体，再用清水冲洗0.5～1.2h；在超净台上用浓度为75％的酒精浸泡10～20s，再用无菌水冲洗1～3次，将其放入浓度为0.1％的HgCl2溶液中浸泡15～20min，浸泡的过程中用玻璃棒不断搅拌，再用无菌水冲洗4～6次，用灭过菌的吸水纸吸干水分，备用；
C.初代诱导：取吸干水分的外植体，在无菌条件下，将切口部分剪掉后，插入初代诱导培养基，暗培养5～10天，然后在温度为20～26℃、光照强度1500～2500Lx、光照时间10～12h/d下继续培养5～10天，获取初始芽；
D.继代增殖培养：取芽高为1～5cm的初始芽，在超净台上接入继代增殖培养基，将芽体部分压入培养基中，芽与芽之间不接触，连续培养10-20天，获取继代丛芽；芽高不足1cm的初始芽及减掉初始芽之后的愈伤组织在无菌条件下接入初代诱导培养基继续诱导培养，待长到1cm以上时，再接入继代增殖培养基，进行继代增殖培养；
E.生根培养：对继代丛芽进行筛选，选取生长健壮、芽高为2～5cm的单芽，在无菌条件下接种到生根培养基中，进行生根培养，培养15～20天，获取生长健壮的组培生根苗；
F.炼苗移栽及苗木出圃：选取根数3条以上、根长达到1cm以上、生长健壮的组培生根苗，移到室外育苗大棚进行炼苗3～7天，之后用清水洗掉根部培养基，移栽入育苗容器中，淋透水；待组培苗苗高达到30cm以上时，生长健壮、无病虫害的苗木可出圃造林；
所述的步骤C中的初代诱导培养基由包括以下重量份的原料制备而成：改良MS3～5份、6-BA 0.0002～0.0005份、白糖25～35份、琼脂3～5份；
所述的步骤D中的继代增殖培养基由包括以下重量份的原料制备而成：改良MS3～5份、核黄素0.01～0.02份、抗坏血酸0.005～0.015份、2-iP 0.0015～0.003份、NAA 0.0004～0.0008份、赤霉酸0.0001～0.0005份、水解蛋白0.1～0.5份、白糖25～35份、琼脂3～5份；
所述的步骤E中的生根培养基由包括以下重量份的原料制备而成：改良MS 1～3份、核黄素0.01～0.02份、IBA 0.0004～0.0008份、GRR 0.0008～0.0015份、GA3 0.0001～0.0005份、白糖25～35份、琼脂3～5份；
所述的改良MS由包括以下重量份的原料制备而成：Na2SeO3 0.1～1份、Ce(NH4)2(NO3)60.5～1.5份、NH4NO3 1000～1500份、KNO3 1000～2000份、MgSO4·7H2O 200～600份、CaCl2·2H2O 400～500份、Ca(NO3)2·4H2O 200～300份、KH2PO3 150～200份、K2SO4 100～200份、H3BO3 6～7份、MnSO4·4H2O 20～25份、CuSO4·5H2O 0.02～0.03份、ZnSO4·7H2O 5～10份、CoCl2·6H2O 0.02～0.03份、Na2MoO4·2H2O 0.2～0.7份、KI 0.5～1份、FeSO4·7H2O 25～30份、EDTA-2Na 30～40份、盐酸硫胺素0.05～0.15份、烟酸0.2～0.7份、甘氨酸1～3份、肌醇50～150份。
2.根据权利要求1所述的高价值用材树种香合欢组培快繁方法，其特征在于：所述的培养基的pH值均为5-6。
3.根据权利要求1所述的高价值用材树种香合欢组培快繁方法，其特征在于：控制继代增殖培养、生根培养的培养条件为：温度为20～26℃，光照强度1500～2500Lx，光照时间10～12h/d。
4.根据权利要求1所述的高价值用材树种香合欢组培快繁方法，其特征在于：所述的步骤F中育苗基质由包括以下重量份的原料制备而成：黄心土20～70份、腐殖质土或火烧土10～50份、泥炭土30～50份、谷壳1～5份。
5.根据权利要求1所述的高价值用材树种香合欢组培快繁方法，其特征在于：所述的步骤F中的苗木移栽前一周，用代森锌或五氯硝基苯消毒，再装入育苗容器，1d后再用清水淋洒冲洗，正式移栽前一天淋透水；移栽后每天早晚各淋透水一次；一周后，用15-15-15水溶性复合肥喷淋，每10天喷淋1次，苗木生长后期施用磷、钾肥，出圃前20d停止施肥。
6.根据权利要求5所述的高价值用材树种香合欢组培快繁方法，其特征在于：所述的代森锌或五氯硝基苯的用量为每方基质用3～4g；所述的15-15-15水溶性复合肥的浓度为0.75～1.25％。
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Assignee: Guangxi Tengxian Ranheli Agricultural Trade Co.,Ltd.

Assignor: GUANGXI ZHUANG AUTONOMOUS REGION FORESTRY Research Institute

Contract record no.: X2022450000421

Denomination of invention: A Method for Tissue Culture and Rapid Propagation of Leucaena leucocephala

Granted publication date: 20220318

License type: Common License

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