CN103250645B - 艾纳香的快速繁殖与移栽方法 - Google Patents

艾纳香的快速繁殖与移栽方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种艾纳香的种苗快速繁殖与移栽方法,包括外植体抗褐化、消毒、初代诱导、继代增殖、生根诱导及瓶苗移栽等技术环节,是以艾纳香带叶柄的嫩叶或带腋芽的幼嫩茎段为外植体诱导丛生芽,然后用丛生芽带茎段的完整叶片为继代增殖材料,或直接生根诱导材料,提供了整套艾纳香种苗快速繁殖及瓶苗移栽方法。本方法能显著降低外植体的褐化率和污染率,外植体初诱导接种成活率达90%以上,继代增殖周期为35天,能直接用丛生芽带茎段的完整叶片进行生根诱导,生根率达100%,瓶苗移栽方法简便易行,成活率达90%以上,可为解决艾纳香规模化种植种苗奇缺提供技术保障。

Description

艾纳香的快速繁殖与移栽方法
技术领域
[0001] 本发明涉及艾纳香的快速繁殖与移栽方法。
背景技术
[0002] 菊科Compositae艾纳香属Blumea DC.植物全世界.约80余种,分布于热带和亚热带的亚洲、非洲及大洋洲;我国30种,分布于长江流域以南各省区;贵州有14种,罗甸有艾纳香属植物8种,其中艾纳香财.balsamifera (L.)DC、千头艾纳香
7a/?c<9o7ar7aRoxb、柔毛艾纳香 mollis (D.Don)Merr.、见霜黄Iacera (Burm.f.) DC.、六耳铃财.Zacifliaia (Roxb.) DC均有较好的药用价值。艾纳香为多年生草本植物,全草入药,主治感冒、风湿性关节炎、产后风痛、痛经;外用治跌打损伤、疮疖痛肿、湿疹、皮炎等,是重要中药材冰片的原材料。艾纳香人工种植有较长的历史,早在1938年前后,罗甸、望谟两县民间就有种植艾纳香提取艾粉的习俗,历史上罗甸是中国艾纳香人工种植原产地,有丰富的艾纳香植物资源,目前,种苗繁殖困难是制约艾纳香植物规模化种植发展利用的主要原因。
[0003] 艾纳香植物为头状花序,花序外围的雌花多层,能育,中央的两性花多数或较少数,能育或极少不完全发育。外围种子育性好,但成熟后易随风飘逝,不易采集;内层种子易采集,但育性差,有休眠现象。何元农等(2007)对艾纳香种子进行人工育苗试验发现,艾纳香种子有一定的休眠期,低温有助于打破种子休眠,但发芽率低于5.8%,难于人工育苗为生产上提供大量的种子实生苗。艾纳香种植长期以枝干、根系的萌生苗分生繁殖为主。何元农等(2004)对艾纳香分生苗的类型和移栽性能进行系统研究,发现艾纳香无性繁殖以根生苗为主要苗源,苗质参差不齐导致苗源地点、供苗量和时间以及种苗群体统一标准的可控性有限,是艾纳香GAP规模化基地建设的一大障碍;通过对罗甸、荔波地区1995年-2003年多个艾纳香规模化种植基地种苗移栽成活率较低的原因进行探讨,发现茎腐病是导致分生苗移栽死亡的主要病因;分生苗根系弱,远距离运输易失水萎蔫也是导致移栽死亡的主要原因(何元农等,2005)。
[0004] 艾纳香属植物组培快繁育苗技术研究目前有少量报道。姚绍嫦等(2012)对馥芳艾纳香QBl.Aromatica)种用带腋芽莖段采用常规氯化萊消毒后接种在MS+2.0mg/L6_BA+0.2mg/LNAA 培养基上诱导产生丛生芽,用 MS+2.0mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.2mg/LNAA 进行继代增殖,最适生根培养基为1/2MS+0.3mg/LNAA ;并对该方法申报专利保护(申请号:20120051539.0)。张明珍(2007)在硕士学位论文“滇桂艾纳香组织培养体系建立的研究”中,认为不同外植体需用不同比例的次氯酸钠、氯化汞和双氧水溶液组合后才能达到较好的消毒效果;初诱 导和继代增殖最佳培养基为MS培养基,最佳激素组合为6-BA+NAA,最佳生根培养为1/2MS+NAA。包国庆等(2007)在“滇桂艾纳香药材的快速繁殖方法”专利申请说明书中做了与张明珍硕士论文相似的论述。菲律宾国家农业部的Thelma L.(2009)博士用艾纳香种幼嫩茎尖用MS+1.0mg/L6-BA进行茎段培养,用MS+0.5-1.0mg/LNAA可从茎段诱导生根。发明内容
[0005] 本发明要解决的技术问题是:提供一种能在短时间内培育出遗传性状与优质母本相同的大量优质种苗的方法。
[0006] 本发明的技术方案是:
[0007] 一种艾纳香的快速繁殖方法,包含以下步骤:
[0008] (I)外植体抗褐化及消毒处理:将从野外采集的艾纳香带叶柄的嫩叶或带腋芽的幼嫩莖段外植体冲洗干净后,用3000mg/L维生素C+2000 mg/L庆大霉素的蒸懼水溶液浸泡60min,然后用2000mg/L高锰酸钾蒸馏水溶液浸泡30min,用蒸馏水冲洗3_5次,再用1000mg/L氯化汞水溶液常规消毒;
[0009] (2)初诱导培养:将消毒后的外植体接种在基本培养基+0.5mg/L TDZ+1.0mg/L6-BA+0.5 mg/L IBA的初诱导培养基上进行培养;
[0010] (3)继代增殖培养:将初诱导培养产生的丛生芽剪切成带茎段完整叶片后接种于基本培养基+0.2mg/L TDZ +0.8mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA的继代增殖培养基上进行培养;
[0011] (4)生根诱导培养:将继代增殖形成的丛生芽剪切成带茎段完整叶片后接种于基本培养基 +1000mg/L 花宝 I 号 + 1000mg/L 活性炭 +0.3 mg/L 6-BA+1.0 mg/L IBA 的生根培养基上进行培养。
[0012] 一种艾纳香的移栽方法,包含以下步骤:
[0013] (I)炼苗方法:将权利要求1中生根诱导培养的艾纳香,生根培养50天,苗高
3-5cm,根系5-10根,长度l-5cm的瓶苗带瓶移入遮荫率70%的大棚,在环境温度20_30°C的条件下炼苗培养7-10天;
[0014] (2)基质处理:将蛭石+砂质黄壤按体积比1:1混合成混合基质,然后用5000mg/L的多菌灵水溶液消毒处理后装入5cmX8cm的营养袋中;
[0015] (3)幼苗移栽及管理方法:将炼苗后的瓶苗取出,用水清洗干净根系,置于有少量水分的磁盘中,将幼苗植入步骤(2)中已消毒装袋的基质中,每袋I株,然后浇透水,遮荫70%,移栽初期半月内,每天喷雾2-3次,半月后喷雾1-2次,保持苗床周围空气相对湿度在85%以上,温度20-30°C。
[0016] 本发明提供的整套艾纳香种苗快速繁殖与移栽方法,能在短时间内培育质量整齐的大量种苗,成本低廉。该方法育苗不仅能使选育出的优质种源得到快速繁殖利用,而且没有茎腐病的危害,同时采用营养袋育苗的方法,可随时上山定植,且保障上山定植的成活率。该方法适用于工厂化育苗生产。
具体实施方式
[0017]实施例1
[0018] ①外植体抗褐化、消毒处理:3-4月份采取萌发5-10天的幼嫩叶片,将叶片冲洗干净后,用3000mg/L维生素C+2000 mg/L庆大霉素的蒸馏水溶液浸泡60min,然后用2000mg/L高锰酸钾蒸馏水溶液浸泡30min,用蒸馏水冲洗3_5次,将嫩叶在超净工作台上修剪成叶柄长0.2-0.5cm,叶面积大小0.5-1.0cm2的外植体,再用1000mg/L氯化萊水溶液常规消毒lOmin,取出清水冲洗4-5次。[0019] ②各阶段均采用相同基本培养基:l/2MS+12g/L琼脂+30g/L蔗糖,pH值6.0 ;
[0020] 各阶段培养条件为:温度24-26°C,光照为1500-2000Lux,光照时间为12_14hr/d。
[0021] ③外植体初诱导培养:将消毒后的叶片外植体叶柄基部植入基本培养基(1/21^+128/1琼脂+308/1蔗糖,?!1值5.8。下同)+0.5mg/L TDZ (噻苯隆)+1.0mg/L 6-BA(6苄氨基嘌呤)+0.5 mg/L IBA (吲哚丁酸)的初诱导培养基中。每瓶接种5片,接种10瓶。接种3d后,92%外植体成活,8%褐化死亡;接种25天后,叶柄基部产生1_3株丛生芽,每株芽2-3片叶,诱导率70%。外植体分泌的黄色次生代谢物质是使接种成活外植体褐化死亡的主要原因。
[0022] ④丛生芽继代增殖培养:初诱导45-50天后,丛生芽高度约l-2cm,每芽2_4叶,将丛生芽取出剪切成叶柄基部带l_2mm长茎段的完整叶片后接种于基本培养基+0.2mg/L TDZ+0.8mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA的继代增殖培养基上,继代培养7_10d后,在叶柄与茎段交接处产生高0.5cm的腋芽,培养35天左右,腋芽长成高2-3cm的有6_8叶的单株幼苗,重复剪取每片嫩叶作为继代增殖材料,反复继代6-8次,幼苗品质均未退化,继代增殖诱导率达100%,增殖倍数6.0以上。
[0023] ⑤丛生芽生根诱导培养:将继代增殖形成的丛生芽剪切成叶柄基部带l_2mm长茎段的完整叶片后接种于基本培养基+1000mg/L花宝I号+ 1000mg/L活性炭+0.3 mg/L6-BA+1.0 mg/L IBA的生根培养基上,培养30天后,腋芽长成高2_3cm的有3_4叶的单株幼苗,产生5-10条根系,长度0.5-1.0cm,培养50天后,苗高3_5cm,根系长l_5cm,生根率达
100% ο
[0024] ⑥瓶苗炼苗:将生根培养50天,苗高3_5cm,根系5-10根,长度l_5cm的瓶苗带瓶移入遮荫率70%的大棚,在环境温度20-30°C的条件下炼苗培养7-10d。
[0025] ⑦基质处理:将体积比为1:1的蛭石+砂质黄壤混合基质提前7-10d用5000mg/L的多菌灵水溶液消毒处理后装入5cmX8cm的营养袋中。
[0026] ⑧幼苗移栽及管理方法:将炼苗后的瓶苗取出,用水清洗干净根系,置于有少量水分的磁盘中,将幼苗植入已消毒装袋的基质中,每袋I株,然后浇透水,遮荫70%,移栽初期半月内,每天喷雾2-3次,半月后喷雾1-2次,保持苗床周围空气相对湿度在85%以上,温度20-30°C,移栽成活率可达90%以上。
[0027] 实施例2
[0028] ①外植体抗褐化、消毒处理:3-4月份采取有5-6片嫩叶的幼嫩茎段,将
[0029] 茎段冲洗干净后,用3000mg/L维生素C+2000 mg/L庆大霉素的蒸馏水溶液浸泡60min,然后用2000mg/L高锰酸钾蒸馏水溶液浸泡30min,用蒸馏水冲洗3_5次,将茎段在超净工作台上修剪成长0.5-1.0cm带I个腋芽的茎段外植体,再用1000mg/L氯化汞水溶液常规消毒lOmin,取出清水冲洗4-5次。
[0030] ②各阶段均采用相同基本培养基:l/2MS+12g/L琼脂+30g/L蔗糖,pH值5.8 ;
[0031] 各阶段培养条件为:温度24-26°C,光照为1500-2000Lux,光照时间为12_14hr/d。
[0032] ③外植体初诱导培养:将消毒后的茎段外植体按照茎段极性生长方向下端植入基本培养基(l/2MS+12g/L 琼脂 +30g/L 蔗糖,pH 值 5.8。下同)+0.5mg/L TDZ(噻苯隆)+1.0mg/L 6-BA (6苄氨基嘌呤)+0.5 mg/L IBA (吲哚丁酸)的初诱导培养基中。每瓶接种5个,接种10瓶。接种3d后,90%外植体成活,10%褐化死亡;接种15天后,腋芽萌动,每个株芽1-3片叶,诱导率76%。外植体染菌、褐化是使接种成活外植体死亡的主要原因。
[0033] ④丛生芽继代增殖培养:初诱导35-45天后,腋芽高度约2-3cm,每芽3_5叶,将腋芽取出剪切成叶柄基部带l_2mm长茎段的完整叶片后接种于基本培养基+0.2mg/L TDZ+0.8mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA的继代增殖培养基上,继代培养7_10d后,在叶柄与茎段交接处产生高0.5cm的腋芽,培养35天左右,腋芽长成高2-3cm的有6_8叶的单株幼苗,重复剪取每片嫩叶作为继代增殖材料,反复继代6-8次,幼苗品质均未退化,继代增殖诱导率达100%,增殖倍数6.0以上。
[0034] ⑤丛生芽生根诱导培养:将继代增殖形成的丛生芽剪切成叶柄基部带l_2mm长茎段的完整叶片后接种于基本培养基+1000mg/L花宝I号+ 1000mg/L活性炭+0.3 mg/L6-BA+1.0 mg/L IBA的生根培养基上,培养30天后,腋芽长成高2_3cm的有3_5叶的单株幼苗,产生5-10条根系,长度0.5-1.0cm,培养50天后,苗高3_5cm,根系长l_5cm,生根率达
100% ο
[0035] ⑥瓶苗炼苗:将生根培养50天,苗高3_5cm,根系5_10根,长度l_5cm的瓶苗带瓶移入遮荫率70%的大棚,在环境温度20-30°C的条件下炼苗培养7-10d。
[0036] ⑦基质处理:将体积比为1:1的蛭石+砂质黄壤混合基质提前7-10d用5000mg/L的多菌灵水溶液消毒处理后装入5cmX8cm的营养袋中。
[0037] ⑧幼苗移栽及管理方法:将炼苗后的瓶苗取出,用水清洗干净根系,置于有少量水分的磁盘中,将幼苗植入已消毒装袋的基质中,每袋I株,然后浇透水,遮荫70%,移栽初期半月内,每天喷雾 2-3次,半月后喷雾1-2次,保持苗床周围空气相对湿度在85%以上,温度20-30°C,移栽成活率可达90%以上。

Claims (1)

1.一种艾纳香的快速繁殖方法,其特征在于:包含以下步骤: (1)外植体抗褐化及消毒处理:将从野外采集的艾纳香带叶柄的嫩叶或带腋芽的幼嫩莖段外植体冲洗干净后,用3000mg/L维生素C+2000 mg/L庆大霉素的蒸懼水溶液浸泡60min,然后用2000mg/L高锰酸钾蒸馏水溶液浸泡30min,用蒸馏水冲洗3_5次,再用1000mg/L氯化汞水溶液常规消毒; (2)初诱导培养:将消毒后的外植体接种在基本培养基+0.5mg/L TDZ+1.0mg/L6-BA+0.5 mg/L IBA的初诱导培养基上进行培养,且基本培养基为:l/2MS+12g/L琼脂+30g/L 蔗糖,pH 值 5.8 ; (3)继代增殖培养:将初诱导培养产生的丛生芽剪切成带茎段完整叶片后接种于基本培养基+0.2mg/L TDZ +0.8mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA的继代增殖培养基上进行培养; (4)生根诱导培养:将继代增殖形成的丛生芽剪切成带茎段完整叶片后接种于基本培养基 +1000mg/L 花宝 I 号 + 1000mg/L 活性炭 +0.3 mg/L 6-BA+1.0 mg/L IBA 的生根培养基上进行 培养。
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