CN108496796A - 一种紫珠无菌播种快速繁殖方法 - Google Patents

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钱仁卷
张旭乐
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Abstract

一种紫珠无菌播种快速繁殖方法，包括外植体选取、外植体消毒、培养基配置、种子萌发、炼苗移栽工序，获得健壮的紫珠幼苗，其中紫珠种子萌发生长过程中水分、温度、光照和空气湿度等条件可控，降低了外界环境对植物繁殖率的影响，提高繁殖效率与萌发率，植物生长状态良好，克服播种受季节限制的问题，缩短繁育周期，有利于紫珠的工厂化生产与推广应用，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。

Description

一种紫珠无菌播种快速繁殖方法
技术领域
本发明属于植物繁殖技术领域，具体地涉及一种紫珠无菌播种快速繁殖方法。
背景技术
紫珠，马鞭草科紫珠属落叶灌木，果实为球形，通常颜色为紫色或紫红色，属秋冬季节的优良观果植物，是增添园林景观色彩的绝佳素材。同时，紫珠也可入药，有止血、散瘀、消炎、抗癌等特殊功效，制药需求巨大。紫珠的繁殖一般采用的是种子繁殖和扦插繁殖，但是传统的播种扦插繁殖需要较大的生产面积，受环境因素影响较大，不仅耗时较长，而且成活率与繁殖系数不稳定，无法稳定的大规模生产繁殖。无菌播种繁殖可打破扦插繁殖与播种繁殖的限制，是保存繁育紫珠种质资源的重要手段之一，在保护和利用野生紫珠种质资源方面具有重要潜力。因此，进行紫珠的无菌播种快速繁殖具有广阔的应用前景，可进行大规模的生产繁殖，同时减少繁育占地面积，推进工厂化生产繁育进程。
发明内容
本发明的目的在于提供一种紫珠无菌播种快速繁殖方法，提高播种育苗效率，满足紫珠大规模种植对商业种苗繁育的需要以及种质资源保护的需要，解决紫珠繁殖速度过慢问题。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明所采用的技术方案：一种紫珠无菌播种快速繁殖方法，该方法包括如下操作步骤：
1)外植体选取：选用成熟的紫珠种子将种子外果肉去除，在自来水中清洗干净后阴干，作为外植体；
2)外植体预处理：将紫珠种子用赤霉素溶液浸泡处理，无菌水冲洗后备用；
3)外植体消毒：将步骤2)中的外植体置于75％的乙醇溶液中浸泡30s，无菌水冲洗2-3次，然后用0.1％HgCl2浸泡10min或30％NaClO浸泡30min，再用无菌水冲洗6-8次，阴干后备用；
4)培养基配置：以MS为基本培养基，添加蔗糖、琼脂，调节pH后高温高压灭菌；
5)种子萌发：将已消毒好步骤3)中的备用的种子接入步骤4)的培养基中，转入培养室进行培养，培养条件为：温度24-26℃、光照1500-2000lx、光照时间10-12h/d，获得幼苗；
6)炼苗培养：将步骤5)中获得的幼苗转移到具有自然光的温室中炼苗10-15天，温室温度为18-28℃，湿度为80-100％，光照时间为12-14h/d，然后即可移栽。
作为优选，所述紫珠种子用200mg/L的赤霉素溶液浸泡24h预处理，处理完后用无菌水冲洗备用。
作为优选，所述步骤3)中将经过消毒处理后的种子置于灭菌滤纸上稍加晾干；
作为优选，所述培养基含有1/2MS，蔗糖30g/L，琼脂7.5g/L，且其pH为5.5-5.8，培养基配置后121℃高温高压灭菌20min。
作为优选，紫珠种子接种后在培养室培养6天左右开始萌发，培养8天左右后，植株具2片叶，继续培养30-40天，获得幼苗，幼苗根5条以上。
作为优选，幼苗移栽时，用清水洗去根部附着的培养基，栽植于育苗基质中，育苗基质为泥炭与珍珠岩均匀混合而成，混合比例为1:1。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
1.本发明可扩大繁育面积，采用以上方案，可以克服紫珠常规育苗受季节限制的问题，缩短出苗时间20d以上，提高播种育苗率，发芽率85％以上，有利于紫珠的工厂化生产与推广应用，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益；
2.紫珠种子在无菌播种前，用赤霉素预处理种子，可显著提高紫珠种子无菌播种的萌发率与发芽势。
具体实施方式
实施例一
一种紫珠无菌播种快速繁殖方法，包括如下操作步骤：
1)外植体选取：选用成熟的紫珠种子将种子外果肉去除，在自来水中清洗干净后阴干，作为外植体。
2)外植体处理：将紫珠种子用无菌水浸泡24h，无菌水冲洗后备用。
3)外植体消毒：将外植体置于75％的乙醇溶液中进行浸泡，浸泡时间为30s，无菌水冲洗2-3次，用0.1％HgCl2溶液浸泡5min，无菌水冲洗6-8次，置于灭菌滤纸上稍加阴干；
4)培养基的配置：1/2MS，蔗糖30g/L，琼脂7.5g/L，pH5.5-5.8，培养基配置后121℃高温高压灭菌20min，冷却凝固后备用；
5)种子萌发：将已消毒好的种子接入固体培养基中，转入培养室进行培养，培养条件为：温度24-26℃、光照1500-2000lx、光照时间10-12h/d，培养6天后种子开始萌发，培养8天后，植株具2片叶，继续培养30-40天，获得幼苗；
6)炼苗培养：将幼苗转移到具有自然光的温室中炼苗10-15天，温室温度为18-28℃，湿度为80-100％，光照时间为12-14h/d，然后即可移栽，移栽时，用清水洗去根部附着的培养基，栽植于育苗基质中，育苗基质为泥炭与珍珠岩均匀混合而成，混合比例为1:1。
实施例二
一种紫珠无菌播种快速繁殖方法，操作步骤基本与实施例一相同，不同之处在于：步骤3中将紫珠种子在75％乙醇溶液中浸泡30s，无菌水冲洗后，用0.1％HgCl2溶液浸泡10min。
实施例三
一种紫珠无菌播种快速繁殖方法，操作步骤基本与实施例一相同，不同之处在于：步骤3中将紫珠种子在75％乙醇溶液中浸泡30s，无菌水冲洗后，用0.1％HgCl2溶液浸泡15min。
实施例四
一种紫珠无菌播种快速繁殖方法，操作步骤基本与实施例一相同，不同之处在于：步骤3中将紫珠种子在75％乙醇溶液中浸泡30s，无菌水冲洗后，用30％NaClO溶液浸泡10min。
实施例五
一种紫珠无菌播种快速繁殖方法，操作步骤基本与实施例一相同，不同之处在于：步骤3中将紫珠种子在75％乙醇溶液中浸泡30s，无菌水冲洗后，用30％NaClO溶液浸泡20min。
实施例六
一种紫珠无菌播种快速繁殖方法，操作步骤基本与实施例一相同，不同之处在于：步骤3中将紫珠种子在75％乙醇溶液中浸泡30s，无菌水冲洗后，用30％NaClO溶液浸泡30min。
实施例七
一种紫珠无菌播种快速繁殖方法，操作步骤基本与实施例一相同，不同之处在于：步骤3中将紫珠种子在75％乙醇溶液中浸泡30s，无菌水冲洗后，用30％NaClO溶液浸泡40min。
实施例八
一种紫珠无菌播种快速繁殖方法，操作步骤基本与实施例二相同，不同之处在于：步骤2中将紫珠种子在100mg/L赤霉素溶液中浸泡24h。
实施例九
一种紫珠无菌播种快速繁殖方法，操作步骤基本与实施例二相同，不同之处在于：步骤2中将紫珠种子在200mg/L赤霉素溶液中浸泡24h。
实施例十
一种紫珠无菌播种快速繁殖方法，操作步骤基本与实施例二相同，不同之处在于：步骤2中将紫珠种子在300mg/L赤霉素溶液中浸泡24h。
通过十种不同实施方法对紫珠进行无菌播种进行快速繁殖，并统计对比结果，得到如下结论：
1)紫珠种子消毒方式以75％乙醇溶液浸泡30s，无菌水冲洗2次，0.1％HgCl2浸泡10min或30％NaClO浸泡30min为佳，污染率分别为14.6％与17.3％，萌发率约70％。实例1、实例2、实例5、实例6灭菌时间太短，污染率分别为80％、57.5％、82.5％、50％，实例4与实例8灭菌时间较长，种子萌发率较低，分别为12.5％与20％。
2)紫珠种子在无菌播种前，用赤霉素预处理种子，可显著提高紫珠种子无菌播种的萌发率与发芽势，实例八、实例九、实例十的萌发率分别为70.8％、85.39％、76.13％，均高于实例一中无菌水预处理紫珠种子的萌发率，实例八、实例九、实例十的发芽势分别为实例一紫珠种子发芽势的107％、296％、208％。
3)紫珠幼苗在组织培养室培养40d后，一般具有5条以上根，根长20-60mm，苗高2-4cm，转移到温室中炼苗10-15天后即可移栽，有利于大规模生产种苗。
实施例不应视为对发明的限制，但任何基于本发明的精神所作的改进，都应在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种紫珠无菌播种快速繁殖方法，其特征在于：该方法包括如下操作步骤：
1)外植体选取：选用成熟的紫珠种子将种子外果肉去除，在自来水中清洗干净后阴干，作为外植体；
2)外植体预处理：将紫珠种子用赤霉素溶液浸泡处理，无菌水冲洗后备用；
3)外植体消毒：将步骤2)中的外植体置于75％的乙醇溶液中浸泡30s，无菌水冲洗2-3次，然后用0.1％HgCl2浸泡10min或30％NaClO浸泡30min，再用无菌水冲洗6-8次，阴干后备用；
4)培养基配置：以MS为基本培养基，添加蔗糖、琼脂，调节pH后高温高压灭菌；
5)种子萌发：将已消毒好步骤3)中的备用的种子接入步骤4)的培养基中，转入培养室进行培养，培养条件为：温度24-26℃、光照1500-2000lx、光照时间10-12h/d，获得幼苗；
6)炼苗培养：将步骤5)中获得的幼苗转移到具有自然光的温室中炼苗10-15天，温室温度为18-28℃，湿度为80-100％，光照时间为12-14h/d，然后即可移栽。
2.根据权利要求1所述的紫珠无菌播种快速繁殖方法，其特征在于：所述紫珠种子用200mg/L的赤霉素溶液浸泡24h预处理，处理完后用无菌水冲洗备用。
3.根据权利要求1所述的紫珠无菌播种快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤3)中将经过消毒处理后的种子置于灭菌滤纸上稍加晾干。
4.根据权利要求1所述的紫珠无菌播种快速繁殖方法，其特征在于：所述培养基含有1/2MS，蔗糖30g/L，琼脂7.5g/L，且其pH为5.5-5.8，培养基配置后121℃高温高压灭菌20min。
5.根据权利要求1所述的紫珠无菌播种快速繁殖方法，其特征在于：紫珠种子接种后在培养室培养6天左右开始萌发，培养8天左右后，植株具2片叶，继续培养30-40天，获得幼苗，幼苗根5条以上。
6.根据权利要求1所述的紫珠无菌播种快速繁殖方法，其特征在于：幼苗移栽时，用清水洗去根部附着的培养基，栽植于育苗基质中，育苗基质为泥炭与珍珠岩均匀混合而成，混合比例为1:1。
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