CN106134999A - 京薯6号组培脱毒培育的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明是京薯6号组培脱毒培育的方法，其培育步骤为：首先选取无当年收获的无病虫害、色泽纯正、大小匀称的京薯6号块根，对其清洗消毒后放入培养箱中进行恒温催芽，然后，选取长度1～2cm的健壮的芽条进行消毒，在解剖镜下剥取带1～2片叶原基的生长点，将其接种到培养基中，对其进行培养，当芽点形成后，转移到新的培养基中进行培养，并进行初级扩繁培育，再对植株进行病毒检测，留下健康无病毒的植株，将无毒苗切成单节茎段扦插培养基中进行培养，最后对其进行驯化，可移栽在基质中。本发明实现了京薯6号的脱毒育苗，可以有效地实现无毒苗的培育，防止品种退化，提高产量与质量。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养及脱毒领域，尤其涉及京薯6号组培脱毒培育的方法。
背景技术
甘薯是是中国四大粮食作物之一，富含多种维生素，俗称“土人参”。紫甘薯的薯皮呈紫黑色、薯肉呈紫红色，紫色甘薯中含有丰富的花青素类色素、多糖、蛋白质等多种营养成分，紫色甘薯已经成为研究和开发的热点。京薯6号是紫色甘薯的一种新品种，但是京薯6号甘薯属于无性繁殖作物，容易受到病毒的侵染，由于中国栽培者有自留种薯的习惯，因此极易造成甘薯病毒的积累和蔓延，这种情况不利于京薯6号的广泛推广种植，近年来发展的茎尖分生组织培养技术为有效控制甘薯病毒的危害开辟了途径，可以利用茎尖分生组织培养生产无毒的京薯6号种苗。
发明内容
本发明旨在解决现有技术的不足，而提供京薯6号组培脱毒培育的方法。
本发明为实现上述目的，采用以下技术方案：京薯6号组培脱毒培育的方法，其特征在于，其步骤如下：
(1)选取当年收获的无病虫害、色泽纯正、大小匀称、无裂痕的京薯6号块根，在自来水下洗净泥土，用0.1％的高锰酸钾浸泡处理15min，再用0.5％的多菌灵浸泡1h后捞出晾干，置于装有高温灭菌后的珍珠岩的培养箱中进行恒温催芽，温度设为28℃，相对湿度为80％～85％，待萌出薯芽后，于35～40℃的高温下热处理30天，每天处理8h；
(2)将热处理后的京薯6号薯芽选取长度1～2cm的健壮的芽条，在自来水下冲洗30min，用滤纸吸干表面的水分，再在超净工作台内用75％的乙醇浸泡30s，再用10％次氯酸钠加2滴吐温-80溶液浸泡20min，使用无菌水冲洗2～3次，最后用消毒滤纸吸干表面水分；
(3)将消毒后的芽苗置于体视解剖镜下，用解剖针剥取带有1～2个叶原基的茎尖组织，接种到加入了6-BA1.0mg/L、NAA0.2mg/L、GA0.05mg/L、蔗糖30g/L、卡拉胶6g/L的MS培养基上进行诱导培养，培养温度28℃，湿度50％，光照强度2000～3000Lx，光照时间10h/d；
(4)培养25天后，茎尖形成芽点，且在基部形成了愈合组织，此时，将芽点转移到MS培养基中进行培育，培养温度为28℃，光照强度2000～3000Lx，光照时间10h/d，使茎尖苗长至3～6cm；
(5)将茎尖苗切成单节茎段在新的MS培养基上进行初级扩繁培育，培养温度为28℃，光照强度2000～3000Lx，光照时间10h/d；
(5)用血清法对幼苗进行病毒检测，去除仍带有病毒的植株，留下脱毒苗；
(6)当脱毒苗长至8cm时，将其切成单节茎段扦插在加入了6-BA1.0mg/L、白砂糖30g/L、卡拉胶6g/L的MS培养基上进行培育，培养温度为28℃，光照强度2000Lx，光照时间10h/d；
(7)脱毒苗进行培育一个月之后，将其置于室温和自然光下驯化5天，然后洗去附着在植株根部的培养基，将苗的根部置于0.2％高锰酸钾溶液中浸泡2min后，取出晾干，移栽在基质中，盖拱膜，每天进行通风排气，即可培育出京薯6号无毒苗。
特别的，所述步骤(1)中的京薯6号薯块在培养箱中进行催芽时，出芽前黑暗培养，出芽后光照13h/d，光照强度2000Lx
特别的，所述步骤(7)中的基质为河沙和椰糠以体积比2:1混合而成。
本发明的有益效果是：本发明中的京薯6号无毒苗培育过程科学合理，可以获得成活率较高的无毒京薯6号幼苗，提高了无毒苗的产量与质量，并且在培育过程中，对萌出的薯芽进行了热处理，可以使部分病毒钝化，从而提高无毒苗的培育率，并且根据幼苗的不同的生长阶段选用不同的培养基，益于京薯6号茎尖苗的健康发育生长，保证了无毒的京薯6号幼苗的成活率。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明：
实施例1
京薯6号组培脱毒培育的方法，其特征在于，其步骤如下：
(1)选取当年收获的无病虫害、色泽纯正、大小匀称、无裂痕的京薯6号块根，在自来水下洗净泥土，用0.1％的高锰酸钾浸泡处理15min，再用0.5％的多菌灵浸泡1h后捞出晾干，置于装有高温灭菌后的珍珠岩的培养箱中进行恒温催芽，温度设为28℃，相对湿度为80％，出芽前黑暗培养，出芽后光照13h/d，光照强度2000Lx，待萌出薯芽后，于35℃的高温下热处理30天，每天处理8h；
(2)将热处理后的京薯6号薯芽选取长度1cm的健壮的芽条，在自来水下冲洗30min，用滤纸吸干表面的水分，再在超净工作台内用75％的乙醇浸泡30s，再用10％次氯酸钠加2滴吐温-80溶液浸泡20min，使用无菌水冲洗2次，最后用消毒滤纸吸干表面水分；
(3)将消毒后的芽苗置于体视解剖镜下，用解剖针剥取带有1～2个叶原基的茎尖组织，接种到加入了6-BA1.0mg/L、NAA0.2mg/L、GA0.05mg/L、蔗糖30g/L、卡拉胶6g/L的MS培养基上进行诱导培养，培养温度28℃，湿度50％，光照强度2000Lx，光照时间10h/d；
(4)培养25天后，茎尖形成芽点，且在基部形成了愈合组织，此时，将芽点转移到MS培养基中进行培育，培养温度为28℃，光照强度2000Lx，光照时间10h/d，使茎尖苗长至3cm；
(5)将茎尖苗切成单节茎段在新的MS培养基上进行初级扩繁培育，培养温度为28℃，光照强度2000Lx，光照时间10h/d；
(5)用血清法对幼苗进行病毒检测，去除仍带有病毒的植株，留下脱毒苗；
(6)当脱毒苗长至8cm时，将其切成单节茎段扦插在加入了6-BA1.0mg/L、白砂糖30g/L、卡拉胶6g/L的MS培养基上进行培育，培养温度为28℃，光照强度2000Lx，光照时间10h/d；
(7)脱毒苗进行培育一个月之后，将其置于室温和自然光下驯化5天，然后洗去附着在植株根部的培养基，将苗的根部置于0.2％高锰酸钾溶液中浸泡2min后，取出晾干，移栽在基质中，基质为河沙和椰糠以体积比2:1混合而成，盖拱膜，每天进行通风排气，即可培育出京薯6号无毒苗。
实施例2
京薯6号组培脱毒培育的方法，其特征在于，其步骤如下：
(1)选取当年收获的无病虫害、色泽纯正、大小匀称、无裂痕的京薯6号块根，在自来水下洗净泥土，用0.1％的高锰酸钾浸泡处理15min，再用0.5％的多菌灵浸泡1h后捞出晾干，置于装有高温灭菌后的珍珠岩的培养箱中进行恒温催芽，温度设为28℃，相对湿度为85％，出芽前黑暗培养，出芽后光照13h/d，光照强度2000Lx，待萌出薯芽后，于40℃的高温下热处理30天，每天处理8h；
(2)将热处理后的京薯6号薯芽选取长度2cm的健壮的芽条，在自来水下冲洗30min，用滤纸吸干表面的水分，再在超净工作台内用75％的乙醇浸泡30s，再用10％次氯酸钠加2滴吐温-80溶液浸泡20min，使用无菌水冲洗3次，最后用消毒滤纸吸干表面水分；
(3)将消毒后的芽苗置于体视解剖镜下，用解剖针剥取带有1～2个叶原基的茎尖组织，接种到加入了6-BA1.0mg/L、NAA0.2mg/L、GA0.05mg/L、蔗糖30g/L、卡拉胶6g/L的MS培养基上进行诱导培养，培养温度28℃，湿度50％，光照强度3000Lx，光照时间10h/d；
(4)培养25天后，茎尖形成芽点，且在基部形成了愈合组织，此时，将芽点转移到MS培养基中进行培育，培养温度为28℃，光照强度3000Lx，光照时间10h/d，使茎尖苗长至6cm；
(5)将茎尖苗切成单节茎段在新的MS培养基上进行初级扩繁培育，培养温度为28℃，光照强度3000Lx，光照时间10h/d；
(5)用血清法对幼苗进行病毒检测，去除仍带有病毒的植株，留下脱毒苗；
(6)当脱毒苗长至8cm时，将其切成单节茎段扦插在加入了6-BA1.0mg/L、白砂糖30g/L、卡拉胶6g/L的MS培养基上进行培育，培养温度为28℃，光照强度2000Lx，光照时间10h/d；
(7)脱毒苗进行培育一个月之后，将其置于室温和自然光下驯化5天，然后洗去附着在植株根部的培养基，将苗的根部置于0.2％高锰酸钾溶液中浸泡2min后，取出晾干，移栽在基质中，基质为河沙和椰糠以体积比2:1混合而成，盖拱膜，每天进行通风排气，即可培育出京薯6号无毒苗。
上面对本发明进行了示例性描述，显然本发明具体实现并不受上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种改进，或未经改进直接应用于其它场合的，均在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.京薯6号组培脱毒培育的方法，其特征在于，其步骤如下：
(1)选取当年收获的无病虫害、色泽纯正、大小匀称、无裂痕的京薯6号块根，在自来水下洗净泥土，用0.1％的高锰酸钾浸泡处理15min，再用0.5％的多菌灵浸泡1h后捞出晾干，置于装有高温灭菌后的珍珠岩的培养箱中进行恒温催芽，温度设为28℃，相对湿度为80％～85％，待萌出薯芽后，于35～40℃的高温下热处理30天，每天处理8h；
(2)将热处理后的京薯6号薯芽选取长度1～2cm的健壮的芽条，在自来水下冲洗30min，用滤纸吸干表面的水分，再在超净工作台内用75％的乙醇浸泡30s，再用10％次氯酸钠加2滴吐温-80溶液浸泡20min，使用无菌水冲洗2～3次，最后用消毒滤纸吸干表面水分；
(3)将消毒后的芽苗置于体视解剖镜下，用解剖针剥取带有1～2个叶原基的茎尖组织，接种到加入了6-BA1.0mg/L、NAA0.2mg/L、GA0.05mg/L、蔗糖30g/L、卡拉胶6g/L的MS培养基上进行诱导培养，培养温度28℃，湿度50％，光照强度2000～3000Lx，光照时间10h/d；
(4)培养25天后，茎尖形成芽点，且在基部形成了愈合组织，此时，将芽点转移到MS培养基中进行培育，培养温度为28℃，光照强度2000～3000Lx，光照时间10h/d，使茎尖苗长至3～6cm；
(5)将茎尖苗切成单节茎段在新的MS培养基上进行初级扩繁培育，培养温度为28℃，光照强度2000～3000Lx，光照时间10h/d；
(5)用血清法对幼苗进行病毒检测，去除仍带有病毒的植株，留下脱毒苗；
(6)当脱毒苗长至8cm时，将其切成单节茎段扦插在加入了6-BA1.0mg/L、白砂糖30g/L、卡拉胶6g/L的MS培养基上进行培育，培养温度为28℃，光照强度2000Lx，光照时间10h/d；
(7)脱毒苗进行培育一个月之后，将其置于室温和自然光下驯化5天，然后洗去附着在植株根部的培养基，将苗的根部置于0.2％高锰酸钾溶液中浸泡2min后，取出晾干，移栽在基质中，盖拱膜，每天进行通风排气，即可培育出京薯6号无毒苗。
2.根据权利要求1所述的京薯6号组培脱毒培育的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的京薯6号薯块在培养箱中进行催芽时，出芽前黑暗培养，出芽后光照13h/d，光照强度2000Lx。
3.根据权利要求1所述的京薯6号组培脱毒培育的方法，其特征在于，所述步骤(7)中的基质为河沙和椰糠以体积比2:1混合而成。
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Cited By (2)
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|---|---|---|---|---|
| CN113973716A (zh) * | 2021-11-26 | 2022-01-28 | 广东海洋大学 | 一种甘薯的组培快繁方法 |
| CN115136769A (zh) * | 2022-07-26 | 2022-10-04 | 石家庄市农林科学研究院 | 一种甘薯潜隐病毒脱除方法 |
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| CN115136769A (zh) * | 2022-07-26 | 2022-10-04 | 石家庄市农林科学研究院 | 一种甘薯潜隐病毒脱除方法 |
| CN115136769B (zh) * | 2022-07-26 | 2024-03-12 | 石家庄市农林科学研究院 | 一种甘薯潜隐病毒脱除方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20161123 |
|
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |