CN106069784B - 一种大花栀子花苞的组织培养方法 - Google Patents

一种大花栀子花苞的组织培养方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种大花栀子花苞的组织培养方法，以大花栀子幼嫩花苞为外植体，进行愈伤组织诱导；将愈伤组织接种于不定芽诱导培养基，诱导不定芽再生；将不定芽转入增殖培养基，以获得丛生芽；将不定芽接种于生根培养基，以诱导生根，获得完整植株。传统的栀子繁殖方式，品种变异率高，繁殖周期长，不能满足市场需求。根据这种实际，我们选择耕作广谱、抗病性强的优良大花栀子品种为材料，利用植物的无性繁殖技术，获得优质的栀子种苗，以满足市场的需求。

Description

一种大花栀子花苞的组织培养方法
技术领域
本发明属于农业生物技术领域，具体涉及一种大花栀子花苞的组织培养方法。
背景技术
栀子为茜草科栀子属植物，其果实具有清热利尿，泻火除烦，凉血解毒之功效。还可从栀子的果实中提取色素——栀子黄，作为染料广泛应用于食品加工业。栀子花颜色洁白，气味馥郁，常用来造园、造景等，以美化环境；或制成盆栽、盆景，以供观赏。
近年来随着栀子大规模种植，病虫害日益增多，栀子的抗性日趋下降，使得栀子的产量和质量逐步降低，同时野生栀子资源受到极大破坏。传统的栀子繁殖方式，品种变异率高，繁殖周期长，不能满足市场需求。根据这种实际，我们选择耕作广谱、抗病性强的优良大花栀子品种为材料，利用植物的无性繁殖技术，获得优质的栀子种苗，以满足市场的需求。
发明内容
本发明的目的是提供一种大花栀子花苞的组织培养方法，以缩短栀子的繁殖周期，培育优质的栀子种苗，以满足市场需求。
本发明的目的是通过以下方式实现的：
一种大花栀子花苞的组织培养方法：
1）以大花栀子幼嫩花苞为外植体，进行愈伤组织诱导；
2）将愈伤组织接种于不定芽诱导培养基，诱导不定芽再生；
3）将不定芽转入增殖培养基，以获得丛生芽；
4）将不定芽接种于生根培养基，以诱导生根，获得完整植株。
步骤1）以大花栀子幼嫩花苞为外植体，进行愈伤组织诱导的方法是：取距基部2cm、无病虫害的幼嫩花苞，用毛刷蘸洗衣粉液轻轻刷洗花苞，然后于流水下冲洗干净，置于超净工作台上，用75%的酒精消毒30 s，用无菌水冲洗一次，再用0.1%的升汞（加1-2滴吐温-20）消毒8 min，用无菌水冲洗5-6次，置于无菌滤纸上吸干水分，然后切成5 mm × 5 mm左右，接种于愈伤诱导培养基。
所述的花苞愈伤诱导培养基为：MS培养基+(0.2~0.5) mg/L 6-BA+(0.001~0.003)mg/L TDZ+(25~30) g/L蔗糖+（6~7）g/L琼脂，pH 6.0~6.2。
所述的不定芽诱导培养基为：MS培养基+(0.5~2.0) mg/L IBA+(0.001~0.002)mg/L TDZ+(25~30) g/L蔗糖+（6~7）g/L琼脂，pH 6.0~6.2。
所述的增殖培养基为：MS培养基+(0.1~0.5) mg/L NAA+(1.0~2.0) mg/L 6-BA+(25~30) g/L蔗糖+（6~7）g/L琼脂，pH 6.0~6.2。
所述的生根培养基为：1/2MS培养基+(0.5~1.0) mg/L IBA+(20~25) g/L蔗糖+（6~7）g/L琼脂，pH 6.0~6.2。
所述的培养条件为：培养温度（25±2）℃，光照强度1500~2000lx，湿度30%~50%。
上述解决方案中，优选的，愈伤诱导培养基为：MS+0.5 mg/L 6-BA+0.002 mg/LTDZ+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂；
不定芽诱导培养基为：MS+1.0 mg/L IBA+0.002 mg/L TDZ+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂；
增殖培养基为：MS+0.2 mg/L NAA+1.5 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂；
生根培养基为：1/2MS+0.5 mg/L IBA+20 g/L蔗糖+7 g/L琼脂。
本发明的优点在于：1、本发明选择耕作广谱、抗病性强的优良大花栀子为研究材料，确保栀子栽培的区域和种苗质量；
2、选取幼嫩花苞进行培养，填补了以栀子种子、根、茎尖、茎段、叶片、未成熟种子、未成熟果实的子房壁等为研究材料的空白。
具体实施方式
以下结合具体实施例进一步详细描述本发明的技术方案
实施例一：
一种大花栀子花苞的组织培养方法，包括如下步骤：
（1）外植体的消毒：取距基部2cm、无病虫害的幼嫩花苞，用毛刷蘸洗衣粉液轻轻刷洗花苞，然后于流水下冲洗干净，置于超净工作台上，用75%的酒精消毒30 s，用无菌水冲洗一次，再用0.1%的升汞（加1-2滴吐温-20）消毒8 min，用无菌水冲洗6次，置于无菌滤纸上吸干水分；
（2）愈伤组织培养：使用解剖刀沿着花苞横向、纵向，将花苞切成5 mm × 5 mm的小块，接种于愈伤诱导培养基MS+0.2 mg/L 6-BA+0.003 mg/L TDZ+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂进行培养，温度（25±2）℃，暗培养15d，获得愈伤组织，愈伤诱导率100%；
（3）不定芽再生：将上述得到的愈伤组织接种到不定芽再生培养基MS+0.5 mg/LIBA+0.002 mg/L TDZ+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂中，于温度（25±2）℃，光照18 h/d,光照强度1500 lx的条件下培养30 d后愈伤组织分化出芽，分化率50%；
（4）不定芽增殖：将步骤（3）中长至2 cm的不定芽接种于增殖培养基MS+0.1 mg/LNAA+2.0 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂中，于温度（25±2）℃，光照18 h/d,光照强度1500 lx的条件下培养35 d后诱导出丛生芽，增殖率6.8倍；
（5）不定芽生根：将步骤（4）中长至2 cm的不定芽接种于生根培养基1/2MS+0.5mg/L IBA+20 g/L蔗糖+7 g/L琼脂中，于温度（25±2）℃，光照18 h/d,光照强度1500 lx的条件下培养10 d后诱导出不定根，生根率96%，培养出完整植株。
实施例二：
一种大花栀子花苞的组织培养方法，包括如下步骤：
（1）外植体的消毒：：取距基部2cm、无病虫害的幼嫩花苞，用毛刷蘸洗衣粉液轻轻刷洗花苞，，然后于流水下冲洗干净，置于超净工作台上，用75%的酒精消毒30 s，用无菌水冲洗一次，再用0.1%的升汞（加1-2滴吐温-20）消毒8 min，用无菌水冲洗5次，置于无菌滤纸上吸干水分；
（2）愈伤组织培养：使用解剖刀沿着花苞横向、纵向，将花苞切成5 mm × 5 mm左右的小块，接种于愈伤诱导培养基MS+0.5 mg/L 6-BA+0.002 mg/L TDZ+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂进行培养，温度（25±2）℃，暗培养15 d左右，获得愈伤组织，愈伤诱导率100%；
（3）不定芽再生：将上述得到的愈伤组织接种到不定芽再生培养基MS+1.0 mg/LIBA+0.002 mg/L TDZ+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂中，于温度（25±2）℃，光照18 h/d,光照强度1500 lx的条件下培养30 d后愈伤组织分化出芽，分化率53%；
（4）不定芽增殖：将步骤（3）中长至2 cm的不定芽接种于增殖培养基MS+0.2 mg/LNAA+1.5 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂中，于温度（25±2）℃，光照18 h/d,光照强度1500 lx的条件下培养35 d后诱导出丛生芽，增殖率7.0倍；
（5）不定芽生根：将步骤（4）中长至2 cm的不定芽接种于生根培养基1/2MS+1.0mg/L IBA+20 g/L蔗糖+7 g/L琼脂中，于温度（25±2）℃，光照18 h/d,光照强度1500 lx的条件下培养10 d后诱导出不定根，生根率98%，培养出完整植株。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (2)

1.一种大花栀子花苞的组织培养方法，其特征在于：所述方法包括如下：
1）以大花栀子幼嫩花苞为外植体，进行愈伤组织诱导；
2）将愈伤组织接种于不定芽诱导培养基，诱导不定芽再生；
3）将不定芽转入增殖培养基，以获得丛生芽；
4）将不定芽接种于生根培养基，以诱导生根，获得完整植株；
步骤1）具体为：取距基部2cm、无病虫害的幼嫩花苞，用毛刷蘸洗衣粉液轻轻刷洗花苞，然后于流水下冲洗干净，置于超净工作台上，用75%的酒精消毒30s，用无菌水冲洗一次，再用0.1%的升汞加1-2滴吐温-20消毒8 min，用无菌水冲洗5-6次，置于无菌滤纸上吸干水分，然后切成5 mm × 5 mm，接种于愈伤诱导培养基；
所述的花苞愈伤诱导培养基为：MS+0.2~0.5mg/L 6-BA+0.001~0.003 mg/L TDZ+25~30g/L蔗糖+6~7g/L琼脂，pH 6.0~6.2；
步骤2）所述的不定芽诱导培养基为：MS+0.5~2.0 mg/LIBA+0.001~0.002mg/L TDZ+25~30 g/L蔗糖+6~7g/L琼脂，pH 6.0~6.2；
步骤3）所述的增殖培养基为：MS+0.1~0.5 mg/L NAA+1.0~2.0 mg/L 6-BA+25~30 g/L蔗糖+6~7g/L琼脂，pH 6.0~6.2；
步骤4）所述的生根培养基为：1/2MS+0.5~1.0 mg/L IBA+20~25 g/L蔗糖+6~7g/L琼脂，pH 6.0~6.2。
2.根据权利要求1所述的一种大花栀子花苞的组织培养方法，其特征在于：培养条件为：培养温度（25±2）℃，光照强度1500~2000lx，湿度30%~50%。
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