CN106069784A - 一种大花栀子花苞的组织培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种大花栀子花苞的组织培养方法,以大花栀子幼嫩花苞为外植体,进行愈伤组织诱导;将愈伤组织接种于不定芽诱导培养基,诱导不定芽再生;将不定芽转入增殖培养基,以获得丛生芽;将不定芽接种于生根培养基,以诱导生根,获得完整植株。传统的栀子繁殖方式,品种变异率高,繁殖周期长,不能满足市场需求。根据这种实际,我们选择耕作广谱、抗病性强的优良大花栀子品种为材料,利用植物的无性繁殖技术,获得优质的栀子种苗,以满足市场的需求。
Description
技术领域
本发明属于农业生物技术领域,具体涉及一种大花栀子花苞的组织培养方法。
背景技术
栀子为茜草科栀子属植物,其果实具有清热利尿,泻火除烦,凉血解毒之功效。还可从栀子的果实中提取色素——栀子黄,作为染料广泛应用于食品加工业。栀子花颜色洁白,气味馥郁,常用来造园、造景等,以美化环境;或制成盆栽、盆景,以供观赏。
近年来随着栀子大规模种植,病虫害日益增多,栀子的抗性日趋下降,使得栀子的产量和质量逐步降低,同时野生栀子资源受到极大破坏。传统的栀子繁殖方式,品种变异率高,繁殖周期长,不能满足市场需求。根据这种实际,我们选择耕作广谱、抗病性强的优良大花栀子品种为材料,利用植物的无性繁殖技术,获得优质的栀子种苗,以满足市场的需求。
发明内容
本发明的目的是提供一种大花栀子花苞的组织培养方法,以缩短栀子的繁殖周期,培育优质的栀子种苗,以满足市场需求。
本发明的目的是通过以下方式实现的:
一种大花栀子花苞的组织培养方法:
1)以大花栀子幼嫩花苞为外植体,进行愈伤组织诱导;
2)将愈伤组织接种于不定芽诱导培养基,诱导不定芽再生;
3)将不定芽转入增殖培养基,以获得丛生芽;
4)将不定芽接种于生根培养基,以诱导生根,获得完整植株。
步骤1)以大花栀子幼嫩花苞为外植体,进行愈伤组织诱导的方法是:取距基部2cm、无病虫害的幼嫩花苞,用毛刷蘸洗衣粉液轻轻刷洗花苞,然后于流水下冲洗干净,置于超净工作台上,用75%的酒精消毒30 s,用无菌水冲洗一次,再用0.1%的升汞(加1-2滴吐温-20)消毒8 min,用无菌水冲洗5-6次,置于无菌滤纸上吸干水分,然后切成5 mm × 5 mm左右,接种于愈伤诱导培养基。
所述的花苞愈伤诱导培养基为:MS培养基+(0.2~0.5) mg/L 6-BA+(0.001~0.003)mg/L TDZ+(25~30) g/L蔗糖+(6~7)g/L琼脂,pH 6.0~6.2。
所述的不定芽诱导培养基为:MS培养基+(0.5~2.0) mg/L IBA+(0.001~0.002)mg/L TDZ+(25~30) g/L蔗糖+(6~7)g/L琼脂,pH 6.0~6.2。
所述的增殖培养基为:MS培养基+(0.1~0.5) mg/L NAA+(1.0~2.0) mg/L 6-BA+(25~30) g/L蔗糖+(6~7)g/L琼脂,pH 6.0~6.2。
所述的生根培养基为:1/2MS培养基+(0.5~1.0) mg/L IBA+(20~25) g/L蔗糖+(6~7)g/L琼脂,pH 6.0~6.2。
所述的培养条件为:培养温度(25±2)℃,光照强度1500~2000lx,湿度30%~50%。
上述解决方案中,优选的,愈伤诱导培养基为:MS+0.5 mg/L 6-BA+0.002 mg/LTDZ+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂;
不定芽诱导培养基为:MS+1.0 mg/L IBA+0.002 mg/L TDZ+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂;
增殖培养基为:MS+0.2 mg/L NAA+1.5 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂;
生根培养基为:1/2MS+0.5 mg/L IBA+20 g/L蔗糖+7 g/L琼脂。
本发明的优点在于:1、本发明选择耕作广谱、抗病性强的优良大花栀子为研究材料,确保栀子栽培的区域和种苗质量;
2、选取幼嫩花苞进行培养,填补了以栀子种子、根、茎尖、茎段、叶片、未成熟种子、未成熟果实的子房壁等为研究材料的空白。
具体实施方式
以下结合具体实施例进一步详细描述本发明的技术方案
实施例一:
一种大花栀子花苞的组织培养方法,包括如下步骤:
(1)外植体的消毒:取距基部2cm、无病虫害的幼嫩花苞,用毛刷蘸洗衣粉液轻轻刷洗花苞,然后于流水下冲洗干净,置于超净工作台上,用75%的酒精消毒30 s,用无菌水冲洗一次,再用0.1%的升汞(加1-2滴吐温-20)消毒8 min,用无菌水冲洗6次,置于无菌滤纸上吸干水分;
(2)愈伤组织培养:使用解剖刀沿着花苞横向、纵向,将花苞切成5 mm × 5 mm的小块,接种于愈伤诱导培养基MS+0.2 mg/L 6-BA+0.003 mg/L TDZ+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂进行培养,温度(25±2)℃,暗培养15d,获得愈伤组织,愈伤诱导率100%;
(3)不定芽再生:将上述得到的愈伤组织接种到不定芽再生培养基MS+0.5 mg/L IBA+0.002 mg/L TDZ+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂中,于温度(25±2)℃,光照18 h/d,光照强度1500lx的条件下培养30 d后愈伤组织分化出芽,分化率50%;
(4)不定芽增殖:将步骤(3)中长至2 cm的不定芽接种于增殖培养基MS+0.1 mg/L NAA+2.0 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂中,于温度(25±2)℃,光照18 h/d,光照强度1500lx的条件下培养35 d后诱导出丛生芽,增殖率6.8倍;
(5)不定芽生根:将步骤(4)中长至2 cm的不定芽接种于生根培养基1/2MS+0.5 mg/LIBA+20 g/L蔗糖+7 g/L琼脂中,于温度(25±2)℃,光照18 h/d,光照强度1500 lx的条件下培养10 d后诱导出不定根,生根率96%,培养出完整植株。
实施例二:
一种大花栀子花苞的组织培养方法,包括如下步骤:
(1)外植体的消毒::取距基部2cm、无病虫害的幼嫩花苞,用毛刷蘸洗衣粉液轻轻刷洗花苞,,然后于流水下冲洗干净,置于超净工作台上,用75%的酒精消毒30 s,用无菌水冲洗一次,再用0.1%的升汞(加1-2滴吐温-20)消毒8 min,用无菌水冲洗5次,置于无菌滤纸上吸干水分;
(2)愈伤组织培养:使用解剖刀沿着花苞横向、纵向,将花苞切成5 mm × 5 mm左右的小块,接种于愈伤诱导培养基MS+0.5 mg/L 6-BA+0.002 mg/L TDZ+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂进行培养,温度(25±2)℃,暗培养15 d左右,获得愈伤组织,愈伤诱导率100%;
(3)不定芽再生:将上述得到的愈伤组织接种到不定芽再生培养基MS+1.0 mg/L IBA+0.002 mg/L TDZ+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂中,于温度(25±2)℃,光照18 h/d,光照强度1500lx的条件下培养30 d后愈伤组织分化出芽,分化率53%;
(4)不定芽增殖:将步骤(3)中长至2 cm的不定芽接种于增殖培养基MS+0.2 mg/L NAA+1.5 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂中,于温度(25±2)℃,光照18 h/d,光照强度1500lx的条件下培养35 d后诱导出丛生芽,增殖率7.0倍;
(5)不定芽生根:将步骤(4)中长至2 cm的不定芽接种于生根培养基1/2MS+1.0 mg/LIBA+20 g/L蔗糖+7 g/L琼脂中,于温度(25±2)℃,光照18 h/d,光照强度1500 lx的条件下培养10 d后诱导出不定根,生根率98%,培养出完整植株。
以上所述仅为本发明的较佳实施例,凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰,皆应属本发明的涵盖范围。
Claims (7)
1.一种大花栀子花苞的组织培养方法,其特征在于:所述方法包括如下:
1)以大花栀子幼嫩花苞为外植体,进行愈伤组织诱导;
2)将愈伤组织接种于不定芽诱导培养基,诱导不定芽再生;
3)将不定芽转入增殖培养基,以获得丛生芽;
4)将不定芽接种于生根培养基,以诱导生根,获得完整植株。
2.根据权利要求1所述的一种大花栀子花苞的组织培养方法,其特征在于:
步骤1)具体为:取距基部2cm、无病虫害的幼嫩花苞,用毛刷蘸洗衣粉液轻轻刷洗花苞,然后于流水下冲洗干净,置于超净工作台上,用75%的酒精消毒30s,用无菌水冲洗一次,再用0.1%的升汞加1-2滴吐温-20消毒8 min,用无菌水冲洗5-6次,置于无菌滤纸上吸干水分,然后切成5 mm × 5 mm,接种于愈伤诱导培养基。
3.根据权利要求2所述的一种大花栀子花苞的组织培养方法,其特征在于:所述的花苞愈伤诱导培养基为:MS+0.2~0.5mg/L 6-BA+0.001~0.003 mg/L TDZ+25~30g/L蔗糖+6~7g/L琼脂,pH 6.0~6.2。
4.根据权利要求1所述的一种大花栀子花苞的组织培养方法,其特征在于:步骤2)所述的不定芽诱导培养基为:MS+0.5~2.0 mg/L IBA+0.001~0.002mg/L TDZ+25~30 g/L蔗糖+6~7g/L琼脂,pH 6.0~6.2。
5.根据权利要求1所述的一种大花栀子花苞的组织培养方法,其特征在于:步骤3)所述的增殖培养基为:MS+0.1~0.5 mg/L NAA+1.0~2.0 mg/L 6-BA+25~30 g/L蔗糖+6~7g/L琼脂,pH 6.0~6.2。
6.根据权利要求1所述的一种大花栀子花苞的组织培养方法,其特征在于:步骤4)所述的生根培养基为:1/2MS+0.5~1.0 mg/L IBA+20~25 g/L蔗糖+6~7g/L琼脂,pH 6.0~6.2。
7.根据权利要求1所述的一种大花栀子花苞的组织培养方法,其特征在于:培养条件为:培养温度(25±2)℃,光照强度1500~2000lx,湿度30%~50%。
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