CN104604689A - 快速获得菊苣外植体和提高其出愈率的方法 - Google Patents
快速获得菊苣外植体和提高其出愈率的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104604689A CN104604689A CN201510063985.7A CN201510063985A CN104604689A CN 104604689 A CN104604689 A CN 104604689A CN 201510063985 A CN201510063985 A CN 201510063985A CN 104604689 A CN104604689 A CN 104604689A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- explant
- medium
- explants
- chicory
- witloof
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 235000007542 Cichorium intybus Nutrition 0.000 title claims abstract description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 title claims abstract description 13
- 241000723343 Cichorium Species 0.000 title claims abstract description 8
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 244000298479 Cichorium intybus Species 0.000 claims description 18
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 18
- 230000035876 healing Effects 0.000 claims description 9
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 6
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 6
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims description 6
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 239000006870 ms-medium Substances 0.000 claims description 3
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000002689 soil Substances 0.000 claims description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 3
- 229910052902 vermiculite Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000019354 vermiculite Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000010455 vermiculite Substances 0.000 claims description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 3
- 238000012136 culture method Methods 0.000 abstract 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 abstract 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明公开了一种快速获得菊苣外植体和提高其出愈率的方法，依次包括种子的消毒灭菌、无菌苗的获得、子叶、胚轴外植体的获得、愈伤组织和芽的诱导、生根培养、移栽等步骤。本发明方法简便、易操作；与传统接种和培养方法比较，单位时间内菊苣外植体的获得量比普通接种方法提高50%以上，外植体的出愈率可以提高到100%。
Description
技术领域
本发明涉及一种菊苣外植体的培养方法。
背景技术
由于菊苣外植体比较细嫩，在超净工作台上暴露时间稍长就容易脱水萎蔫，加上传统方法使用镊子和手术刀切割后再用镊子夹取外植体进行接种，对其伤害程度较重，降低了外植体的成活率和出愈率。
发明内容
本发明的目的在于提供一种对外植体的伤害程度小，同时大大增加外植体的存活率，提高外植体出愈率的快速获得菊苣外植体和提高其出愈率的方法。
本发明的技术解决方案是：
一种快速获得菊苣外植体和提高其出愈率的方法，其特征是：依次包括下列步骤：
⑴种子的消毒灭菌
取菊苣籽粒饱满的种子，用清水中浸泡24h，冲洗干净后，在超净工作台上用75％的酒精消毒30秒，再用10％的NaClO灭菌10min，然后用无菌水冲洗3～4次，用无菌滤纸吸干水分后接种在MS培养基中；
（2）无菌苗的获得
在25℃暗箱中培养2天，菊苣种子露白后将其转移至光下继续培养，培养室每天光照12h，光照强度为2000lux，培养温度为26±1℃，培养获得7d-10d苗龄的无菌苗；
（3）子叶、胚轴外植体的获得
在超净工作台上用镊子将无菌苗从培养基上连根拔起，然后用剪刀分别剪取0.5cm长度的子叶和下胚轴，任其自然下落到培养基上后，剪取结束后，用镊子将外植体均匀摆放在培养基上培养；
（4）愈伤组织和芽的诱导
将子叶和下胚轴外植体接种在MS+NAA0.5mg/L+6-BA 2mg/L的培养基上，蔗糖和琼脂浓度分别为30g/L、8g/L；外植体培养10天左右，在切口边缘处形成大量的淡黄色或淡绿色愈伤组织，在绿色愈伤组织上形成绿色的小突起，即为潜在的芽点；随着培养时间的推移，分化出的芽点逐渐分化成肉眼可见的芽；
5）生根培养
待幼芽长到2~3cm大小时时，在超净工作台上切下幼芽，将愈伤组织去除干净，将切取的幼芽转入三角瓶中的生根培养基培养；生根培养基为1/2MS+NAA0.1mg/L；生根培养基培养时，对三角瓶用封口膜封口；
（ 6）移栽
当菊苣再生植株在生根培养基上根系发达后，将三角瓶去掉封口膜，在组织培养室练苗2~3d，然后取出再生植株，用流水洗净根部的培养基，移栽到盛有已灭菌蛭石的营养钵中，浇灌营养液，营养液为MS液体培养基；一周以后移栽到盛有田间土的营养钵，然后进行正常的田间粗放管理。
菊苣品种为从意大利引进的Rossa di Treviso。
本发明方法简便、易操作；与传统接种和培养方法比较，单位时间内菊苣外植体的获得量比普通接种方法提高50%以上，外植体的出愈率可以提高到100%。
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
具体实施方式
一种快速获得菊苣外植体和提高其出愈率的方法，依次包括下列步骤：
⑴种子的消毒灭菌
取菊苣籽粒饱满的种子，用清水中浸泡24h，冲洗干净后，在超净工作台上用75％的酒精消毒30秒，再用10％（质量百分比）的NaClO灭菌10min，然后用无菌水冲洗3～4次，用无菌滤纸吸干水分后接种在MS培养基中；
（2）无菌苗的获得
在25℃暗箱中培养2天，菊苣种子露白后将其转移至光下继续培养，培养室每天光照12h，光照强度为2000lux，培养温度为26±1℃，培养获得7d-10d苗龄的无菌苗；
（3）子叶、胚轴外植体的获得
在超净工作台上用镊子将无菌苗从培养基上连根拔起，然后用剪刀分别剪取0.5cm长度的子叶和下胚轴，任其自然下落到培养基上后，剪取结束后，用镊子将外植体均匀摆放在培养基上培养；
（4）愈伤组织和芽的诱导
将子叶和下胚轴外植体接种在MS+NAA0.5mg/L+6-BA 2mg/L的培养基上，蔗糖和琼脂浓度分别为30g/L、8g/L；外植体培养10天左右，在切口边缘处形成大量的淡黄色或淡绿色愈伤组织，在绿色愈伤组织上形成绿色的小突起，即为潜在的芽点；随着培养时间的推移，分化出的芽点逐渐分化成肉眼可见的芽；
5）生根培养
待幼芽长到2~3cm大小时时，在超净工作台上切下幼芽，将愈伤组织去除干净，将切取的幼芽转入三角瓶中的生根培养基培养；生根培养基为1/2MS+NAA0.1mg/L；生根培养基培养时，对三角瓶用封口膜封口；
（ 6）移栽
当菊苣再生植株在生根培养基上根系发达后，将三角瓶去掉封口膜，在组织培养室练苗2~3d，然后取出再生植株，用流水洗净根部的培养基，移栽到盛有已灭菌蛭石的营养钵中，浇灌营养液，营养液为MS液体培养基；一周以后移栽到盛有田间土的营养钵，然后进行正常的田间粗放管理。
菊苣品种为从意大利引进的Rossa di Treviso。
Claims (2)
1.一种快速获得菊苣外植体和提高其出愈率的方法，其特征是：依次包括下列步骤：
⑴种子的消毒灭菌
取菊苣籽粒饱满的种子，用清水中浸泡24h，冲洗干净后，在超净工作台上用75％的酒精消毒30秒，再用10％的NaClO灭菌10min，然后用无菌水冲洗3～4次，用无菌滤纸吸干水分后接种在MS培养基中；
（2）无菌苗的获得
在25℃暗箱中培养2天，菊苣种子露白后将其转移至光下继续培养，培养室每天光照12h，光照强度为2000lux，培养温度为26±1℃，培养获得7d-10d苗龄的无菌苗；
（3）子叶、胚轴外植体的获得
在超净工作台上用镊子将无菌苗从培养基上连根拔起，然后用剪刀分别剪取0.5cm长度的子叶和下胚轴，任其自然下落到培养基上后，剪取结束后，用镊子将外植体均匀摆放在培养基上培养；
（4）愈伤组织和芽的诱导
将子叶和下胚轴外植体接种在MS+NAA0.5mg/L+6-BA 2mg/L的培养基上，蔗糖和琼脂浓度分别为30g/L、8g/L；外植体培养10天左右，在切口边缘处形成大量的淡黄色或淡绿色愈伤组织，在绿色愈伤组织上形成绿色的小突起，即为潜在的芽点；随着培养时间的推移，分化出的芽点逐渐分化成肉眼可见的芽；
（5）生根培养
待幼芽长到2~3cm大小时时，在超净工作台上切下幼芽，将愈伤组织去除干净，将切取的幼芽转入三角瓶中的生根培养基培养；生根培养基为1/2MS+NAA0.1mg/L；生根培养基培养时，对三角瓶用封口膜封口；
（ 6）移栽
当菊苣再生植株在生根培养基上根系发达后，将三角瓶去掉封口膜，在组织培养室练苗2~3d，然后取出再生植株，用流水洗净根部的培养基，移栽到盛有已灭菌蛭石的营养钵中，浇灌营养液，营养液为MS液体培养基；一周以后移栽到盛有田间土的营养钵，然后进行正常的田间粗放管理。
2.根据权利要求1所述的快速获得菊苣外植体和提高其出愈率的方法，其特征是：菊苣品种为从意大利引进的Rossa di Treviso。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510063985.7A CN104604689B (zh) | 2015-02-09 | 2015-02-09 | 快速获得菊苣外植体和提高其出愈率的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510063985.7A CN104604689B (zh) | 2015-02-09 | 2015-02-09 | 快速获得菊苣外植体和提高其出愈率的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104604689A true CN104604689A (zh) | 2015-05-13 |
| CN104604689B CN104604689B (zh) | 2016-01-06 |
Family
ID=53139565
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510063985.7A Expired - Fee Related CN104604689B (zh) | 2015-02-09 | 2015-02-09 | 快速获得菊苣外植体和提高其出愈率的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104604689B (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105104183A (zh) * | 2015-08-26 | 2015-12-02 | 北京农业生物技术研究中心 | 一种菊苣原生质体诱导纯合四倍体植物的方法 |
| CN105112442A (zh) * | 2015-05-24 | 2015-12-02 | 贵州省草业研究所 | 免预培养高效菊苣遗传转化方法 |
| CN115885852A (zh) * | 2022-12-21 | 2023-04-04 | 吉林农业科技学院 | 一种结球红菊苣叶片组培方法 |
| CN117121813A (zh) * | 2023-06-30 | 2023-11-28 | 江苏省中国科学院植物研究所 | 一种菊苣的高效再生方法 |
-
2015
- 2015-02-09 CN CN201510063985.7A patent/CN104604689B/zh not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 梁美霞等: "菊苣子叶离体培养与植株再生的研究", 《北方园艺》, no. 3, 30 June 2009 (2009-06-30), pages 72 - 74 * |
| 程林梅等: "菊苣组织培养与植株再生的研究", 《草业学报》, vol. 11, no. 4, 31 December 2002 (2002-12-31), pages 105 - 107 * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105112442A (zh) * | 2015-05-24 | 2015-12-02 | 贵州省草业研究所 | 免预培养高效菊苣遗传转化方法 |
| CN105112442B (zh) * | 2015-05-24 | 2019-01-11 | 贵州省草业研究所 | 免预培养高效菊苣遗传转化方法 |
| CN105104183A (zh) * | 2015-08-26 | 2015-12-02 | 北京农业生物技术研究中心 | 一种菊苣原生质体诱导纯合四倍体植物的方法 |
| CN105104183B (zh) * | 2015-08-26 | 2017-07-04 | 北京农业生物技术研究中心 | 一种菊苣原生质体诱导纯合四倍体植物的方法 |
| CN115885852A (zh) * | 2022-12-21 | 2023-04-04 | 吉林农业科技学院 | 一种结球红菊苣叶片组培方法 |
| CN117121813A (zh) * | 2023-06-30 | 2023-11-28 | 江苏省中国科学院植物研究所 | 一种菊苣的高效再生方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104604689B (zh) | 2016-01-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106665357B (zh) | 一种建立石蒜再生体系的方法 | |
| CN107593438A (zh) | 一种银杏快速繁殖方法 | |
| CN104604689B (zh) | 快速获得菊苣外植体和提高其出愈率的方法 | |
| CN104396742B (zh) | 用五步法诱导淡黄花百合珠芽愈伤组织再分化出无菌苗的方法 | |
| CN106489738B (zh) | 一种桃叶卫矛叶片再生植株的生产方法 | |
| CN103141387A (zh) | 一种万象组织培养的方法 | |
| CN109258471A (zh) | 一种青蒿的组织培养技术 | |
| CN104186312A (zh) | 一种矮生沿阶草的组培快繁方法 | |
| CN103141388A (zh) | 一种海葱组织培养的方法 | |
| CN101836587A (zh) | 通过花药培养获得洋桔梗再生植株的方法 | |
| CN105284622B (zh) | 一种快速获得鸢尾杂交优良无性系的方法 | |
| CN108077071A (zh) | 穗花牡荆组织培养用培养基及快速繁殖方法 | |
| CN104012406B (zh) | 甜樱桃品种晚红珠的离体再生方法 | |
| CN105850741A (zh) | 一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法 | |
| CN104488718B (zh) | 一种黄花马铃苣苔的快速繁殖方法 | |
| CN104026010B (zh) | 一种桑树子叶不定芽的诱导方法 | |
| CN103798139B (zh) | 一种以花瓣为外植体建立百合胚性愈伤再生体系的方法 | |
| CN105409773A (zh) | 一种乌羽玉无菌播种及再生体系建立的方法 | |
| CN104488709A (zh) | 一种花叶紫娇花鳞茎组织培养的方法 | |
| CN104082147B (zh) | 细柱五加的离体快速繁殖方法 | |
| CN103704140A (zh) | 一种以幼花为外植体组培繁殖多倍体毛泡桐的方法 | |
| CN108094200A (zh) | 一种热处理结合茎尖剥离获得安祖花脱毒苗的培育方法 | |
| CN107593444A (zh) | 一种青木香的组织培养快繁方法 | |
| CN103141389B (zh) | 一种美人蕉茎尖组织培养的方法 | |
| CN103749298B (zh) | 一种多花黑麦草组培快繁方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: Method for rapidly obtaining chicory explant and improving its healing rate Effective date of registration: 20211216 Granted publication date: 20160106 Pledgee: Yantai financing guarantee Group Co.,Ltd. Pledgor: LUDONG University Registration number: Y2021980015152 |
|
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |
Date of cancellation: 20220317 Granted publication date: 20160106 Pledgee: Yantai financing guarantee Group Co.,Ltd. Pledgor: LUDONG University Registration number: Y2021980015152 |
|
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20220613 Address after: 315181 No. 573, 575, 577, 579 (1-8) -2, Jinjia 1st Road, Yinzhou District, Ningbo City, Zhejiang Province Patentee after: Ningbo Heyang Biotechnology Co.,Ltd. Address before: 264025 No. 186 Hongqi Middle Road, Zhifu District, Shandong, Yantai Patentee before: LUDONG University |
|
| CI03 | Correction of invention patent | ||
| CI03 | Correction of invention patent |
Correction item: Patentee|Address Correct: Ludong University|264025 No. 186 Hongqi Middle Road, Zhifu District, Shandong, Yantai False: Ningbo Heyang Biotechnology Co.,Ltd.|315181 No. 573, 575, 577, 579 (1-8) -2, Jinjia 1st Road, Yinzhou District, Ningbo City, Zhejiang Province Number: 25-02 Volume: 38 |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20220704 Address after: 315181 No. 573, 575, 577, 579 (1-8) -2, Jinjia 1st Road, Yinzhou District, Ningbo City, Zhejiang Province Patentee after: Ningbo Heyang Biotechnology Co.,Ltd. Address before: 264025 No. 186 Hongqi Middle Road, Zhifu District, Shandong, Yantai Patentee before: LUDONG University |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20160106 |