CN109258471A - 一种青蒿的组织培养技术 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种青蒿的组织培养技术，涉及青蒿通过离体快繁技术获得优质种苗的育苗方法。本发明以青蒿带芽茎段为外植体，经过外植体消毒、丛生芽诱导、生根培养、炼苗移栽等过程从而建立了青蒿组织培养快速繁殖体系，加速青蒿良种的推广和资源开发利用具有重要的现实意义。

Description

一种青蒿的组织培养技术

技术领域

本发明涉及植物生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种青蒿的组织培养技术。

背景技术

青蒿别名为黄花蒿、菊叶青蒿、臭蒿。一年生草本，秋季开花，生于枝梢，全枝有特异气味。夏秋季采全草，春初夏采幼苗，鲜用或晒干。气味苦，性寒。具有清热解暑，凉血退虚热。长期以来供不应求，加上人为的掠夺式砍伐导致青蒿野生资源枯竭，因此有必要对其资源进行保护。近年来，青蒿资源开发有了一定的规模，在我国南北省建立了GAP种植基地，对青蒿野生资源保护工作起到了一定的促进作用。目前青蒿主要通过种子进行种苗繁殖，但由于种子繁殖后代性状发生分离，不利于优质种质资源保护，制约了优质青蒿的推广种植。因此，有必要建立青蒿的组织培养技术，为其良种快速繁殖提供技术支撑和保障，也为满足我国对青蒿种苗的需求，加速其资源扩充具有重要的现实意义。对比文件1，申请号：CN200710034499，发明名称：青蒿多倍体诱导及其栽培方法，其主要步骤是将高青蒿素含量的青蒿幼嫩叶作为外植体，经常规杀菌处理后，用无菌滤纸吸干表面水，然后用培养基对外植体愈伤组织进行诱导，将诱导出的愈伤组织进行用秋水仙碱进行多倍体的诱变，诱变后进行分化培养，进行多倍体的鉴定，对多倍体植时进行生根培养。本案与对比文件的不同。

发明内容

本发明的目的在于提供出一种青蒿的组织培养技术，本发明以青蒿带芽茎段为外植体，经过外植体消毒、丛生芽诱导、生根培养、炼苗移栽等过程从而建立了青蒿组织培养快速繁殖体系，从而实现了本发明的目的。

本发明的一种青蒿的组织培养技术，包括以下的步骤：

步骤1，丛生芽诱导：选取生长健壮无病虫的幼树当年生的带芽茎段作为外植体,用洗洁精水溶液浸泡15min，然后用自来水冲洗35min，擦干表面水分后备用,在超净工作台中以70%～80%乙醇浸泡15s，0.1%升汞溶液消毒25min，再用无菌水清洗10次，擦干后切成长度为2.0cm的茎段接种到诱导培养基上,先在25~28℃条件下全暗培养25天，然后置于每天光照15小时，光照强度为1900lx，培养温度为23℃条件下培养，直至诱导形成丛生芽；诱导培养基为：MS+8mg/L6-BA+3mg/L NAA+0.7mmol/L La(NO₃)₂+4.2%蔗糖+0.6%琼脂+0.3%活性炭，pH值为5.2;

步骤2，增殖培养：将步骤1所得的丛生芽转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在23℃条件下全暗培养直至叶腋处萌生一个侧芽，然后置于每天光照19小时，光照强度为1900lx，培养温度为23℃的条件下培养直至各丛生芽伸长到5cm；增殖培养基为：MS+3mg/L6-BA+0.6mg/L NAA+4.2%蔗糖+0.6%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.2;

步骤3，生根培养：将步骤1或步骤2所获得的高度约为5cm的丛生芽芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在23℃条件下全暗培养11天，然后置于每天光照16小时，光照强度为3000lx，培养温度为23℃的条件下培养至生根；生根培养基为：1/2MS+6mg/LNAA+4.2%蔗糖+0.6%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.2;

步骤4，炼苗移栽：青蒿瓶内生根31天后，置于自然光照下炼苗11天后，洗净根部培养基，移栽由黄心土：河沙＝3：2混合成的基质中。

与现有技术相比本发明的优点是：本发明通过离体快繁技术获得优质种苗的育苗方法。以青蒿带芽茎段为外植体，经过外植体消毒、丛生芽诱导、生根培养、炼苗移栽等过程从而建立了青蒿组织培养快速繁殖体系，加速青蒿良种的推广和资源开发利用具有重要的现实意义。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。

实施例1：

（1）丛生芽诱导：选取生长健壮无病虫的幼树当年生的带芽茎段作为外植体,用洗洁精水溶液浸泡12min，然后用自来水冲洗15min，擦干表面水分后备用。在超净工作台中以75%乙醇浸泡4s，0.1%升汞溶液消毒18min，再用无菌水清洗6次，擦干后切成长度为1.5cm的茎段接种到诱导培养基上,先在26℃条件下全暗培养18天，然后置于每天光照15小时，光照强度为1200x，培养温度为26℃条件下培养43天即可诱导形成丛生芽，诱导率为69.9%。所述诱导培养基为MS+5mg/L6-BA+1.0mg/L NAA+0.5mmol/L La(NO₃)₂+3.0%蔗糖+0.50%琼脂+0.1%活性炭，pH值为5.2。

（2）增殖培养：将步骤（1）所得的丛生芽转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在26℃条件下全暗培养直至叶腋处萌生一个侧芽，然后置于每天光照16小时，光照强度为1200lx，培养温度为26℃的条件下培养35天各丛生芽即可伸长到5cm，增殖率为5.0。所述增殖培养基为MS+3mg/L6-BA+0.6mg/L NAA+3.5%蔗糖+0.50%琼脂+0.1%活性炭，pH值为5.2。

（3）生根培养：将步骤（1）或步骤（2）所获得的高度约为6cm的丛生芽芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在26℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照15小时，光照强度为2200lx，培养温度为26℃的条件下培养43天即可生根，生根率为74.%。

（4）炼苗移栽：青蒿瓶内生根25天后，置于自然光照下炼苗6天后，洗净根部培养基，移栽由黄心土：河沙＝3：2混合成的基质中。移栽成活率为88%。

实施例2：

（1）丛生芽诱导：选取生长健壮无病虫的幼树当年生的带芽茎段作为外植体,用洗洁精水溶液浸泡12min，然后用自来水冲洗19min，擦干表面水分后备用。在超净工作台中以75%乙醇浸泡15s，0.1%升汞溶液消毒18min，再用无菌水清洗8次，擦干后切成长度为1.5cm的茎段接种到诱导培养基上,先在27℃条件下全暗培养19天，然后置于每天光照15小时，光照强度为1600x，培养温度为27℃条件下培养39天即可诱导形成丛生芽，诱导率为75%。所述诱导培养基为MS+6mg/L6-BA+1.1mg/L NAA+0.5mmol/L La(NO₃)₂+3.0%蔗糖+0.4%琼脂+0.1%活性炭，pH值为5.2。

（2）增殖培养：将步骤（1）所得的丛生芽转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在28℃条件下全暗培养直至叶腋处萌生一个侧芽，然后置于每天光照13小时，光照强度为1500lx，培养温度为27℃的条件下培养28天各丛生芽即可伸长到3cm，增殖率为4.5。所述增殖培养基为MS+2mg/L6-BA+0.8mg/L NAA+2.5%蔗糖+0.1%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.2。

（3）生根培养：将步骤（1）或步骤（2）所获得的高度约为4cm的丛生芽芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在27℃条件下全暗培养8天，然后置于每天光照12小时，光照强度为1900lx，培养温度为27℃的条件下培养36天即可生根，生根率为81%。

（4）炼苗移栽：青蒿瓶内生根23天后，置于自然光照下炼苗8天后，洗净根部培养基，移栽由黄心土：河沙＝3：2混合成的基质中。移栽成活率为92%。

Claims (1)

1.一种青蒿的组织培养技术，其特征在于包括以下步骤：

步骤1，丛生芽诱导：选取生长健壮无病虫的幼树当年生的带芽茎段作为外植体,用洗洁精水溶液浸泡15min，然后用自来水冲洗35min，擦干表面水分后备用,在超净工作台中以70%～80%乙醇浸泡15s，0.1%升汞溶液消毒25min，再用无菌水清洗10次，擦干后切成长度为2.0cm的茎段接种到诱导培养基上,先在25~28℃条件下全暗培养25天，然后置于每天光照15小时，光照强度为1900lx，培养温度为23℃条件下培养，直至诱导形成丛生芽；诱导培养基为：MS+8mg/L6-BA+3mg/L NAA+0.7mmol/L La(NO₃)₂+4.2%蔗糖+0.6%琼脂+0.3%活性炭，pH值为5.2;

步骤2，增殖培养：将步骤1所得的丛生芽转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在23℃条件下全暗培养直至叶腋处萌生一个侧芽，然后置于每天光照19小时，光照强度为1900lx，培养温度为23℃的条件下培养直至各丛生芽伸长到5cm；增殖培养基为：MS+3mg/L6-BA+0.6mg/L NAA+4.2%蔗糖+0.6%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.2;

步骤3，生根培养：将步骤1或步骤2所获得的高度约为5cm的丛生芽芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在23℃条件下全暗培养11天，然后置于每天光照16小时，光照强度为3000lx，培养温度为23℃的条件下培养至生根；生根培养基为：1/2MS+6mg/LNAA+4.2%蔗糖+0.6%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.2;

步骤4，炼苗移栽：青蒿瓶内生根31天后，置于自然光照下炼苗11天后，洗净根部培养基，移栽由黄心土：河沙=3：2混合成的基质中。