CN105815214A - 一种虎眼万年青的叶片种苗快速繁殖方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种虎眼万年青的叶片种苗快速繁殖方法，首先，在晴天选择生长健壮，无病、虫害植株的叶片，剪去不要部份，进行灭菌消毒，再将灭菌的叶片切为一定大小的块状，接种到诱导培养基上进行诱导培养，然后，将诱导培养获得的芽丛，进行分割，接种到增殖培养基上培养，获得大量小苗，最后，将增殖培养中获得的小苗，分割为单株，接种到生根培养基上进行生根培养，再选择生长健壮良好的生根苗，将培养基清洗干净，移栽到基质中，培养一段时间后，即可进行大田移栽种植。该虎眼万年青叶的组培快速繁殖方法外植体取材容易，灭菌彻底，繁殖周期短、鳞茎大，种植成活率高，非常适合应用到虎眼万年青叶繁殖中，具有一定的推广性。

Description

一种虎眼万年青的叶片种苗快速繁殖方法
技术领域
本发明涉及植物快速繁殖技术领域，具体为一种虎眼万年青的叶片种苗快速繁殖方法。
背景技术
虎眼万年青(OrnithogalumCaudatnmJacq)，别名海葱，为百合科多年生草本植物，它每年生长一枚叶片，鳞茎包皮上就会长出几个小子球，形似虎眼，故而得名虎眼万年青，又因其球茎似葫芦样，又俗称葫芦兰。虎眼万年青具有清热解毒、消坚散结的功能，对肝炎、肝硬化、肝癌等具有很好的治疗效果。在国内外的文献中，很早就有记载虎眼万年青的抗肿瘤作用。常用分球和播种进行繁殖，繁殖速度慢，生长周期长，而通过植物组培快繁技术，利用叶片作为繁殖材料，可在短时期内获得大量的优质种苗。
发明内容
本发明的目的在于针对上述现有技术的不足，提供一种虎眼万年青的叶片种苗快速繁殖方法。
本发明的技术方案是这样实现的：一种虎眼万年青的叶片种苗快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)外植体的灭菌
晴天选择生长健壮，无病、虫害植株的叶片，剪去不要部份，自来水下冲洗干净，在无菌工作台上，用75％的酒精浸泡20秒，然后用0.1％升汞溶液浸泡8分钟，再用无菌水冲洗5-6次，最后用无菌纸吸去外植体表面水份。
(2)外植体诱导培养
将灭菌的叶片切为0.5×0.5cm大小的块状，接种到诱导培养基上，在温度：25-27℃，光照强度：2500-2600Lux，光照时间：每天10小时的条件下，培养60-70天，诱导出芽丛。培养25-30天，切口处开始产生愈伤组织。40-50天分化出小芽，60-70天形成大量芽丛。外植体诱导分化率达90％。
(3)增殖培养
将诱导培养获得的芽丛，进行分割(每丛含2-3小芽)，接种到增殖培养基上，在温度：25-27℃，光照强度：2500-2600Lux，光照时间：每天10小时的条件下，培养30天，可获得大量小苗，实现芽丛的增殖。
(4)生根培养
将增殖培养中获得的高度达1cm左右的小苗，分割为单株，接种到生根培养基上，在温度：25-27℃，光照强度：2500-2600Lux，光照时间：每天10小时的条件下，培养30-40天，得带鳞茎，高度达4-5cm的生根苗，生根率达100％。
(5)生根苗的移栽、驯化
选择生长健壮良好的生根苗，将培养基清洗干净，用75％的早基托布津2000倍液浸泡3-5分钟，移栽到基质中，培养50-60天，即可进行大田移栽种植。
优选的，所述步骤(2)中，灭菌的叶片切为0.5×0.5cm大小的块状，接种到诱导培养基上，诱导培养基的组分及其含量为：MS+6-BA2.5-3.0mg.L-1+NAA0.2-0.25mg.L-1+糖30g.L-1+活性炭0.5-1mg.L-1+琼脂4g.L-1，该培养基的PH为5.6-5.8。
优选的，所述步骤(3)中，将诱培养获得的芽丛进行分割(每丛含有2-3小芽)接种到增殖培养基上，增殖培养基的组份及其含量为：MS+6-BA1.5-2.0mg.L-1+NAA0.1-0.2mg.L-1+糖30g.L-1+活性炭0.5-1.0g.L-1+琼脂4g.L-1，该培养基的PH为5.6-5.8。
优选的，所述步骤(4)中，将增殖培养中获得的高度达1cm左右的小苗，分割为单株，接种到生根培养基上。生根培养基的组份及其含量为：MS+NAA0.4-0.5mg.L-1+IAA0.1-0.2mg.L-1+糖30g.L-1+活性炭0.5-1g.L-1+琼脂4g.L-1，该培养基PH值为5.6-5.8。
优选的，所述步骤(5)中，选择生长健壮，良好根系发达的生根苗，在清水中将培养基清洗干净(不要伤根系)，用75％早基托布津2000倍液浸泡3-5分钟，然后移栽到基质中，并保持60-65％的空气湿度，定植50-60天，即可进行大田移栽，其中基质的配比为：腐叶土:生红土:珍珠岩＝6:3:1。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：该虎眼万年青叶的组培快速繁殖方法外植体取材容易，并且选择的原材料比较适合快速繁殖培养，使用酒精和升汞溶液进行灭菌，灭菌方式简单，灭菌彻底，繁殖周期短，繁殖的幼苗鳞茎大，种植成活率高，非常适合应用到虎眼万年青叶繁殖中，具有一定的推广性。
附图说明
下面结合附图中的实施例对本发明作进一步的详细说明，但并不构成对本发明的任何限制。
图1是本发明具体步骤流程图。
具体实施方式
请参阅图1，本发明提供一种技术方案：一种虎眼万年青的叶片种苗快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)外植体的灭菌
晴天选择生长健壮，无病、虫害植株的叶片，剪去不要部份，自来水下冲洗干净，在无菌工作台上，用75％的酒精浸泡20秒，然后用0.1％升汞溶液浸泡8分钟，再用无菌水冲洗5-6次，最后用无菌纸吸去外植体表面水份。
(2)外植体诱导培养
将灭菌的叶片切为0.5×0.5cm大小的块状，接种到诱导培养基上，在温度：25-27℃，光照强度：2500-2600Lux，光照时间：每天10小时的条件下，培养60-70天，诱导出芽丛。培养25-30天，切口处开始产生愈伤组织。40-50天分化出小芽，60-70天形成大量芽丛。外植体诱导分化率达90％。
(3)增殖培养
将诱导培养获得的芽丛，进行分割(每丛含2-3小芽)，接种到增殖培养基上，在温度：25-27℃，光照强度：2500-2600Lux，光照时间：每天10小时的条件下，培养30天，可获得大量小苗，实现芽丛的增殖。
(4)生根培养
将增殖培养中获得的高度达1cm左右的小苗，分割为单株，接种到生根培养基上，在温度：25-27℃，光照强度：2500-2600Lux，光照时间：每天10小时的条件下，培养30-40天，得带鳞茎，高度达4-5cm的生根苗，生根率达100％。
(5)生根苗的移栽、驯化
选择生长健壮良好的生根苗，将培养基清洗干净，用75％的早基托布津2000倍液浸泡3-5分钟，移栽到基质中，培养50-60天，即可进行大田移栽种植。
所述步骤(2)中，灭菌的叶片切为0.5×0.5cm大小的块状，接种到诱导培养基上，诱导培养基的组分及其含量为：MS+6-BA2.5-3.0mg.L-1+NAA0.2-0.25mg.L-1+糖30g.L-1+活性炭0.5-1mg.L-1+琼脂4g.L-1，该培养基的PH为5.6-5.8。
所述步骤(3)中，将诱培养获得的芽丛进行分割(每丛含有2-3小芽)接种到增殖培养基上，增殖培养基的组份及其含量为：MS+6-BA1.5-2.0mg.L-1+NAA0.1-0.2mg.L-1+糖30g.L-1+活性炭0.5-1.0g.L-1+琼脂4g.L-1，该培养基的PH为5.6-5.8。
所述步骤(4)中，将增殖培养中获得的高度达1cm左右的小苗，分割为单株，接种到生根培养基上，生根培养基的组份及其含量为：MS+NAA0.4-0.5mg.L-1+IAA0.1-0.2mg.L-1+糖30g.L-1+活性炭0.5-1g.L-1+琼脂4g.L-1，该培养基PH值为5.6-5.8。
所述步骤(5)中，选择生长健壮，良好根系发达的生根苗，在清水中将培养基清洗干净(不要伤根系)，用75％早基托布津2000倍液浸泡3-5分钟，然后移栽到基质中，并保持60-65％的空气湿度，定植50-60天，即可进行大田移栽，其中基质的配比为：腐叶土:生红土:珍珠岩＝6:3:1。
以上所举实施例为本发明的较佳实施方式，仅用来方便说明本发明，并非对本发明作任何形式上的限制，任何所属技术领域中具有通常知识者，若在不脱离本发明所提技术特征的范围内，利用本发明所揭示技术内容所作局部更动或修饰的等效实施例，并且未脱离本发明的技术特征内容，均仍属于本发明技术特征的范围内。

Claims (5)

1.一种虎眼万年青的叶片种苗快速繁殖方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)外植体的灭菌
晴天选择生长健壮，无病、虫害植株的叶片，剪去不要部份，自来水下冲洗干净，在无菌工作台上，用75％的酒精浸泡20秒，然后用0.1％升汞溶液浸泡8分钟，再用无菌水冲洗5-6次，最后用无菌纸吸去外植体表面水份；
(2)外植体锈导培养
将灭菌的叶片切为0.5×0.5cm大小的块状，接种到诱导培养基上，在温度：25-27℃，光照强度：2500-2600Lux，光照时间：每天10小时的条件下，培养60-70天，诱导出芽丛。培养25-30天，切口处开始产生愈伤组织。40-50天分化出小芽，60-70天形成大量芽丛。外植体诱导分化率达90％。
(3)增殖培养
将诱导培养获得的芽丛，进行分割(每丛含2-3小芽)，接种到增殖培养基上，在温度：25-27℃，光照强度：2500-2600Lux，光照时间：每天10小时的条件下，培养30天，可获得大量小苗，实现芽丛的增殖。
(4)生根培养
将增殖培养中获得的高度达1cm左右的小苗，分割为单株，接种到生根培养基上，在温度：25-27℃，光照强度：2500-2600Lux，光照时间：每天10小时的条件下，培养30-40天，得带鳞茎，高度达4-5cm的生根苗，生根率达100％。
(5)生根苗的移栽、驯化
选择生长健壮良好的生根苗，将培养基清洗干净，用75％的早基托布津2000倍液浸泡3-5分钟，移栽到基质中，培养50-60天，即可进行大田移栽种植。
2.根据权利要求1所述的一种虎眼万年青的叶片种苗快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤(2)中，灭菌的叶片切为0.5×0.5cm大小的块状，接种到诱导培养基上，诱导培养基的组分及其含量为：MS+6-BA2.5-3.0mg.L-1+NAA0.2-0.25mg.L-1+糖30g.L-1+活性炭0.5-1mg.L-1+琼脂4g.L-1，该培养基的PH为5.6-5.8。
3.根据权利要求1所述的一种虎眼万年青的叶片种苗快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤(3)中，将诱培养获得的芽丛进行分割(每丛含有2-3小芽)接种到增殖培养基上，增殖培养基的组份及其含量为：MS+6-BA1.5-2.0mg.L-1+NAA0.1-0.2mg.L-1+糖30g.L-1+活性炭0.5-1.0g.L-1+琼脂4g.L-1，该培养基的PH为5.6-5.8。
4.根据权利要求1所述的一种虎眼万年青的叶片种苗快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤(4)中，将增殖培养中获得的高度达1cm左右的小苗，分割为单株，接种到生根培养基上。生根培养基的组份及其含量为：MS+NAA0.4-0.5mg.L-1+IAA0.1-0.2mg.L-1+糖30g.L-1+活性炭0.5-1g.L-1+琼脂4g.L-1，该培养基PH值为5.6-5.8。
5.根据权利要求1所述的一种虎眼万年青的叶片种苗快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤(5)中，选择生长健壮，良好根系发达的生根苗，在清水中将培养基清洗干净(不要伤根系)，用75％早基托布津2000倍液浸泡3-5分钟，然后移栽到基质中，并保持60-65％的空气湿度，定植50-60天，即可进行大田移栽，其中基质的配比为：腐叶土:生红土:珍珠岩＝6:3:1。
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