CN109380083A - 一种朱砂根的组织培养技术 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种朱砂根的组织培养技术，涉及朱砂根通过离体快繁技术获得优质种苗的育苗方法。本发明以朱砂根带芽茎段为外植体，经过外植体消毒、丛生芽诱导、生根培养、炼苗移栽等过程从而建立了朱砂根组织培养快速繁殖体系，加速朱砂根良种的推广和资源开发利用具有重要的现实意义。

Description

一种朱砂根的组织培养技术

技术领域

本发明涉及植物生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种朱砂根的组织培养技术。

背景技术

朱砂根为紫金牛科植物，秋冬两季采挖，挖出根后除去地下部份，洗净，晒干即可。气微，味微苦辛。具有清热解毒，消肿止痛，活血散瘀，祛风除湿。用于咽喉肿痛，跌打损伤，风湿骨痛。长期以来供不应求，加上人为的掠夺式砍伐导致朱砂根野生资源枯竭，因此有必要对其资源进行保护。

近年来，朱砂根资源开发有了一定的规模，在江西、湖北、广东、福建等建立了GAP种植基地，对朱砂根野生资源保护工作起到了一定的促进作用。目前朱砂根主要通过种子进行种苗繁殖，但由于种子繁殖后代性状发生分离，不利于优质种质资源保护，制约了优质朱砂根的推广种植。因此，有必要建立朱砂根的组织培养技术，为其良种快速繁殖提供技术支撑和保障，也为满足我国对朱砂根种苗的需求，加速其资源扩充具有重要的现实意义。申请号 ：CN201810112129，发明名称：一种野生药材朱砂莲组培快繁方法，属于生物技术领域。包含以下步骤：一、以野生朱砂莲健壮无病害幼嫩茎段为外植体，接种到丛生芽诱导培养基中进行丛生芽诱导培养；二、待丛生芽长到1.5-2cm时，将丛生芽切成单株接种到生根壮苗培养基中进行生根壮苗培养；三、待生根苗长到4-5cm时即可进行驯化后移栽。对比文件与本案申请不同。

发明内容

本发明的目的在于提供出一种朱砂根的组织培养技术，本发明以朱砂根带芽茎段为外植体，经过外植体消毒、丛生芽诱导、生根培养、炼苗移栽等过程从而建立了朱砂根组织培养快速繁殖体系，从而实现了本发明的目的。

本发明的一种朱砂根的组织培养技术，包括以下的步骤：

步骤1，丛生芽诱导：选取生长健壮无病虫的幼树当年生的带芽茎段作为外植体,用洗洁精水溶液浸泡4min，然后用自来水冲洗9min，擦干表面水分后备用,在超净工作台中以70%～80%乙醇浸泡4s，0.1%升汞溶液消毒7min，再用无菌水清洗2次，擦干后切成长度为0.4cm的茎段接种到诱导培养基上,先在30℃条件下全暗培养14天，然后置于每天光照9小时，光照强度为900lx，培养温度为30℃条件下培养，直至诱导形成丛生芽；诱导培养基为：MS+1mg/L6-BA+0.5mg/L NAA+0.3mmol/L La(NO₃)₂+3.4%蔗糖+0.4%琼脂+0.35%活性炭，pH值为5.3;

步骤2，增殖培养：将步骤1所得的丛生芽转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在30℃条件下全暗培养直至叶腋处萌生一个侧芽，然后置于每天光照11小时，光照强度为900lx，培养温度为30℃的条件下培养直至各丛生芽伸长到3cm；增殖培养基为：MS+3mg/L6-BA+0.4mg/L NAA+2.5%蔗糖+0.4%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.3;

步骤3，生根培养：将步骤1或步骤2所获得的高度约为3cm的丛生芽芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在30℃条件下全暗培养2天，然后置于每天光照9小时，光照强度为1900lx，培养温度为30℃的条件下培养至生根；生根培养基为：1/2MS+4mg/LNAA+5.5%蔗糖+0.6%琼脂+0.4%活性炭，pH值为5.3;

步骤4，炼苗移栽：朱砂根瓶内生根19天后，置于自然光照下炼苗8天后，洗净根部培养基，移栽由黄心土：河沙=2：1混合成的基质中。

与现有技术相比本发明的优点是：本发明通过离体快繁技术获得优质种苗的育苗方法。以朱砂根带芽茎段为外植体，经过外植体消毒、丛生芽诱导、生根培养、炼苗移栽等过程从而建立了朱砂根组织培养快速繁殖体系，加速朱砂根良种的推广和资源开发利用具有重要的现实意义。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。

实施例1：

（1）丛生芽诱导：选取生长健壮无病虫的幼树当年生的带芽茎段作为外植体,用洗洁精水溶液浸泡4min，然后用自来水冲洗9min，擦干表面水分后备用。在超净工作台中以75%乙醇浸泡4s，0.1%升汞溶液消毒7min，再用无菌水清洗2次，擦干后切成长度为1.3cm的茎段接种到诱导培养基上,先在26℃条件下全暗培养14天，然后置于每天光照9小时，光照强度为900x，培养温度为26℃条件下培养38天即可诱导形成丛生芽，诱导率为66.5%。所述诱导培养基为MS+1mg/L6-BA+0.25mg/L NAA+0.05mmol/L La(NO₃)₂+1.5%蔗糖+0.25%琼脂+0.08%活性炭，pH值为5.7。

（2）增殖培养：将步骤（1）所得的丛生芽转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在26℃条件下全暗培养直至叶腋处萌生一个侧芽，然后置于每天光照12小时，光照强度为900lx，培养温度为26℃的条件下培养30天各丛生芽即可伸长到3cm，增殖率为3.5。所述增殖培养基为MS+2mg/L6-BA+0.3mg/L NAA+2.2%蔗糖+0.25%琼脂+0.06%活性炭，pH值为5.3。

（3）生根培养：将步骤（1）或步骤（2）所获得的高度约为4cm的丛生芽芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在26℃条件下全暗培养2天，然后置于每天光照9小时，光照强度为1900lx，培养温度为26℃的条件下培养38天即可生根，生根率为72.5%。

（4）炼苗移栽：朱砂根瓶内生根19天后，置于自然光照下炼苗4天后，洗净根部培养基，移栽由黄心土：河沙＝3：2混合成的基质中。移栽成活率为89%。

实施例2：

（1）丛生芽诱导：选取生长健壮无病虫的幼树当年生的带芽茎段作为外植体,用洗洁精水溶液浸泡7min，然后用自来水冲洗14min，擦干表面水分后备用。在超净工作台中以75%乙醇浸泡9s，0.1%升汞溶液消毒9min，再用无菌水清洗3次，擦干后切成长度为1.5cm的茎段接种到诱导培养基上,先在26℃条件下全暗培养17天，然后置于每天光照11小时，光照强度为1400x，培养温度为26℃条件下培养35天即可诱导形成丛生芽，诱导率为75%。所述诱导培养基为MS+5mg/L6-BA+0.8mg/L NAA+0.2mmol/L La(NO₃)₂+1.5%蔗糖+0.25%琼脂+0.04%活性炭，pH值为5.7。

（2）增殖培养：将步骤（1）所得的丛生芽转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在26℃条件下全暗培养直至叶腋处萌生一个侧芽，然后置于每天光照13小时，光照强度为1500lx，培养温度为26℃的条件下培养39天各丛生芽即可伸长到3cm，增殖率为4.5。所述增殖培养基为MS+1.0 mg/L6-BA+0.3mg/L NAA+1.5%蔗糖+0.25%琼脂+0.25%活性炭，pH值为5.7。

（3）生根培养：将步骤（1）或步骤（2）所获得的高度约4cm的丛生芽芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在26℃条件下全暗培养4天，然后置于每天光照12小时，光照强度为1900lx，培养温度为26℃的条件下培养32天即可生根，生根率为82%。

（4）炼苗移栽：朱砂根瓶内生根18天后，置于自然光照下炼苗4天后，洗净根部培养基，移栽由黄心土：河沙＝3：2混合成的基质中。移栽成活率为91%。

Claims (1)

1.一种朱砂根的组织培养技术，其特征在于包括以下步骤：

步骤1，丛生芽诱导：选取生长健壮无病虫的幼树当年生的带芽茎段作为外植体,用洗洁精水溶液浸泡4min，然后用自来水冲洗9min，擦干表面水分后备用,在超净工作台中以70%～80%乙醇浸泡4s，0.1%升汞溶液消毒7min，再用无菌水清洗2次，擦干后切成长度为0.4cm的茎段接种到诱导培养基上,先在30℃条件下全暗培养14天，然后置于每天光照9小时，光照强度为900lx，培养温度为30℃条件下培养，直至诱导形成丛生芽；诱导培养基为：MS+1mg/L6-BA+0.5mg/L NAA+0.3mmol/L La(NO₃)₂+3.4%蔗糖+0.4%琼脂+0.35%活性炭，pH值为5.3;

步骤2，增殖培养：将步骤1所得的丛生芽转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在30℃条件下全暗培养直至叶腋处萌生一个侧芽，然后置于每天光照11小时，光照强度为900lx，培养温度为30℃的条件下培养直至各丛生芽伸长到3cm；增殖培养基为：MS+3mg/L6-BA+0.4mg/L NAA+2.5%蔗糖+0.4%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.3;

步骤3，生根培养：将步骤1或步骤2所获得的高度约为3cm的丛生芽芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在30℃条件下全暗培养2天，然后置于每天光照9小时，光照强度为1900lx，培养温度为30℃的条件下培养至生根；生根培养基为：1/2MS+4mg/LNAA+5.5%蔗糖+0.6%琼脂+0.4%活性炭，pH值为5.3;

步骤4，炼苗移栽：朱砂根瓶内生根19天后，置于自然光照下炼苗8天后，洗净根部培养基，移栽由黄心土：河沙=2：1混合成的基质中。