CN106332779A - 一种绞股蓝组培快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种绞股蓝组培快速繁殖方法，通过无性快繁技术快速获得大量绞股蓝优良品种木苗的方法。本发明以绞股蓝单芽茎段为外植体，经过外植体消毒、芽初代诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等步骤建立了绞股蓝组织培养快繁技术体系，为今后绞股蓝组织培养繁殖苗木，加速良种繁育满足市场需求提供技术支持。
Description
技术领域
本发明涉及绞股蓝种植领域，尤其是一种绞股蓝组培快速繁殖方法。
背景技术
绞股蓝为葫芦科植物，绞股蓝Gynostemma pentaphyllum Makino的干燥全草。主产安徽、浙江、江西、福建、广东、贵州等地，秋季采收，洗净，晒干。药性：多年生攀援草本，茎细长，节上具疏生细毛，叶鸟足状，常有5~7小叶组成，小叶片长椭圆状披针形至卵形，有小叶柄，中间叶片长3~9cm，宽1.5~3 cm，边缘锯齿，背面或沿两面叶脉有短刚毛或近无毛。圆锥花序腋生，花小，黄绿色，花萼裂片三角形，长约0.5 cm，花冠裂片披针形，长约2毫米，浆果球形，成熟时黑色。种子长椭圆形，有皱纹。主要含绞股蓝皂1~52，另含有黄酮、糖类。主治：益气健脾，清热解毒，止咳祛痰。用于体虚气弱，肺虚咳嗽，小便涩痛，腹痛腹泻。主要是通过扦插、嫁接等方式进行种苗育种，成活率低、繁殖系数小，远不能满足园林造景需要，严重影响了绞股蓝开发利用。因此很有必要建立完整的绞股蓝离体快繁体系，加速绞股蓝种苗繁育以满足市场需求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种绞股蓝组培快速繁殖方法，本发明以绞股蓝单芽茎段为外植体，经过外植体消毒、芽初代诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等步骤建立了绞股蓝组织培养快速繁技术体系，从而实现了本发明的目的。
本发明的技术解决方案是这样的，一种绞股蓝组培快速繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤1，外植体处理及消毒：选取健壮绞股蓝单芽茎段作为外植体，先用去污粉水浸泡15min，再用毛刷刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用流水下冲洗6h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒35s后用无菌水洗8次，再用0.1%升汞溶液消毒30min，用无菌水冲洗8次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用；
步骤2，芽初代诱导培养：将步骤（1）处理后的绞股蓝单芽茎段切成3.5cm小段并接种到诱导培养基上,先在29℃条件下全暗培养6天，然后每天光照9小时，光照强度为3500lx，直至诱导形成丛生芽；
步骤3，增殖培养：将步骤（2）培养获得的丛生芽长至约3.5cm时分切至增殖培养基上进行继代培养，接种后先在29℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照18小时，光照强度为3000lx，置于培养温度为29℃的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，得到丛生芽；
步骤4，生根培养：将步骤（2）或（3）过程获得的高度约为3.5cm的丛生芽芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在29℃条件下全暗培养9天，然后置于每天光照18小时，光照强度为3300lx，培养温度为29℃的条件下培养至生根；
步骤5，炼苗移栽：将步骤（4）获得的高约8cm、生长健壮、根系粗壮、叶色浓绿的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土:蛭石:沙土＝2:2:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田，小苗移栽后选择透光率为90%的遮阴处理。
步骤（2）所述的诱导培养基为：WPM+5mg/L6-BA+3mg/L NAA+35g/L蔗糖+8.0g/L琼脂，pH为5.9。
步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+3mg/LIBA+6mg/L 6-BA+35g/L蔗糖+8.0g/L琼脂，pH为5.9。
步骤（4）所述的生根培养基为：1/2MS+3mg/L NAA+35g/L蔗糖+8.0g/L琼脂，pH为5.9。
与现有技术相比本发明的优点是：本发明通过无性快繁技术快速获得大量绞股蓝优良品种木苗的方法。以绞股蓝单芽茎段为外植体，经过外植体消毒、芽初代诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等步骤建立了绞股蓝组织培养快繁技术体系，为今后绞股蓝组织培养繁殖苗木，加速良种繁育满足市场需求提供技术支持。
具体实施方式
下面实施例是对本发明的进一步说明。
实施例1：
（1）外植体处理及消毒：选取健壮绞股蓝单芽茎段作为外植体，先用去污粉水浸泡5min，再用软毛刷轻轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用流水下冲洗3h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒9s后用无菌水洗9次，再用0.1%升汞溶液消毒15min，用无菌水冲洗6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。
（2）芽初代诱导培养：将步骤（1）处理后的绞股蓝单芽茎段切成3cm小段并接种到诱导培养基上,先在27℃条件下全暗培养2天，然后每天光照13小时，光照强度为2000lx，直至诱导形成丛生芽，出芽率为89%。所述诱导培养基为WPM+4mg/L6-BA+0.6mg/L NAA+34g/L蔗糖+8.0g/L琼脂，pH为5.9。
（3）增殖培养：将步骤（2）培养获得的丛生芽长至约3.5cm时分切至增殖培养基上进行继代培养，接种后先在27℃条件下全暗培养2天，然后每天光照10小时，光照强度为2000lx，培养温度为27℃的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，以得到更多的丛生芽，芽增殖系数为5.09。所述的增殖培养基为MS+3mg/LIBA+3mg/L 6-BA+35g/L蔗糖+8.0g/L琼脂，pH为5.9。
（4）生根培养：将步骤（2）或（3）过程获得的高度约为3.5cm的丛生芽芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在27℃条件下全暗培养2天，然后置于每天光照14小时，光照强度为2500lx，培养温度为27℃的条件下培养至生根，生根率为95%。所述的生根培养基为1/2MS+0.6mg/L NAA+20g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.9。
（5）炼苗移栽：将步骤（4）获得的高约8cm、生长健壮、根系粗壮、叶色浓绿的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗4天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土:蛭石:沙土＝2:2:1混合成的基质,光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田，小苗移栽后选择透光率为65%的遮阴处理，移栽成活率为94%以上。
实施例2：
（1）外植体处理及消毒：选取健壮绞股蓝单芽茎段作为外植体，先用去污粉水浸泡8min，再用软毛刷轻轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用流水下冲洗2h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒11s后用无菌水洗8次，再用0.1%升汞溶液消毒20min，用无菌水冲洗8次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。
（2）芽初代诱导培养：将步骤（1）处理后的绞股蓝单芽茎段切成4.5cm小段并接种到诱导培养基上,先在27℃条件下全暗培养2天，然后每天光照15小时，光照强度为2000lx，直至诱导形成丛生芽，出芽率为85%。所述诱导培养基为WPM+3mg/L6-BA+2mg/L NAA+35g/L蔗糖+8.0g/L琼脂，pH为5.9。
（3）增殖培养：将步骤（2）培养获得的丛生芽长至约3.5cm时分切至增殖培养基上进行继代培养，接种后先在27℃条件下全暗培养1天，然后每天光照15小时，光照强度为2000lx，培养温度为27℃的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，以得到更多的丛生芽，芽增殖系数为5。所述的增殖培养基为MS+3mg/LIBA+3mg/L 6-BA+33g/L蔗糖+8.0g/L琼脂，pH为5.9。
（4）生根培养：将步骤（2）或（3）过程获得的高度约为3.5cm的丛生芽芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在27℃条件下全暗培养2天，然后每天光照16小时，光照强度为1500lx，培养温度为27℃的条件下培养至生根，生根率为92%。所述的生根培养基为1/2MS+0.8mg/L NAA+18g/L蔗糖+3.8g/L琼脂，pH为5.9。
（5）炼苗移栽：将步骤（4）获得的高约8cm、生长健壮、根系粗壮、叶色浓绿的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗4天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土:蛭石:沙土＝2:2:1混合成的基质,光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田，小苗移栽后选择透光率为70%的遮阴处理，移栽成活率为92%以上。
Claims (4)
1.一种绞股蓝组培快速繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤1，外植体处理及消毒：选取健壮绞股蓝单芽茎段作为外植体，先用去污粉水浸泡15min，再用毛刷刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用流水下冲洗6h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒35s后用无菌水洗8次，再用0.1%升汞溶液消毒30min，用无菌水冲洗8次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用；
步骤2，芽初代诱导培养：将步骤（1）处理后的绞股蓝单芽茎段切成3.5cm小段并接种到诱导培养基上,先在29℃条件下全暗培养6天，然后每天光照9小时，光照强度为3500lx，直至诱导形成丛生芽；
步骤3，增殖培养：将步骤（2）培养获得的丛生芽长至约3.5cm时分切至增殖培养基上进行继代培养，接种后先在29℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照18小时，光照强度为3000lx，置于培养温度为29℃的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，得到丛生芽；
步骤4，生根培养：将步骤（2）或（3）过程获得的高度约为3.5cm的丛生芽芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在29℃条件下全暗培养9天，然后置于每天光照18小时，光照强度为3300lx，培养温度为29℃的条件下培养至生根；
步骤5，炼苗移栽：将步骤（4）获得的高约8cm、生长健壮、根系粗壮、叶色浓绿的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土:蛭石:沙土＝2:2:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度，待幼苗成活后再移栽大田，小苗移栽后选择透光率为90%的遮阴处理。
2.根据权利要求1所述的一种绞股蓝组培快速繁殖方法，其特征在于步骤（2）所述的诱导培养基为：WPM+5mg/L6-BA+3mg/L NAA+35g/L蔗糖+8.0g/L琼脂，pH为5.9。
3.根据权利要求1所述的一种绞股蓝组培快速繁殖方法，其特征在于步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+3mg/LIBA+6mg/L 6-BA+35g/L蔗糖+8.0g/L琼脂，pH为5.9。
4.根据权利要求1所述的一种绞股蓝组培快速繁殖方法，其特征在于步骤（4）所述的生根培养基为：1/2MS+3mg/L NAA+35g/L蔗糖+8.0g/L琼脂，pH为5.9。
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