CN105638464B - 一种丝带草的组培快繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种丝带草的组培快繁方法，包括以下步骤：首先取丝带草的当年生幼嫩的茎段，清洗干净；采用酒精和升汞灭菌处理后，得外植体；将所得外植体接种到启动培养基上进行培养，将培养所得到的腋芽切下接种到初代培养基上进行培养；再将培养得到丝带草苗为母本切割后接种到继代增殖培养基上进行培养，直至长成完整植株。所述启动培养基、初代培养基及继代增殖培养基的组成为：1/2DKW基本培养基，补充0.5—1.0mg/L TDZ、0.06—0.15mg/L NAA、10—50g/L蔗糖、2—10g/L琼脂；最后将得到的生长健壮的组培生根苗，洗掉培养基后，直接移栽进温室大棚苗床中繁殖。采用本发明所述组培快繁方法繁殖丝带草，培养流程简便，操作简易，具有繁殖系数高，繁殖周期短，成活率高的特点。
Description
技术领域
本发明涉及植物无性繁殖技术领域，具体涉及一种丝带草的组培快繁方法。
背景技术
“丝带草”别名：玉带草拉丁名：Phalaris arundinacea L.var.picta L.是虉草的变种，为禾本科虉草属多年生草本植物，杆大多单生，也有丛生的，叶片扁平，绿色而有白色条纹间于其中，柔软而似丝带，因而得名，圆锥花序紧密狭窄，分枝直向上举，密生小穗，无毛或有微毛，颖沿脊上粗糙，上部有极狭的翼。幼嫩时为牲畜的优良牧草，收割或放牧后再生力很强，秆可编织用具或造纸。可用于装扮河堤、湿地等景观带，极具观赏价值与经济价值。
目前，丝带草以播种繁殖和分株繁殖为主，但是繁殖率均较低，远不能满足国内对种苗的需求。同时，目前丝带草的常规繁殖方法繁育周期长，不利于丝带草的规模化生产和开发应用。因此，探索一条能快速繁殖丝带草的有效途径是亟待解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本申请提供一种丝带草的组培快繁方法，培育周期短、繁殖系数在10—15，组培流程简便，省时省力，为丝带草工厂化育苗提供了技术支持。
为解决以上技术问题，本发明提供的技术方案是一种丝带草的组培快繁方法，包括以下步骤：
A、取丝带草的当年生幼嫩的茎段，清洗干净；采用酒精和升汞灭菌处理后，得外植体；
B、将步骤A所得外植体先接种到启动培养基上进行启动培养，然后将培养所得到的腋芽切下接种到初代培养基上进行初代培养；再将培养得到丝带草苗为母本切割后接种到继代增殖培养基上进行继代培养，直至长成完整植株；所述启动培养基、初代培养基及继代增殖培养基的组成为：1/2DKW基本培养基，补充0.5—1.0mg/L TDZ、0.06—0.15mg/LNAA、10—50g/L蔗糖、2—10g/L琼脂。
进一步地，所述外植体选取及灭菌的具体操作为：取丝带草的当年生幼嫩的茎段，切割成2—3cm带芽茎段，先用洗涤剂溶液浸泡10—30min，再用毛刷刷洗腋芽部位，刷洗干净后在流水下冲洗过夜；在无菌操作台上，用75％的酒精处理3—5s，用无菌水冲洗3—4次，再用0.1％的升汞处理3—5min，无菌水冲洗4—6次，晾干即可。
进一步地，所述启动培养基、初代培养基及继代增殖培养基的组成为：1/2DKW基本培养基，补充0.6—0.9mg/L TDZ、0.08—0.12mg/L NAA、20—40g/L蔗糖、4—6g/L琼脂。
进一步地，所述启动培养基、初代培养基及继代增殖培养基的组成为：1/2DKW基本培养基，补充0.8mg/L TDZ、0.1mg/L NAA、30g/L蔗糖、5g/L琼脂。
进一步地，所述启动培养基的pH值为6.3—6.7。
进一步地，所述启动培养温度为24—28℃，光照强度为2500—3000Lx，光照时间为14—18h/d，直至腋芽伸长到2-4cm。
进一步地，所述初代培养温度为24—28℃，光照强度为2000—3000Lx，光照时间为14—18h/d，直至植株生长生根数为5—12根，根长3-5cm，在叶腋处重新生长出腋芽。
进一步地，所述继代培养温度为24—28℃，光照强度为2000—3000Lx，光照时间为14—18h/d，直至带芽茎段生长成完整植株。
进一步地，将所述步骤B得到的生长健壮的组培生根苗，洗掉培养基后，直接移栽进温室大棚苗床中，遮光，降温保湿，控制大棚内温度为20～30℃。
进一步地，所述苗床的基质的配方原料体积比配比：腐殖质：珍珠岩为2:1。。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明所述的组培快繁方法繁殖丝带草时，一株健壮无菌组培苗可以切割成10～15段带根茎段，繁殖系数高，带根茎段2～3周后就可以长成完整植株，繁殖周期较短，是丝带草组培快繁的一种有效途径。提高了丝带草繁殖的系数、效率，能快速获得遗传性状一致的丝带草生根苗，为进一步开展品种改良奠定基础。
利用本发明所述的组培快繁方法所使用的启动培养基、初代培养基和继代培养为同一种培养基，即本发明中仅需一种培养基，在同一培养基上可以同时进行增殖和生根培养，培养流程简便，操作简易，省时省力，能够较容易的获得丝带草无菌苗。
本发明所述的组培快繁方法繁殖丝带草，生根后的丝带草无菌苗，生长健壮，不需要特殊炼苗，就可以直接移栽，缩短了获得丝带草的时间。将得到的丝带草无菌苗直接移栽到温室大棚中，成活率高，可达100％。
本发明所述的组培快繁方法，芽诱导率高，进行外植体培养获得了丝带草无菌苗，不受季节气候变化、自然灾害的影响。能够良好的保持优良品系的特征特性，可以直接应用于实际生产，具有较好经济效益、社会效益和生态效益。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。
本发明所述的丝带草的组培快繁方法，包括以下步骤：
1)、取丝带草的当年生幼嫩的茎段，清洗干净；采用酒精和升汞灭菌处理后，得外植体；
所述外植体选取及灭菌的具体操作为：取丝带草的当年生幼嫩的茎段，切割成2—3cm带芽茎段，先用洗涤剂溶液浸泡10—30min，再用毛刷刷洗腋芽部位，刷洗干净后在流水下冲洗过夜；在无菌操作台上，用75％的酒精处理3—5s，用无菌水冲洗3—4次，再用0.1％的升汞处理3—5min，无菌水冲洗4—6次，晾干即可。
2)、将步骤1所得外植体先接种到启动培养基上进行启动培养，培养温度为24—28℃，光照强度为2000—3000Lx，光照时间为14—18h/d，较优的，光照强度为2800Lx，光照时间为16h/d，培养2—3周至腋芽伸长2—4cm。其中，所述启动培养基的组成为：1/2DKW基本培养基，补充0.5—1.0mg/L TDZ、0.06—0.15mg/L NAA、10—50g/L蔗糖、2—10g/L琼脂。所述启动培养基的pH值为6.3—6.7，更优的所述启动培养基的pH值为6.5±0.1。
3)、将所述步骤2所得到腋芽切下转移至初代培养基上进行初代培养，培养温度为24—28℃，光照强度为2000—3000Lx，光照时间为14—18h/d，较优的，光照强度为2800Lx，光照时间为16h/d，生长两周后，获得生根无菌健壮母本苗。培养3—4周后，植株生长6-7cm，生根，根系发达，生根数为5-12根，根长3-5cm，在叶腋处重新生长出腋芽。其中，所述启动培养基的组成为：1/2DKW基本培养基，补充0.5—1.0mg/L TDZ、0.06—0.15mg/L NAA、10—50g/L蔗糖、2—10g/L琼脂。所述启动培养基的pH值为6.3—6.7，更优的所述启动培养基的pH值为6.5±0.1。
4)、将步骤3所得到的无菌健壮母本苗用节段法切割后转移至继代增殖培养基上进行继代培养，培养温度为24—28℃，光照强度为2000—3000Lx，光照时间为14—18h/d，较优的，光照强度为2800Lx，光照时间为16h/d，生长两周后，获得生根无菌健壮母本苗。培养2周后，带芽茎段可长成完整植株。其中，所述启动培养基的组成为：1/2DKW基本培养基，补充0.5—1.0mg/L TDZ、0.06—0.15mg/L NAA、10—50g/L蔗糖、2—10g/L琼脂。所述启动培养基的pH值为6.3—6.7，更优的所述启动培养基的pH值为6.5±0.1
5)、将经上述步骤所得到的生长健壮的丝带草组培苗，洗掉培养基后，直接移栽进温室大棚苗床中，遮光，降温保湿，控制大棚内温度为20～30℃。所述苗床的基质的配方原料体积比配比：腐殖质：珍珠岩为2:1。
在具体实施中，本发明以丝带草的繁殖作为本发明的一个应用。
对照组1—现有播种繁殖丝带草幼苗
采用播种繁殖丝带草首先要对苗圃进行疏松，并配上肥料，然后将种子播下并适当浸水以使其萌发。后期对其进行光照、施肥等工序得到幼苗，然后移栽使其生根。
对照组2—现有分株繁殖丝带草幼苗
插穗分株在5月-8月，选择背风向阳、透水性好的地方建露天分株床，分株床以粗沙垫底，铺设分株基质。将采集到的穗条进行处理成可以分株的插穗，最后将插穗分株到分株床上，然后进行繁殖。
实验组1—本发明所述的组培快繁方法繁殖丝带草幼苗
取丝带草的当年生幼嫩的茎段，切割成2—3cm带芽茎段，先用洗涤剂溶液浸泡10—30min，再用毛刷刷洗腋芽部位，刷洗干净后在流水下冲洗过夜；在无菌操作台上，用75％的酒精处理3—5s，用无菌水冲洗3—4次，再用0.1％的升汞处理3—5min，无菌水冲洗4—6次，晾干即可取得外植体。
将所得外植体接种到启动培养基上进行启动培养，然后将培养所得到的腋芽切下接种到初代培养基上进行初代培养；再将培养得到丝带草苗为母本切割后接种到继代增殖培养基上进行继代培养，直至长成完整植株；所述启动培养基、初代培养基及继代增殖培养基的组成为：1/2DKW基本培养基，补充0.5—1.0mg/L TDZ、0.06—0.15mg/L NAA、10—50g/L蔗糖、2—10g/L琼脂。
启动培养温度为24—28℃，光照强度为2500—3000Lx，光照时间为14—18h/d，培养2—3周至腋芽伸长2—4cm。
初代培养温度为24—28℃，光照强度为2000—3000Lx，光照时间为14—18h/d，生长两周后，获得生根无菌健壮母本苗。培养3—4周后，植株生长6-7cm，生根，根系发达，生根数为5-12根，根长3-5cm，在叶腋处重新生长出腋芽。
继代培养温度为24—28℃，光照强度为2000—3000Lx，光照时间为14—18h/d，生长两周后，获得生根无菌健壮母本苗。培养2周后，带芽茎段可长成完整植株。
将得到的生长健壮的组培生根苗，洗掉培养基后，直接移栽进温室大棚苗床中，遮光，降温保湿，控制大棚内温度为20～30℃，然后进行繁殖。其中苗床的基质的配方原料体积比配比：腐殖质：珍珠岩为2:1。
实施例1—丝带草幼苗分化珠数对照试验
以繁殖丝带草苗木为例，分别对上述实施例进行试验，所繁殖得到的丝带草苗木在移栽后，同样的条件下均采用同一方式管理，以常规水肥方式管理直至出圃。移栽后2个月测量所得丝带草苗木的分化株数，所得数据列表1如下：
表1—丝带草苗木分化株数实验
| 实验对象 | 对照组1 | 对照组2 | 实验组1 |
| 分化株数 | 5-8珠 | 8-10珠 | 30-50珠 |
实施例2—丝带草幼苗成活率对照试验
以繁殖丝带草苗木为例，分别对上述实施例进行试验，所繁殖得到的丝带草苗木在移栽后，同样的条件下均采用同一方式管理，以常规水肥方式管理直至出圃。移栽后60天测量所得丝带草苗木的成活率，所得数据列表2如下：
表2—丝带草苗木成活率实验
| 实验对象 | 对照组1 | 对照组1 | 实验组1 |
| 成活率 | 41.2％—68.6％ | 90.3％-94％ | 98％以上 |
本发明的具体实施方式如下：
具体实施方式1：所述的启动培养基的组成为：1/2DKW基本培养基，补充0.6mg/LTDZ、0.08mg/L NAA、20g/L蔗糖、4g/L琼脂。
具体实施方式2：所述的启动培养基的组成为：1/2DKW基本培养基，补充0.6mg/LTDZ、0.12mg/L NAA、40g/L蔗糖、6g/L琼脂。
具体实施方式3：所述的启动培养基的组成为：1/2DKW基本培养基，补充0.9mg/LTDZ、0.08mg/L NAA、20g/L蔗糖、6g/L琼脂。
具体实施方式4：所述的启动培养基的组成为：1/2DKW基本培养基，补充0.9mg/LTDZ、0.08mg/L NAA、40g/L蔗糖、4g/L琼脂。
具体实施方式5：所述的启动培养基的组成为：1/2DKW基本培养基，补充0.6mg/LTDZ、0.12mg/L NAA、20g/L蔗糖、4g/L琼脂。
具体实施方式6：所述启动培养基的组成为：1/2DKW基本培养基，补充0.8mg/LTDZ、0.1mg/L NAA、30g/L蔗糖、5g/L琼脂。
同样以繁殖丝带草苗木为例，采用上述具体实施方式1-6进行繁殖。采用前述同样的方式去管理，发芽后90天检测同样的数据，所得数据列表3如下：
表3—本发明具体实施方式
| 具体实施方式 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 分化株数(珠) | 30-35 | 30-35 | 35-40 | 40-45 | 35-45 | 35-50 |
| 成活率(％) | 98.2％ | 98.2％ | 98.6％ | 98.6％ | 98.2％ | 99％ |
从表1、表2可以看出：对照组中丝带草苗木分化株数为5—8珠，最多也是8-10珠；成活率为41.2％—68.6％，较优的90.3％-94％；实验组中丝带草苗木分化株数为30—50珠，成活率为98％以上，大大缩短了生根时间，且提高了成活率，提高繁殖周期。
从表3可以看出：采用具体实施方式6即本发明最佳实施方式应用到分株丝带草苗木，大大缩短了生根时间，且提高了成活率，提高繁殖周期。
本发明中，培养基成分解释：
DKW：本申请所述DKW基本培养基具有较低的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养，还能加速愈伤组织的生长，是较稳定的离子平衡溶液，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。
TDZ：所述TDZ是一种植物生长调节剂，具有很强的细胞分裂素活性，可以促进植物芽的再生和繁殖，打破芽的休眼，促进种子萌发，促进愈伤组织生长，延缓植物衰老等，可以对其它的植物激素和生理活性物质的作用来调节植物的生长发育过程，可用作植物组织培养。
NAA：所述NAA为萘乙酸，是一种植物生长激素，在植物使用扦插法繁殖时使用，也可用于植物组织培养，能促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根增加座果，防止落果，改变雌、雄花比率等，可经叶片、树枝的嫩表皮，种子进入到植株内，随营养流输导到全株。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种丝带草的组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、取丝带草的当年生幼嫩的茎段，清洗干净；采用酒精和升汞灭菌处理后，得外植体；
B、将步骤A所得外植体先接种到启动培养基上进行启动培养，然后将培养所得到的腋芽切下接种到初代培养基上进行初代培养；再将培养得到丝带草苗为母本切割后接种到继代增殖培养基上进行继代培养，直至长成完整植株；所述启动培养基、初代培养基及继代增殖培养基的组成为：1/2DKW基本培养基，补充0.5—1.0mg/L TDZ、0.06—0.15mg/L NAA、10—50g/L蔗糖、2—10g/L琼脂；其中，所述启动培养基的pH值为6.3—6.7；所述启动培养温度为24—28℃，光照强度为2500—3000Lx，光照时间为14—18h/d，直至腋芽伸长到2-4cm；所述初代培养温度为24—28℃，光照强度为2000—3000Lx，光照时间为14—18h/d，直至植株生长生根数为5—12根，根长3-5cm，在叶腋处重新生长出腋芽；所述继代培养温度为24—28℃，光照强度为2000—3000Lx，光照时间为14—18h/d，直至带芽茎段生长成完整植株。
2.根据权利要求1所述的丝带草的组培快繁方法，其特征在于，所述外植体选取及灭菌的具体操作为：取丝带草的当年生幼嫩的茎段，切割成2—3cm带芽茎段，先用洗涤剂溶液浸泡10—30min，再用毛刷刷洗腋芽部位，刷洗干净后在流水下冲洗过夜；在无菌操作台上，用75％的酒精处理3—5s，用无菌水冲洗3—4次，再用0.1％的升汞处理3—5min，无菌水冲洗4—6次，晾干即可。
3.根据权利要求1所述的丝带草的组培快繁方法，其特征在于，所述启动培养基、初代培养基及继代增殖培养基的组成为：1/2DKW基本培养基，补充0.6—0.9mg/L TDZ、0.08—0.12mg/L NAA、20—40g/L蔗糖、4—6g/L琼脂。
4.根据权利要求3所述的丝带草的组培快繁方法，其特征在于，所述启动培养基、初代培养基及继代增殖培养基的组成为：1/2DKW基本培养基，补充0.8mg/L TDZ、0.1mg/L NAA、30g/L蔗糖、5g/L琼脂。
5.根据权利要求1所述的丝带草的组培快繁方法，其特征在于，将所述步骤B得到的生长健壮的组培生根苗，洗掉培养基后，直接移栽进温室大棚苗床中，遮光，降温保湿，控制大棚内温度为20～30℃。
6.根据权利要求5所述的丝带草的组培快繁方法，其特征在于，所述苗床的基质的配方原料体积比配比：腐殖质：珍珠岩为2:1。
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Effective date of registration: 20170801 Address after: Six agency 635600 Dong Yu Zhen Huai Shu Cun, Bazhong city of Sichuan province Nanjiang County Applicant after: SICHUAN QICAI FORESTRY INDUSTRY DEVELOPMENT CO., LTD. Address before: 610041 No. 8, No. 1, No. 4, three, 2 Garden Road, Chengdu hi tech Zone, Sichuan, China Applicant before: Sichuan this industry of grass tree agriculture and forestry science and technology Co., Ltd |
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| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 635600 Six Societies of Huaishu Village, Dongyu Town, Nanjiang County, Bazhong City, Sichuan Province Patentee after: Sichuan Qicai Forestry Co., Ltd. Address before: 635600 Six Societies of Huaishu Village, Dongyu Town, Nanjiang County, Bazhong City, Sichuan Province Patentee before: SICHUAN QICAI FORESTRY INDUSTRY DEVELOPMENT CO., LTD. |
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| CP02 | Change in the address of a patent holder | ||
| CP02 | Change in the address of a patent holder |
Address after: 635600 Tissue Culture Workshop Building of Rare and Colorful Leaf Plant Varieties in Guangwu Mountain, Sanshe, Changtan Village, Zhengzheng Town, Nanjiang County, Bazhong City, Sichuan Province Patentee after: Sichuan Qicai Forestry Co., Ltd. Address before: 635600 Six Societies of Huaishu Village, Dongyu Town, Nanjiang County, Bazhong City, Sichuan Province Patentee before: Sichuan Qicai Forestry Co., Ltd. |