CN105532459B - 一种鸡爪槭橙之梦的组培快繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种鸡爪槭橙之梦的组培快繁方法，包括以下步骤：首先取橙之梦的当年生幼嫩的茎段，清洗干净；采用酒精和升汞灭菌处理后，得外植体；然后将所得外植体接种到启动培养基上进行培养，直至外植体分化出芽、生根，启动培养基的组成为：1/2WPM基本培养基，补充0.1—0.5mg/L IAA、0.02—0.08mg/L IBA、0.1—0.5mg/L NAA、0.02—0.08mg/L GA3、10—50g/L蔗糖、2—10g/L琼脂；最后将得到的生长健壮的组培生根苗，洗掉培养基后，直接移栽进温室大棚苗床中繁殖。采用本发明所述组培快繁方法繁殖橙之梦，培育周期短、根系良好、成活率高。
Description
技术领域
本发明涉及植物无性繁殖技术领域，具体涉及一种鸡爪槭橙之梦的组培快繁方法。
背景技术
鸡爪槭(Acer palmatum)又名鸡爪枫，属槭树科槭树属落叶小乔木或灌木。作为优良的观赏彩色叶植物，在我国园林中的应用历史悠久，在现今城市园林中的应用则更为普遍。橙之梦(Acer palmatum‘Orange Dream’)是鸡爪槭园艺变异品种之一。春天新叶金黄色，边缘为橙红，非常漂亮。夏季叶片变为浅绿到黄绿。秋季叶片颜色又变为亮黄到橙色。该品种直立生长，株型紧凑，可以高达3米高。生长强劲。又可作为小乔木栽培。橙色代表着深邃，像梦幻般美丽，结合起来能表达一种幽雅的境界。喜光、耐高温、耐寒性强、抗风性强、适应于各种土壤、可忍受一定的大气污染，尤其耐臭氧和二氧化硫，适应城市环境。适合庭院，也适合做造型盆景。极具观赏价值和经济价值。
目前，橙之梦以播种繁殖和扦插繁殖为主，但是出芽率和成活率都不高，远不能满足国内对种苗的需求。同时，目前橙之梦的常规扦插繁殖方法繁育周期长，生根率不稳定，根系欠发达，表现为主根明显、侧根发育不良，造林后生长表现欠佳，不利于橙之梦的规模化生产和开发应用。因此，探索一条能快速繁殖橙之梦的有效途径是亟待解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本申请提供一种鸡爪槭橙之梦的组培快繁方法，所述方法培育周期短、根系良好、成活率高。
为解决以上技术问题，本发明提供的技术方案是一种鸡爪槭橙之梦的组培快繁方法，包括以下步骤：
A、取橙之梦的当年生幼嫩的茎段，清洗干净；采用酒精和升汞灭菌处理后，得外植体；
B、将步骤A所得外植体接种到启动培养基上进行培养，直至所述外植体分化出芽、生根，所述启动培养基的组成为：1/2WPM基本培养基，补充0.1—0.5mg/L IAA、0.02—0.08mg/L IBA、0.1—0.5mg/L NAA、0.02—0.08mg/L GA3、10—50g/L蔗糖、2—10g/L琼脂。
进一步地，所述外植体选取及灭菌的具体操作为：取鸡爪槭橙之梦的当年生幼嫩的茎段，切割成2—3cm带芽茎段，先用洗涤剂溶液浸泡10—30min，再用毛刷刷洗腋芽部位，刷洗干净后在流水下冲洗过夜；在无菌操作台上，用75％的酒精处理8—15s，用无菌水冲洗2—3次，再用0.1％的升汞处理8—13min，无菌水冲洗4—6次，晾干即可。
进一步地，所述启动培养基的组成为：1/2WPM基本培养基，补充0.2—0.4mg/LIAA、0.04—0.06mg/L IBA、0.1—0.3mg/L NAA、0.04—0.06mg/L GA3、20—40g/L蔗糖、4—6g/L琼脂。
进一步地，所述启动培养基的组成为：1/2WPM基本培养基，补充0.3mg/LIAA、0.05mg/L IBA、.2mg/L NAA、0.05mg/L GA3、30g/L蔗糖、5g/L琼脂。
进一步地，所述步骤B中，培养温度为24—28℃，光照强度为2000—3000Lx，光照时间为14—18h/d。
进一步地，所述启动培养基的pH值为6.3—6.7。
进一步地，将所述步骤B得到的生长健壮的组培生根苗，洗掉培养基后，直接移栽进温室大棚苗床中，遮光，降温保湿，控制大棚内温度为20～30℃。
进一步地，所述苗床的基质的配方原料体积比配比：腐殖质：珍珠岩为2:1。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明所述的组培快繁方法与播种方法及扦插繁殖相比，具有简单易行、效高价廉、繁殖速度快、繁殖系数高的优点，不用播种节约种子且其繁殖栽植后初期生长速度明显增加，生长量大，适应性强。
利用本发明所述的组培快繁方法所使用的培养基配方简单、培养基成本低，培养流程简便，提高了橙之梦繁殖的系数、效率，能快速获得遗传性状一致的橙之梦生根苗，为进一步开展品种改良奠定基础。
本发明所述的组培快繁方法，芽诱导率高、移栽成活率高，进行外植体培养获得了橙之梦无菌苗，不受季节气候变化、自然灾害的影响。能够良好的保持优良品系的特征特性，可以直接应用于实际生产，具有较好经济效益、社会效益和生态效益。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。
本发明所述的鸡爪槭橙之梦的组培快繁方法，包括以下步骤：
1)、取橙之梦的当年生幼嫩的茎段，清洗干净；采用酒精和升汞灭菌处理后，得外植体；
所述外植体选取及灭菌的具体操作为：取鸡爪槭橙之梦的当年生幼嫩的茎段，切割成2—3cm带芽茎段，先用洗涤剂溶液浸泡10—30min，再用毛刷刷洗腋芽部位，刷洗干净后在流水下冲洗过夜；在无菌操作台上，用75％的酒精处理8—15s，用无菌水冲洗2—3次，再用0.1％的升汞处理8—13min，无菌水冲洗4—6次，晾干即可。
2)、将步骤1所得外植体接种到启动培养基上进行培养，培养温度为24—28℃，光照强度为2000—3000Lx，光照时间为14—18h/d，直至所述外植体分化出芽、生根，其中，腋芽伸长1～3cm；生长2～5条根，根长2～5cm。所述启动培养基的组成为：1/2WPM基本培养基，补充0.1—0.5mg/L IAA、0.02—0.08mg/L IBA、0.1—0.5mg/L NAA、0.02—0.08mg/L GA3、10—50g/L蔗糖、2—10g/L琼脂。所述启动培养基的pH值为6.3—6.7。
3)、将所述步骤2得到的生长健壮的组培生根苗，洗掉培养基后，直接移栽进温室大棚苗床中，遮光，降温保湿，控制大棚内温度为20～30℃。所述苗床的基质的配方原料体积比配比：腐殖质：珍珠岩为2:1。
在具体实施中，本发明以鸡爪槭橙之梦的繁殖作为本发明的一个应用。
对照组1—现有播种繁殖鸡爪槭橙之梦幼苗
采用播种繁殖鸡爪槭橙之梦首先要对苗圃进行疏松，并配上肥料，然后将种子播下并适当浸水以使其萌发。后期对其进行光照、施肥等工序得到幼苗，然后移栽使其生根。
对照组2—现有扦插繁殖鸡爪槭橙之梦幼苗
插穗扦插在5月-8月，选择背风向阳、透水性好的地方建露天扦插床，扦插床以粗沙垫底，铺设扦插基质。将采集到的穗条进行处理成可以扦插的插穗，最后将插穗扦插到扦插床上，然后进行繁殖。
实验组1—本发明所述的组培快繁方法繁殖鸡爪槭橙之梦幼苗
取鸡爪槭橙之梦的当年生幼嫩的茎段，切割成2—3cm带芽茎段，先用洗涤剂溶液浸泡10—30min，再用毛刷刷洗腋芽部位，刷洗干净后在流水下冲洗过夜；在无菌操作台上，用75％的酒精处理8—15s，用无菌水冲洗2—3次，再用0.1％的升汞处理8—13min，无菌水冲洗4—6次，晾干即可取得外植体。
将所得外植体接种到启动培养基上进行培养，培养温度为24—28℃，光照强度为2000—3000Lx，光照时间为14—18h/d，直至所述外植体分化出芽、生根，其中，腋芽伸长1～3cm；生长2～5条根，根长2～5cm，得到组培生根苗。所述启动培养基的组成为：1/2WPM基本培养基，补充0.1—0.5mg/L IAA、0.02—0.08mg/L IBA、0.1—0.5mg/L NAA、0.02—0.08mg/L GA3、10—50g/L蔗糖、2—10g/L琼脂。所述启动培养基的pH值为6.3—6.7。
将得到的生长健壮的组培生根苗，洗掉培养基后，直接移栽进温室大棚苗床中，遮光，降温保湿，控制大棚内温度为20～30℃，然后进行繁殖。其中苗床的基质的配方原料体积比配比：腐殖质：珍珠岩为2:1。
实施例1—鸡爪槭橙之梦幼苗生根对照试验
以繁殖鸡爪槭橙之梦苗木为例，分别对上述实施例进行试验，所繁殖得到的鸡爪槭橙之梦苗木在移栽后，同样的条件下均采用同一方式管理，以常规水肥方式管理直至出圃。移栽后60天测量所得鸡爪槭橙之梦苗木的生根天数，所得数据列表1如下：
表1—鸡爪槭橙之梦苗木生根天数实验
| 实验对象 | 对照组1 | 对照组2 | 实验组1 |
| 生根天数 | 70-90天 | 50-70天 | 30-50天 |
实施例2—鸡爪槭橙之梦幼苗成活率对照试验
以繁殖鸡爪槭橙之梦苗木为例，分别对上述实施例进行试验，所繁殖得到的鸡爪槭橙之梦苗木在移栽后，同样的条件下均采用同一方式管理，以常规水肥方式管理直至出圃。移栽后60天测量所得鸡爪槭橙之梦苗木的成活率，所得数据列表2如下：
表2—鸡爪槭橙之梦苗木成活率实验
| 实验对象 | 对照组1 | 对照组1 | 实验组1 |
| 成活率 | 41.2％—68.6％ | 90.3％-94％ | 98％以上 |
本发明的具体实施方式如下：
具体实施方式1：所述的启动培养基的组成为：1/2WPM基本培养基，补充0.2mg/LIAA、0.04mg/L IBA、0.1mg/L NAA、0.04mg/L GA3、20g/L蔗糖、4g/L琼脂。
具体实施方式2：所述的启动培养基的组成为：1/2WPM基本培养基，补充0.2mg/LIAA、0.04mg/L IBA、0.3mg/L NAA、0.06mg/L GA3、20g/L蔗糖、4g/L琼脂。
具体实施方式3：所述的启动培养基的组成为：1/2WPM基本培养基，补充0.2mg/LIAA、0.04mg/L IBA、0.3mg/L NAA、0.06mg/L GA3、40/L蔗糖、6g/L琼脂。
具体实施方式4：所述的启动培养基的组成为：1/2WPM基本培养基，补充0.4mg/LIAA、0.06mg/L IBA、0.3mg/L NAA、0.06mg/L GA3、20g/L蔗糖、4g/L琼脂。
具体实施方式5：所述的启动培养基的组成为：1/2WPM基本培养基，补充0.4mg/LIAA、0.06mg/L IBA、0.3mg/L NAA、0.06mg/L GA3、40g/L蔗糖、6g/L琼脂。
具体实施方式6：所述启动培养基的组成为：1/2WPM基本培养基，补充0.3mg/LIAA、0.05mg/L IBA、.2mg/L NAA、0.05mg/L GA3、30g/L蔗糖、5g/L琼脂。
同样以繁殖鸡爪槭橙之梦苗木为例，采用上述具体实施方式1-6进行繁殖。采用前述同样的方式去管理，发芽后90天检测同样的数据，所得数据列表3如下：
表3—本发明具体实施方式
| 具体实施方式 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 生根天数(天) | 40-45 | 40-45 | 35-45 | 35-45 | 40-45 | 30-35 |
| 成活率(％) | 98.2％ | 98.2％ | 98.6％ | 98.6％ | 98.2％ | 99％ |
从表1、表2可以看出：对照组中鸡爪槭橙之梦苗木生根天数为18—200天，最快也是40-60天；成活率为41.2％—68.6％，较优的90.3％-94％；实验组中鸡爪槭橙之梦苗木生根天数为30—45天，成活率为98％以上，大大缩短了生根时间，且提高了成活率，提高繁殖周期。
从表3可以看出：采用具体实施方式6即本发明最佳实施方式应用到扦插鸡爪槭橙之梦苗木，大大缩短了生根时间，且提高了成活率，提高繁殖周期。
本发明中，培养基成分解释：
本申请所述WPM基本培养基具有较高的硝态氮，钙和钾离子含量也较高，培养基不含碘，多用于木本植物的培养，能够保证组织生长所需的矿质营养，还能加速愈伤组织的生长，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要，部分植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。
本申请所述的IAA为吲哚乙酸，是一种植物生长激素，能够调节植物的生长，不仅能促进生长，而且具有抑制生长和器官建成的作用。在细胞水平上，可刺激形成层细胞分裂、刺激枝的细胞伸长、抑制根细胞生长、促进木质部、韧皮部细胞分化、促进插条发根、调节愈伤组织的形态建成，因此可用作植物组织培养。
本申请所述的IBA为吲哚丁酸，是一种植物生长激素，主要用于插条生根，可诱导根原体的形成，促进细胞分化和分裂，有利于新根生成和维管束系统的分化，促进插条不定根的形成。
本申请所述的NAA为萘乙酸，是一种植物生长激素，在植物使用扦插法繁殖时使用，也可用于植物组织培养，能促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根增加座果，防止落果，改变雌、雄花比率等，可经叶片、树枝的嫩表皮，种子进入到植株内，随营养流输导到全株。
本申请所述的GA3为赤霉素，是一种植物生长调节剂，主要用于刺激在培养中形成的不定胚发育成小植株，促进幼苗茎的伸长生长；另外，赤霉素还用于打破休眠，促进种子、块茎、鳞茎等提前萌发；在器官形成后，添加赤霉素可促进器官或胚状体的生长。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (4)
1.一种鸡爪槭橙之梦的组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、取橙之梦的当年生幼嫩的茎段，清洗干净；采用酒精和升汞灭菌处理后，得外植体；
B、将步骤A所得外植体接种到启动培养基上进行培养，直至所述外植体分化出芽、生根，所述启动培养基的组成为：1/2WPM基本培养基，补充0.1—0.5mg/LIAA、0.02—0.08mg/LIBA、0.1—0.5mg/L NAA、0.02—0.08mg/L GA3、10—50g/L蔗糖、2—10g/L琼脂，培养温度为24—28℃，光照强度为2000—3000Lx，光照时间为14—18h/d，所述启动培养基的pH值为6.3—6.7；
C、将步骤B得到的生长健壮的组培生根苗，洗掉培养基后，直接移栽进温室大棚苗床中，遮光，降温保湿，控制大棚内温度为20～30℃，所述苗床的基质的配方原料体积比配比：腐殖质：珍珠岩为2:1。
2.根据权利要求1所述的鸡爪槭橙之梦的组培快繁方法，其特征在于，所述外植体选取及灭菌的具体操作为：取鸡爪槭橙之梦的当年生幼嫩的茎段，切割成2—3cm带芽茎段，先用洗涤剂溶液浸泡10—30min，再用毛刷刷洗腋芽部位，刷洗干净后在流水下冲洗过夜；在无菌操作台上，用75％的酒精处理8—15s，用无菌水冲洗2—3次，再用0.1％的升汞处理8—13min，无菌水冲洗4—6次，晾干即可。
3.根据权利要求1所述的鸡爪槭橙之梦的组培快繁方法，其特征在于，所述启动培养基的组成为：1/2WPM基本培养基，补充0.2—0.4mg/L IAA、0.04—0.06mg/L IBA、0.1—0.3mg/L NAA、0.04—0.06mg/L GA3、20—40g/L蔗糖、4—6g/L琼脂。
4.根据权利要求3所述的鸡爪槭橙之梦的组培快繁方法，其特征在于，所述启动培养基的组成为：1/2WPM基本培养基，补充0.3mg/LIAA、0.05mg/L IBA、0.2mg/L NAA、0.05mg/LGA3、30g/L蔗糖、5g/L琼脂。
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Address after: 635600 Tissue Culture Workshop Building of Rare and Colorful Leaf Plant Varieties in Guangwu Mountain, Sanshe, Changtan Village, Zhengzheng Town, Nanjiang County, Bazhong City, Sichuan Province Patentee after: Sichuan Qicai Forestry Co., Ltd. Address before: 635600 Six Societies of Huaishu Village, Dongyu Town, Nanjiang County, Bazhong City, Sichuan Province Patentee before: Sichuan Qicai Forestry Co., Ltd. |
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