CN104686331A - 一种垂丝海棠组培快繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种垂丝海棠组培快繁殖方法，涉及垂丝海棠（Malus halliana）通过无性快繁技术快速获得大量垂丝海棠优良品种木苗的方法。本发明以垂丝海棠半木质化单芽茎段为外植体，经过外植体消毒、芽初代诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等步骤建立了垂丝海棠组织培养快繁技术体系，为今后垂丝海棠组织培养繁殖苗木，加速良种繁育满足市场需求提供技术支持。
Description
技术领域
本发明涉及园林植物生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种垂丝海棠组培快繁殖方法。
背景技术
垂丝海棠（Malus halliana）又名海棠花、垂枝海棠、解语花等，属于蔷薇科苹果属植物，是比较常见的一种海棠花，与木瓜海棠海、西府海棠、贴梗海棠并称为“海棠四品”。垂丝海棠花梗柔软下垂，宛若少女纤纤细肢，花姿优美，如遇微风飘飘荡荡，娇柔艳，花开时节远看犹如彤云密布，美不胜收，深受人们喜爱，被称为“花中神仙”，具有极高的园林观赏价值。垂丝海棠可孤植、丛植于大片草坪绿地中央独成一景，亦可孤植、对植于门庭两旁，创造花开时节的海棠花廊。垂丝海棠因具有较强吸收二氧化硫的能力，被广泛用于城市绿化、工矿绿化的园林树种。垂丝海棠还具较高的药用价值，多用于治疗吐血、便血、尿血、骨折等疾病。
垂丝海棠作为一种园林观赏花卉深受人胶的喜爱，其苗木需求时逐年增加，但是，垂丝海棠主要是通过扦插、嫁接等方式进行种苗育种，成活率低、繁殖系数小，远不能满足园林造景需要，严重影响了垂丝海棠开发利用。因此很有必要建立完整的垂丝海棠离体快繁体系，加速垂丝海棠种苗繁育以满足市场需求。
发明内容
本发明的目的在于提供出一种垂丝海棠组培快繁殖方法，本发明以垂丝海棠半木质化单芽茎段为外植体，经过外植体消毒、芽初代诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等步骤建立了垂丝海棠组织培养快繁技术体系，从而实现了本发明的目的。
本发明的一种垂丝海棠组培快繁殖方法，包括以下的步骤：
（1）外植体处理及消毒：选取健壮垂丝海棠植株半木质化单芽茎段作为外植体，先用去污粉水浸泡5～10min，再用毛刷刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用流水下冲洗1～3h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒5～30s后用无菌水洗3～5次，再用0.1%升汞溶液消毒10～25min，用无菌水冲洗4～6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用；
（2）芽初代诱导培养：将步骤（1）处理后的垂丝海棠半木质化单芽茎段切成1.5～2.5cm小段并接种到诱导培养基上,先在25～28℃条件下全暗培养1～5天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为1500～3000lx，直至诱导形成丛生芽；
（3）增殖培养：将步骤（2）培养获得的丛生芽长至约1.5～2.5cm时分切至增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照12～16小时，光照强度为1500～2500lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，得到丛生芽；
（4）生根培养：将步骤（2）或（3）过程获得的高度约为2.5～3.5cm的丛生芽芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～7天，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为2000～3000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根；
（5）炼苗移栽：将步骤（4）获得的高约4～5cm、生长健壮、根系粗壮、叶色浓绿的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗3～5天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土:蛭石:沙土＝3:2:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田，小苗移栽后选择透光率为60%～80%的遮阴处理。
上述步骤（2）所述的诱导培养基为：WPM+1～3mg/L6-BA+0.1～1mg/L NAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
上述步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+0.1～1mg/LIBA+1～4mg/L 6-BA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
上述步骤（4）所述的生根培养基为：1/2MS+0.1～2mg/L NAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
与现有技术相比本发明的优点是：本发明通过无性快繁技术快速获得大量垂丝海棠优良品种木苗的方法。以垂丝海棠半木质化单芽茎段为外植体，经过外植体消毒、芽初代诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等步骤建立了垂丝海棠组织培养快繁技术体系，为今后垂丝海棠组织培养繁殖苗木，加速良种繁育满足市场需求提供技术支持。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1：
（1）外植体处理及消毒：选取健壮垂丝海棠植株半木质化单芽茎段作为外植体，先用去污粉水浸泡5min，再用软毛刷轻轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用流水下冲洗1h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒5s后用无菌水洗5次，再用0.1%升汞溶液消毒10min，用无菌水冲洗4次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。
（2）芽初代诱导培养：将步骤（1）处理后的垂丝海棠半木质化单芽茎段切成1.5cm小段并接种到诱导培养基上,先在28℃条件下全暗培养1天，然后置于每天光照10小时，光照强度为1500lx，直至诱导形成丛生芽，出芽率为87.8%。所述诱导培养基为WPM+1mg/L6-BA+0.1mg/L NAA+30g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8。
（3）增殖培养：将步骤（2）培养获得的丛生芽长至约1.5～2.5cm时分切至增殖培养基上进行继代培养，接种后先在28℃条件下全暗培养1天，然后置于每天光照12小时，光照强度为1500lx，置于培养温度为28℃的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，以得到更多的丛生芽，芽增殖系数为4.09。所述的增殖培养基为MS+1mg/LIBA+1mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8。
（4）生根培养：将步骤（2）或（3）过程获得的高度约为2.5～3.5cm的丛生芽芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在28℃条件下全暗培养1天，然后置于每天光照12小时，光照强度为2000lx，培养温度为28℃的条件下培养至生根，生根率为94%。所述的生根培养基为1/2MS+0.1mg/L NAA+15g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.8。
（5）炼苗移栽：将步骤（4）获得的高约4～5cm、生长健壮、根系粗壮、叶色浓绿的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗3天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土:蛭石:沙土＝3:2:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田，小苗移栽后选择透光率为60%的遮阴处理，移栽成活率为93%以上。
实施例2：
（1）外植体处理及消毒：选取健壮垂丝海棠植株半木质化单芽茎段作为外植体，先用去污粉水浸泡5min，再用软毛刷轻轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用流水下冲洗1h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒8s后用无菌水洗5次，再用0.1%升汞溶液消毒15min，用无菌水冲洗4次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。
（2）芽初代诱导培养：将步骤（1）处理后的垂丝海棠半木质化单芽茎段切成1.5cm小段并接种到诱导培养基上,先在28℃条件下全暗培养1天，然后置于每天光照10小时，光照强度为1500lx，直至诱导形成丛生芽，出芽率为83.9%。所述诱导培养基为WPM+1.5mg/L6-BA+1mg/L NAA+30g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8。
（3）增殖培养：将步骤（2）培养获得的丛生芽长至约1.5～2.5cm时分切至增殖培养基上进行继代培养，接种后先在28℃条件下全暗培养1天，然后置于每天光照12小时，光照强度为1500lx，置于培养温度为28℃的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，以得到更多的丛生芽，芽增殖系数为4.67。所述的增殖培养基为MS+1.5mg/LIBA+1.5mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8。
（4）生根培养：将步骤（2）或（3）过程获得的高度约为2.5～3.5cm的丛生芽芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在28℃条件下全暗培养1天，然后置于每天光照13小时，光照强度为2000lx，培养温度为28℃的条件下培养至生根，生根率为91.5%。所述的生根培养基为1/2MS+0.5mg/L NAA+15g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.8。
（5）炼苗移栽：将步骤（4）获得的高约4～5cm、生长健壮、根系粗壮、叶色浓绿的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗3天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土:蛭石:沙土＝3:2:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田，小苗移栽后选择透光率为70%的遮阴处理，移栽成活率为91.7%以上。
Claims (4)
1.一种垂丝海棠组培快繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）外植体处理及消毒：选取健壮垂丝海棠植株半木质化单芽茎段作为外植体，先用去污粉水浸泡5～10min，再用毛刷刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用流水下冲洗1～3h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒5～30s后用无菌水洗3～5次，再用0.1%升汞溶液消毒10～25min，用无菌水冲洗4～6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用；
（2）芽初代诱导培养：将步骤（1）处理后的垂丝海棠半木质化单芽茎段切成1.5～2.5cm小段并接种到诱导培养基上,先在25～28℃条件下全暗培养1～5天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为1500～3000lx，直至诱导形成丛生芽；
（3）增殖培养：将步骤（2）培养获得的丛生芽长至约1.5～2.5cm时分切至增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照12～16小时，光照强度为1500～2500lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，得到丛生芽；
（4）生根培养：将步骤（2）或（3）过程获得的高度约为2.5～3.5cm的丛生芽芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～7天，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为2000～3000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根；
（5）炼苗移栽：将步骤（4）获得的高约4～5cm、生长健壮、根系粗壮、叶色浓绿的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗3～5天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土:蛭石:沙土＝3:2:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度，待幼苗成活后再移栽大田，小苗移栽后选择透光率为60%～80%的遮阴处理。
2. 根据权利要求1所述的一种垂丝海棠组培快繁殖方法，其特征在于步骤（2）所述的诱导培养基为：WPM+1～3mg/L6-BA+0.1～1mg/L NAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
3. 根据权利要求1所述的一种垂丝海棠组培快繁殖方法，其特征在于步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+0.1～1mg/LIBA+1～4mg/L 6-BA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
4. 根据权利要求1所述的一种垂丝海棠组培快繁殖方法，其特征在于步骤（4）所述的生根培养基为：1/2MS+0.1～2mg/L NAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
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