CN104026011A - 银叶薜荔的组织培养快速繁殖的培养基及繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种银叶薜荔的组织培养快速繁殖的培养基及繁殖方法。基本培养基采用更适合木本植物的WPM培养基，通过连续继代和合适剂量的激素组合实现了银叶薜荔组织培养中植株的高效再生，另外对外植体无菌处理和外植体无菌苗的培养等做了改进。本发明操作简单、污染率低、植株再生成功率高。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种银叶薜荔的组织培养快速繁殖的培养基及繁殖方法。
背景技术
银叶薜荔(Ficus pumia ‘Variegata’)属桑科榕属，常绿木质藤本植物，株型小巧，是优良的观叶植物，同时也是极佳的地被植物和绿篱材料，观赏价值高，品质优良，具有很高的经济效益，开发利用前景广阔，市场前景极为看好。
银叶薜荔的常规繁殖方法是扦插和压条法, 繁殖量有限, 且受季节影响,不能满足市场需求,采用组织培养快速繁殖技术,可获得优质整齐的种苗,为其种苗快速繁殖开辟一条有效途径。
关于薜荔组织培养的报道很少，仅见报道的有李方（2000）、姜傲芳（2007）等，但这几篇报道均存在以下问题：1）组织培养的材料是常见的绿叶薜荔，银叶薜荔作为作为从国外引进的新优观赏植物，相关的组织培养技术未见报道；2）基本培养基选用B5或MS，导致种苗质量下降和移栽存活率较低，一般仅为85%；3）从丛生芽的诱导开始，操作较复杂且芽的诱导率都不高（MS培养基芽诱导率为46%，B5培养基芽诱导率为76%）。
发明内容
针对存在的问题，本发明提供一种银叶薜荔的组织培养快速繁殖的培养基及繁殖方法，基本培养基采用更适合木本植物的WPM培养基，通过连续继代和合适剂量的激素组合实现了银叶薜荔组织培养中植株的高效再生，该方法操作简单、污染率低、植株再生成功率高。
一种银叶薜荔的组织培养快速繁殖的培养基，它包括
1）无菌苗培养基：WPM；
2）增殖培养基：WPM + 6-BA 1.0~3.0 mg /L+ NAA 0.1~0.3mg/L；
3）生根培养基：1/2WPM+ IBA0.5~1.5mg/L；
在WPM以及1/2WPM中，添加白糖15～30g/L，琼脂5～8 g/L，调节pH5.6～5.8。
，包括以下步骤:
（一）培养基的配制
1）无菌苗培养基：WPM；
2）增殖培养基：WPM + 6-BA 1.0~3.0 mg /L+ NAA 0.1~0.3mg/L；
3）生根培养基：1/2WPM+ IBA0.5~1.5mg/L；
在上述WPM以及1/2WPM中，添加白糖15～30g/L，琼脂5～8 g/L，调节pH5.6～5.8；
(二) 银叶薜荔组培苗的培养
1）外植体的选择：选择生长健壮幼嫩的银叶薜荔茎段作为组织培养的外植体，流水冲洗1~2h，然后超净工作台上用无菌水冲洗干净，用70%酒精消毒20-40s，升汞溶液或者次氯酸钠溶液浸泡进行灭菌，然后用无菌水冲洗多次，备用；
2）外植体无菌苗的培养：在超净工作台上将步骤1）中准备的外植体切成小段，接种到无菌苗培养基中进行培养；培养条件：培养温度为25±2℃，光照光强为1500Lx，光照时间12h/d；
3) 待步骤2）中的无菌苗长到3.0 ~4.0 cm 高时，切成1cm大小的小段接种到增殖培养基上进行培养； 培养条件：培养温度为25±2℃，光照光强为1500Lx，光照时间12h/d；
4) 待步骤3）中的小苗长出的长到3. 0 ~ 6.0cm 高时，接种到生根培养基中；培养条件：培养温度为25±2℃，光照光强为1500Lx，光照时间12h/d；
5) 待步骤4）中的小苗长到高4 ~ 8cm 且具有至少3 条长于2cm 的根时，得到可出瓶种植的种苗。
3、根据权利要求2所述的利用银叶薜荔的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，进一步，
（三）组培苗的炼苗与移栽
将步骤5）所述的种苗带瓶一起移至温室大棚，先去盖放置2-5天，出瓶并洗净根部培养基，移栽入泥炭∶珍珠岩按体积3：1的混合基质中，管理至成品苗，出圃。
本发明的有益效果
一、本发明操作步骤简单，不采用丛生芽诱导的复杂步骤，而是直接对外植体进行无菌苗的培养，提高生长效率，降低了污染率，为后续增殖提供了健壮的幼苗；
二、本发明通过采用更适宜木本植物的WPM培养基配方，结合不同的激素配比和浓度调节，提高了繁殖系数 (5-8倍)，缩短了增殖和生根周期 (增殖生长14-20天，生根生长14-20天)；也进一步提高了种苗的质量，使移栽成活率高达95% 以上；
三、采用本发明的方法，一般仅需50 ~ 60天即可得到种苗，是一种不受季节等因素影响，高效、快速提供优质银叶薜荔种苗的方法，可以加速良种推广速度，提高田间品种种植产量。
四、本发明建立的银叶薜荔组织培养体系将为工厂化育苗提供理论依据和技术支撑，方法操作简单、污染率低、植株再生成功率高。
具体实施方式
通过以下实施例对本发明作进一步的详细说明，但本发明的内容并不局限于此。
实施例1
一种银叶薜荔的组织培养快速繁殖的方法，依次进行一下步骤：
（一）培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
1）基本培养基：无菌苗培育、增殖、壮苗的培养基均采用WPM基本培养基，生根培养采用1/2WPM。
2）无菌苗培养基为：WPM+白糖20g/L+琼脂8g/L，pH5.6～5.8
3）增殖、壮苗培养基为：WPM + 6-BA 2.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L+白糖25g/L+琼脂5g/L，pH5.6～5.8。
4）生根培养基为：1/2WPM + IBA0.5mg/L +白糖30g/L+琼脂5g/L，pH5.6～5.8；
(二) 银叶薜荔组培苗的培养
1）外植体的选择：选择生长健壮幼嫩的银叶薜荔茎段作为组织培养的外植体，先用10%的洗洁精浸泡8~10min，再用流水冲洗1~2h，于超净工作台上用无菌水冲洗干净；用70%酒精消毒30s，0.1% 升汞水溶液浸泡5~8min进行灭菌，后用无菌水冲洗5～6次，备用；
2）外植体无菌苗的培养：在超净工作台上将上述茎段切成1cm大小的小段，接种到无菌苗培养基中进行培养；培养条件：培养温度为25±2℃，光照光强为1500Lx，光照时间12h/d；
3) 待步骤2）中的无菌苗长到3.0 ~4.0 cm 高时，切成1cm大小的小段接种到增殖培养基上进行培养； 培养条件：培养温度为25±2℃，光照光强为1500Lx，光照时间12h/d；
4) 待步骤3）中的小苗长出的长到3. 0 ~ 6.0cm 高时，接种到生根培养基中；培养条件：培养温度为25±2℃，光照光强为1500Lx，光照时间12h/d；
5) 待步骤4）中的小苗长到高4 ~ 8cm 且具有至少3 条长于2cm 的根时，得到可出瓶种植的种苗。
（三）组培苗的炼苗与移栽
将步骤5）所述的种苗带瓶一起移至温室大棚，先去盖放置2-5天，出瓶并洗净根部培养基，移栽入泥炭∶珍珠岩按体积3：1的混合基质中，管理至成品苗，出圃。
实施例2
本例中，步骤（一）培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
无菌苗培养基为：WPM +白糖25g/L+琼脂5g/L，pH5.6～5.8；
增殖培养基为：WPM+ 6-BA3.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L+白糖30g/L+琼脂5g/L，pH5.6～5.8。
生根培养基为：1/2WPM + IBA1.0 mg/L +白糖30g/L+琼脂5g/L，pH5.6～5.8；
其余步骤、工艺同实施例1。
实施例3
本例中，步骤（一）培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：
无菌苗培养基为：WPM +白糖30g/L+琼脂5g/L，pH5.6～5.8；
增殖培养基为：WPM+ 6-BA3.0 mg/L + NAA0.3 mg/L+白糖30g/L+琼脂5g/L，pH5.6～5.8。
生根培养基为：1/2WPM + IBA1.5 mg/L +白糖30g/L+琼脂5g/L，pH5.6～5.8；
其余步骤、工艺同实施例1。
Claims (3)
1.一种银叶薜荔的组织培养快速繁殖的培养基，其特征在于，它包括
1）无菌苗培养基：WPM；
2）增殖培养基：WPM + 6-BA 1.0~3.0 mg /L+ NAA 0.1~0.3mg/L；
3）生根培养基：1/2WPM+ IBA0.5~1.5mg/L；
在WPM以及1/2WPM中，添加白糖15～30g/L，琼脂5～8 g/L，调节pH5.6～5.8。
2.一种银叶薜荔的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤:
（一）培养基的配制
1）无菌苗培养基：WPM；
2）增殖培养基：WPM + 6-BA 1.0~3.0 mg /L+ NAA 0.1~0.3mg/L；
3）生根培养基：1/2WPM+ IBA0.5~1.5mg/L；
在上述WPM以及1/2WPM中，添加白糖15～30g/L，琼脂5～8 g/L，调节pH5.6～5.8；
(二) 银叶薜荔组培苗的培养
1）外植体的选择：选择生长健壮幼嫩的银叶薜荔茎段作为组织培养的外植体，流水冲洗1~2h，然后超净工作台上用无菌水冲洗干净，用70%酒精消毒20-40s，升汞溶液或者次氯酸钠溶液浸泡进行灭菌，然后用无菌水冲洗多次，备用；
2）外植体无菌苗的培养：在超净工作台上将步骤1）中准备的外植体切成小段，接种到无菌苗培养基中进行培养；培养条件：培养温度为25±2℃，光照光强为1500Lx，光照时间12h/d；
3) 待步骤2）中的无菌苗长到3.0 ~4.0 cm 高时，切成1cm大小的小段接种到增殖培养基上进行培养； 培养条件：培养温度为25±2℃，光照光强为1500Lx，光照时间12h/d；
4) 待步骤3）中的小苗长出的长到3. 0 ~ 6.0cm 高时，接种到生根培养基中；培养条件：培养温度为25±2℃，光照光强为1500Lx，光照时间12h/d；
5) 待步骤4）中的小苗长到高4 ~ 8cm 且具有至少3 条长于2cm 的根时，得到可出瓶种植的种苗。
3.根据权利要求2所述的利用银叶薜荔的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，进一步，
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