CN104686330A - 一种大花朱顶红组培快繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种大花朱顶红组培快繁殖方法，涉及大花朱顶红（Hippeastrum vittatum）通过无性快繁技术快速获得大量大花朱顶红组培苗的方法。本发明以大花朱顶红‘Red lion’鳞茎为外植体，经过外植体消毒、不定芽诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等步骤建立了一种大花朱顶红组培快繁殖方法，为今后‘Red lion’等观赏价值高的朱顶红品种在国内的普及提供有利条件和基础。
Description
技术领域
本发明涉及园艺植物生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种大花朱顶红组培快繁殖方法。
背景技术
朱顶红（Hippeastrum vittatum Herb.）又名红花莲、华胃兰、对红等，为石蒜科孤挺花属多年生鳞茎花卉。朱顶红花形似百合，外形像君子兰，适应性强，有较高的观赏性和药用价值。美国等西方国家对朱顶红新品种选育和种球的商业化生产有了一定的发展。我国的朱顶红品种相对单一，种球生产技术落后，优质种球依赖从荷兰等国家进口，昂贵的种球价格极大限制了此种观赏价值很高的球根花卉在我国的发展。因此，建立朱顶红离体再生技术体系，对推动优良朱顶红园艺品种在我国的生产及应用具有重要意义。
具有较高观赏价值的朱顶红在世界各地均有栽培，其种苗主要是通过种子、分球、鳞片扦插等方式进行繁育。采用种子繁殖方式从播种到开花至少需要3年以上的时间，这很大程度上影响了其规模化发展和市场化的要求。分球繁殖方式由于母鳞茎衍生出小球的数量有限，导致繁殖系数较低。而植物组织培养技术具有加速育种进程、缩短繁殖时间、改良植物品质、节省空间、减少劳动、可终年生产、不受自然条件限制等特点，可有效解决朱顶红种球繁殖耗时长、繁殖系数低的问题。因此很有必要建立完整的朱顶红离体快繁体系，‘Red lion’等观赏价值高的朱顶红品种在国内的普及提供有利条件和基础。
发明内容
本发明的目的在于提供出一种大花朱顶红组培快繁殖方法，本发明以大花朱顶红‘Red lion’鳞茎为外植体，经过外植体消毒、不定芽诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等步骤建立了一种大花朱顶红组培快繁殖方法，从而实现了本发明的目的。
本发明的一种大花朱顶红组培快繁殖方法，包括以下的步骤：
（1）外植体消毒：选取健壮的大花朱顶红‘Red lion’鳞茎为外植体，用自来水冲净表面，将鳞茎去除叶片及外层膜质磷片，切去种球顶部四分之一及根部，然后用流水下冲洗1～3h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒5～30s后用无菌水洗3～5次，再用0.1%升汞溶液消毒1～10min，用无菌水冲洗4～6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。
（2）芽诱导培养：将步骤（1）处理后的鳞茎剥去外层鳞片，用无菌滤纸吸干水分，纵向分切鳞片，每层鳞片切成长5～6mm，宽3～4mm的切块并接种到诱导培养基上,先在25～28℃条件下全暗培养7～10天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为1500～3000lx，直至诱导形成丛生芽。
（3）增殖培养：将步骤（2）培养获得的丛生芽长至约2.5～3.5cm时分切至增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养7～10天，然后置于每天光照12～16小时，光照强度为1500～2500lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，以得到更多的丛生芽。
（4）生根培养：将步骤（2）或（3）过程获得的高度约为3.5～4.5cm的丛生芽芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养3～7天，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为2000～3000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根。
（5）炼苗移栽：将步骤（4）获得的高约7～9cm、生长健壮、根系粗壮、叶色浓绿的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗3～5天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土:沙土＝3:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田，小苗移栽后选择透光率为60%～80%的遮阴处理。
上述步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+1～6mg/L6-BA+0.5～3mg/L NAA+0.1～1mg/L VB1+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
上述步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+0.1～1mg/L NAA+1～4mg/L 6-BA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
上述步骤（4）所述的生根培养基为：1/2MS+0.1～2mg/L NAA+1～3mg/L GGR+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
与现有技术相比本发明的优点是: 本发明通过无性快繁技术快速获得大量大花朱顶红组培苗的方法。以大花朱顶红‘Red lion’鳞茎为外植体，经过外植体消毒、不定芽诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等步骤建立了一种大花朱顶红组培快繁殖方法，为今后‘Red lion’等观赏价值高的朱顶红品种在国内的普及提供有利条件和基础。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1：
（1）外植体消毒：选取健壮的大花朱顶红‘Red lion’鳞茎为外植体，用自来水冲净表面，将鳞茎去除叶片及外层膜质磷片，切去种球顶部四分之一及根部，然后用流水下冲洗1h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒5s后用无菌水洗3次，再用0.1%升汞溶液消毒1min，用无菌水冲洗4次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。
（2）芽诱导培养：将步骤（1）处理后的鳞茎剥去外层鳞片，用无菌滤纸吸干水分，纵向分切鳞片，每层鳞片切成长5～6mm，宽3～4mm的切块并接种到诱导培养基上,先在28℃条件下全暗培养7天，然后置于每天光照10小时，光照强度为1500lx条件下培养100天即可诱导形成丛生芽，诱导率为57.8%。所述的诱导培养基为：MS+3mg/L6-BA+0.5mg/L NAA+0.1mg/L VB1+15g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.8。
（3）增殖培养：将步骤（2）培养获得的丛生芽长至约2.5～3.5cm时分切至增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在28℃条件下全暗培10天，然后置于每天光照12小时，光照强度为1500lx，置于培养温度为28℃的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，以得到更多的丛生芽，增殖系数为3.6，不定芽部分出现褐化、死亡现象。所述的增殖培养基为：MS+0.5mg/L NAA+2mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.8。
（4）生根培养：将步骤（2）或（3）过程获得的高度约为3.5～4.5cm的丛生芽芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在28℃条件下全暗培养3天，然后置于每天光照12小时，光照强度为2000lx，培养温度为28℃的条件下培养至生根，生根率为73%。所述的生根培养基为：1/2MS+0.3mg/L NAA+1mg/L GGR+15g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.8。
（5）炼苗移栽：将步骤（4）获得的高约7～9cm、生长健壮、根系粗壮、叶色浓绿的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗3天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土:沙土＝3:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田，小苗移栽后选择透光率为80%的遮阴处理，移栽成活率为85%以上。
实施例2：
（1）外植体消毒：选取健壮的大花朱顶红‘Red lion’鳞茎为外植体，用自来水冲净表面，将鳞茎去除叶片及外层膜质磷片，切去种球顶部四分之一及根部，然后用流水下冲洗2h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒10s后用无菌水洗5次，再用0.1%升汞溶液消毒6min，用无菌水冲洗4次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。
（2）芽诱导培养：将步骤（1）处理后的鳞茎剥去外层鳞片，用无菌滤纸吸干水分，纵向分切鳞片，每层鳞片切成长5～6mm，宽3～4mm的切块并接种到诱导培养基上,先在28℃条件下全暗培养9天，然后置于每天光照11小时，光照强度为2000lx条件下培养95天即可诱导形成丛生芽，诱导率为67%。所述的诱导培养基为：MS+2mg/L6-BA+0.8mg/L NAA+0.5mg/L VB1+15g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.8。
（3）增殖培养：将步骤（2）培养获得的丛生芽长至约2.5～3.5cm时分切至增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在28℃条件下全暗培养7天，然后置于每天光照13小时，光照强度为1500lx，置于培养温度为28℃的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，以得到更多的丛生芽，增殖系数为4.0。所述的增殖培养基为：MS+0.8mg/L NAA+3mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.8。
（4）生根培养：将步骤（2）或（3）过程获得的高度约为3.5～4.5cm的丛生芽芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在28℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照12小时，光照强度为2500lx，培养温度为28℃的条件下培养至生根，生根率为80%。所述的生根培养基为：1/2MS+0.5mg/L NAA+1.5mg/L GGR+15g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.8。
（5）炼苗移栽：将步骤（4）获得的高约7～9cm、生长健壮、根系粗壮、叶色浓绿的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗3天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土:沙土＝3:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田，小苗移栽后选择透光率为80%的遮阴处理，移栽成活率为88%以上。
Claims (4)
1.一种大花朱顶红组培快繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）外植体消毒：选取健壮的大花朱顶红‘Red lion’鳞茎为外植体，用自来水冲净表面，将鳞茎去除叶片及外层膜质磷片，切去种球顶部四分之一及根部，然后用流水下冲洗1～3h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒5～30s后用无菌水洗3～5次，再用0.1%升汞溶液消毒1～10min，用无菌水冲洗4～6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用；
（2）芽诱导培养：将步骤（1）处理后的鳞茎剥去外层鳞片，用无菌滤纸吸干水分，纵向分切鳞片，每层鳞片切成长5～6mm，宽3～4mm的切块并接种到诱导培养基上,先在25～28℃条件下全暗培养7～10天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为1500～3000lx，直至诱导形成丛生芽；
（3）增殖培养：将步骤（2）培养获得的丛生芽长至约2.5～3.5cm时分切至增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养7～10天，然后置于每天光照12～16小时，光照强度为1500～2500lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养，多次反复切割进行继代培养，得到丛生芽；
（4）生根培养：将步骤（2）或（3）过程获得的高度约为3.5～4.5cm的丛生芽芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养3～7天，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为2000～3000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根；
（5）炼苗移栽：将步骤（4）获得的高约7～9cm、生长健壮、根系粗壮、叶色浓绿的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗3～5天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土:沙土＝3:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度，待幼苗成活后再移栽大田，小苗移栽后选择透光率为60%～80%的遮阴处理。
2.根据权利要求1所述的一种大花朱顶红组培快繁殖方法，其特征在于步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+1～6mg/L6-BA+0.5～3mg/L NAA+0.1～1mg/L VB1+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
3.根据权利要求1所述的一种大花朱顶红组培快繁殖方法，其特征在于步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+0.1～1mg/L NAA+1～4mg/L 6-BA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
4.根据权利要求1所述的一种大花朱顶红组培快繁殖方法，其特征在于步骤（4）所述的生根培养基为：1/2MS+0.1～2mg/L NAA+1～3mg/L GGR+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
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