CN104719154A - 一种苍术组培快繁方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种苍术组培快繁方法，人工栽培品种混杂且长期无性繁殖造成的品种退化、病害严重、产量下降等诸多问题。植物组织培养具有繁殖快、花费少、增殖系数高等特点，本发明以带芽茎段为外植体，经过诱导、增殖、生根以及炼苗移栽等步骤建立了苍术组织培养快繁体系，不仅能扩大种苗繁殖速度和规模，还可以在此基础上选育出高产优质的苍术新品种，增加种植苍术的经济效益，对于缓解苍术供不应求的现实问题、保护野生苍术资源具有重要的意义。

Description

一种苍术组培快繁方法
技术领域
    本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种苍术组培快繁方法。
背景技术
苍术（Atractylodes lancea）属于菊科苍术属,为多年生、宿根草本植物。苍术主要分布于江苏、湖北、安徽、浙江、江西、河南等地，苍术主要用于治疗湿阴脾胃、食欲不振、消化不良、寒湿吐泻、胃腹胀满、、水肿等症状。2003年“非典”之后，中药材苍术逐渐受到药厂、药市、药商等重视，苍术的需求量急剧增加,但却出现了有价无市的局面。目前,国内市场的苍术需求主要依靠野生苍术，但自然界中的野生苍术资源随着人类的不断采挖及环境的恶化而不断减少,加上国家加大了对野生药材的保护,野生苍术资源己经不能满足国内外市场的需求，因此人工栽培苍术成为了一条来扩大苍术资源的重要途径。
自然界中野生苍术以有性繁殖为主，主要靠昆虫传授花粉,行异花授粉,但自然授粉结实率较低，因此限制了苍术自然种群数量的扩大。人工栽培苍术主要通过无性繁殖方式满足生产用种。但在栽培过程中,长期进行的无性育种导致的苍术药用价值退化、病害加重及产量下降等问题，再加上苍术属于易变异品种,品种繁多,使得人工栽培的苍术品种严重混杂,质量参差不齐。目前,如何解决苍术种源并提高品种抗性,扩大苍术种植规模是苍术人工栽培中急需解决的实际问题，但是传统的繁殖方法存在繁殖系数不高、生长周期长、品种退化等问题,限制了快速繁殖及新品种选育等工作。而离体培养可弥补传统繁殖方法的不足,在较短时期内扩大繁殖优良品种,并能利用遗传转化技术在短期内培育新品种。因此，苍术离体再生体系的建立，对于缓解苍术供不应求的现实问题、保护野生苍术资源具有重要的意义。
发明内容
    本发明的目的在于提供出一种苍术组培快繁方法，本发明以带芽茎段为外植体，经过诱导、增殖、生根以及炼苗移栽等步骤建立了建立了苍术组织培养快繁体系，从而实现了本发明的目的。
 本发明的一种苍术组培快繁方法，包括以下的步骤：
（1）诱导培养：采集回来的茎段以淸水洗去表面附着物后,洗衣液浸泡5～15min,然后流水冲洗1～3h，在超净工作台中用70%～80%乙醇溶液中消毒10～30s，后用无菌水洗3～5次，再用0.1%～0.3%升汞溶液消毒10～25min，用无菌水冲洗4～6次后用无菌滤纸吸去水分后接种到诱导培养基中进行芽诱导培养。接种后先在25～28℃条件下全暗培养7～14天，然后置于每天光照12～16小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成不定芽。
   （2）增殖培养：将步骤（1）培养得到的芽苗，从基部切取芽并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养2～3天，然后置于每天光照12～16小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养，30天继代一次。
   （3）生根培养：将步骤（1）或（2）的芽苗长至3～4cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养2～3天，然后置于每天光照14～16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根。
（4）炼苗移栽：将高约5～6cm的生根试管苗的培养瓶盖半开在自然条件下放置炼苗3～5天，再全开瓶盖加入适量的自来水并置于自然光照下炼苗5～7天，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:大田土:黄沙泥=2:2:1混合成的基质中,于每天光照10～12小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为25～28℃，空气湿度为80%～90%的培养箱中培养5～7天，然后移栽定植于大田中。
    上述步骤（1）所述的诱导培养基为：MS+1.0～3.0mg/L 6-BA+0.1～1.0mg/L NAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
    上述步骤（2）所述的增殖培养基为：MS+0.1～1.0mg/L 6-BA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
上述步骤（3）所述的生根培养基为：1/2MS+1.0～2.0mg/L GGR +0.1～0.5mg/L IBA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
本发明的优点是，苍术（Atractylodes lancea）需求量逐年增加，但苍术存在天然资源不足、人工栽培品种混杂且长期无性繁殖造成的品种退化、病害严重、产量下降等诸多问题。植物组织培养具有繁殖快、花费少、增殖系数高等特点，本发明以带芽茎段为外植体，经过诱导、增殖、生根以及炼苗移栽等步骤建立了建立了苍术组织培养快繁体系，不仅能扩大种苗繁殖速度和规模,还可以在此基础上选育出高产优质的苍术新品种,增加种植苍术的经济效益,对于缓解苍术供不应求的现实问题、保护野生苍术资源具有重要的意义。
具体实施方式
    以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
    实施例1：
    （1）诱导培养：采集回来的茎段以淸水洗去表面附着物后,洗衣服液浸泡5min,然后流水冲洗1h，在超净工作台中用75%乙醇溶液中消毒10s，后用无菌水洗3次，再用0.1%升汞溶液消毒10min，用无菌水冲洗4次后用无菌滤纸吸去水分后接种到诱导培养基中进行芽诱导培养。接种后先在25℃条件下全暗培养7天，然后置于每天光照12小时，光照强度为2000lx，置于培养温度为25℃的条件下培养25天即可分化出不定芽，45天后即生出不定芽，诱导率为83.62%。所述的诱导培养基为：MS+1.0mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA+20g/L蔗糖+4.0g/L琼脂，pH为5.5。
   （2）增殖培养：将步骤（1）培养得到的芽苗，从基部切取芽并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25℃条件下全暗培养2天，然后置于每天光照12小时，光照强度为2000lx，置于培养温度为25℃的条件下培养12天即可分化出新芽，30天继代一次，增殖系数为5.84。所述的增殖培养基为：MS+0.5mg/L 6-BA+18g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.5。
   （3）生根培养：将步骤（1）或（2）的芽苗长至3～4cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在28℃条件下全暗培养2天，然后置于每天光照14小时，光照强度为3500lx，培养温度为28℃的条件下培养32天即可生根，生根率为95.36%，平均生根条数为 6.53条。所述的生根培养基为：1/2MS+1.2mg/L GGR +0.4mg/L IBA+28g/L蔗糖+5.5g/L琼脂，pH为5.5。
（4）炼苗移栽：将高约5～6cm的生根试管苗的培养瓶盖半开在自然条件下放置炼苗3天，再全开瓶盖加入适量的自来水并置于自然光照下炼苗5天，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:大田土:黄沙泥=2:2:1混合成的基质中,于每天光照10小时，光照强度为3000lx，培养温度为25℃，空气湿度为80%的培养箱中培养5天，然后移栽定植于大田中，移栽成活率为92.89%。
实施例2：
   （1）诱导培养：采集回来的茎段以淸水洗去表面附着物后,洗衣服液浸泡8min,然后流水冲洗3h，在超净工作台中用75%乙醇溶液中消毒30s，后用无菌水洗5次，再用0.1%升汞溶液消毒15min，用无菌水冲洗6次后用无菌滤纸吸去水分后接种到诱导培养基中进行芽诱导培养。接种后先在28℃条件下全暗培养10天，然后置于每天光照14小时，光照强度为3000lx，置于培养温度为28℃的条件下培养21天即可分化出不定芽，38天后即生出不定芽，诱导率为87.93%。所述的诱导培养基为：MS+3.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+25g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.8。
   （2）增殖培养：将步骤（1）培养得到的芽苗，从基部切取芽并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在28℃条件下全暗培养4天，然后置于每天光照14小时，光照强度为2500lx，置于培养温度为28℃的条件下培养14天即可分化出新芽，30天继代一次，增殖系数为5.53。所述的增殖培养基为：MS+1.0mg/L 6-BA+20g/L蔗糖+4.8g/L琼脂，pH为5.8。
   （3）生根培养：将步骤（1）或（2）的芽苗长至3～4cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25℃条件下全暗培养2天，然后置于每天光照14小时，光照强度为3000lx，培养温度为25℃的条件下培养30天即可生根，生根率为94.15%，平均生根条数为 7.5条。所述的生根培养基为：1/2MS+1.0mg/L GGR +0.3mg/L IBA+26g/L蔗糖+5.5g/L琼脂，pH为5.5。
（4）炼苗移栽：将高约5～6cm的生根试管苗的培养瓶盖半开在自然条件下放置炼苗3天，再全开瓶盖加入适量的自来水并置于自然光照下炼苗5天，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:大田土:黄沙泥=2:2:1混合成的基质中,于每天光照12小时，光照强度为3500lx，培养温度为28℃，空气湿度为90%的培养箱中培养7天，然后移栽定植于大田中，移栽成活率为95%。

Claims (4)

1.一种苍术组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）诱导培养：采集回来的茎段以清水洗去表面附着物后,洗衣液浸泡5～15min,然后流水冲洗1～3h，在超净工作台中用70%～80%乙醇溶液中消毒10～30s，后用无菌水洗3～5次，再用0.1%～0.3%升汞溶液消毒10～25min，用无菌水冲洗4～6次后用无菌滤纸吸去水分后接种到诱导培养基中进行芽诱导培养,接种后先在25～28℃条件下全暗培养7～14天，然后置于每天光照12～16小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成不定芽;
   （2）增殖培养：将步骤（1）培养得到的芽苗，从基部切取芽并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养2～3天，然后置于每天光照12～16小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养，30天继代一次;
   （3）生根培养：将步骤（1）或（2）的芽苗长至3～4cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养2～3天，然后置于每天光照14～16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根;
（4）炼苗移栽：将高约5～6cm的生根试管苗的培养瓶盖半开在自然条件下放置炼苗3～5天，再全开瓶盖加入适量的自来水并置于自然光照下炼苗5～7天，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:大田土:黄沙泥=2:2:1混合成的基质中,于每天光照10～12小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为25～28℃，空气湿度为80%～90%的培养箱中培养5～7天，然后移栽定植于大田中。
2.   根据权利要求1所述的一种苍术组培快繁方法，其特征在于步骤（1）所述的诱导培养基为：MS+1.0～3.0mg/L 6-BA+0.1～1.0mg/L NAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
3.  根据权利要求1所述的一种苍术组培快繁方法，其特征在于步骤（2）所述的增殖培养基为：MS+0.1～1.0mg/L 6-BA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
4.根据权利要求1所述的一种苍术组培快繁方法，其特征在于步骤（3）所述的生根培养基为：1/2MS+1.0～2.0mg/L GGR +0.1～0.5mg/L IBA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
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