CN115281085A - 北苍术组织培养繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种北苍术组织培养繁殖方法，包括如下步骤：提供无菌且无病毒的北苍术嫩茎；将所述北苍术嫩茎剪切成单芽茎段，并且将所述单芽茎段转移到诱导培养基上，进行丛生芽诱导培养；将所述诱导培养后得到的丛生芽分离为丛生芽单株，将所述丛生芽单株转移到增殖培养基上，进行丛生芽增殖培养；筛选所述增殖培养后得到的北苍术无根苗转移到生根培养基中，进行无根苗生根培养；筛选所述生根培养后得到的已生根的北苍术幼苗。这种北苍术组织培养繁殖方法通过对北苍术嫩茎的单芽茎段进行丛生芽诱导培养、丛生芽增殖培养和无根苗生根培养，可以得到大量的已生根的北苍术幼苗，从而可以实现北苍术的快速繁殖。
Description
技术领域
本发明涉及种子保存技术领域，尤其是涉及一种北苍术组织培养繁殖方法。
背景技术
苍术是常用的中药之一，它的需求量大，具有祛风散寒、燥湿健脾和明目的功效。苍术有北苍术和南苍术(茅苍术)之分。
北苍术为雌花两性花异株(gynodiecy)植物，即分别包括两性花和单性雌株两类花序且异株，北苍术单性雌株的结实率显著高于两性花株，雌花株结实率虽显著高于两性花株，但无胚种子在两类花株所结种子中占比均≥70％，自然结实率极低，并且北苍术种子常温保存时间仅为半年，这一现象对北苍术野生资源有性繁殖造成极大障碍。
随着市场对于北苍术的需求量日益增加，供需缺口逐年加大，市场前景良好。为了能够提供优质的北苍术药材，现在亟需一种可以对北苍术进行快速繁殖的方法。
发明内容
基于此，有必要提供一种可以对北苍术进行快速繁殖的北苍术组织培养繁殖方法。
一种北苍术组织培养繁殖方法，包括如下步骤：
提供无菌且无病毒的北苍术嫩茎；
将所述北苍术嫩茎剪切成单芽茎段，并且将所述单芽茎段转移到诱导培养基上，进行丛生芽诱导培养，其中，所述诱导培养基包括MS培养基、1mg/L～4mg/L的6-BA、0.15mg/L～0.5mg/L的NAA、20g/L～50g/L的蔗糖以及4g/L～9g/L的琼脂，所述诱导培养基的pH值为5.8～6.0，所述诱导培养的过程中，培养温度为22℃～28℃，光照强度为2800lx～3200lx，光照时间为11h/d～13h/d，培养时间为28d～35d；
将所述诱导培养后得到的丛生芽分离为丛生芽单株，将所述丛生芽单株转移到增殖培养基上，进行丛生芽增殖培养，其中，所述增殖培养基包括MS培养基、1mg/L～4mg/L的6-BA、0.15mg/L～0.5mg/L的NAA、20g/L～50g/L的蔗糖以及4g/L～9g/L的琼脂，所述增殖培养的过程中，培养温度为22℃～28℃，光照强度为2800lx～3200lx，光照时间为11h/d～13h/d，每40d继代一次；
筛选所述增殖培养后得到的苗茎超过2mm且苗高超过3cm的北苍术无根苗转移到生根培养基中，进行无根苗生根培养，其中，所述生根培养基包括1/2MS培养基、0.3wt％～0.8wt％的活性炭、20g/L～50g/L的蔗糖以及4g/L～9g/L的琼脂，所述生根培养基的pH值为5.8～6.0，所述生根培养的过程中，培养温度为22℃～28℃，光照强度为2800lx～3200lx，光照时间为11h/d～13h/d，培养时间为28d～42d；
筛选所述生根培养后得到的苗茎超过4mm、苗高超过5cm且已生根的北苍术幼苗。
在一个实施例中，所述提供无菌且无病毒的北苍术嫩茎通过如下操作获得：
提供北苍术种子，清洗干净后流水冲洗2h，接着继续浸泡1h～2h，接着在无菌条件下依次进行如下操作：用75％的乙醇浸泡消毒30s，用无菌水冲洗5次，然后用0.1％的升汞溶液浸泡消毒12min，用无菌水冲洗5次，将所述北苍术种子转移到发芽培养基进行发芽培养，将所述发芽培养获得的无菌且无病毒的幼苗剪去叶片根系，得到所需要的无菌且无病毒的所述北苍术嫩茎，其中，所述发芽培养基包括MS培养基、20g/L～50g/L的蔗糖以及4g/L～9g/L的琼脂，所述发芽培养基的pH值为5.8～6.0，所述发芽培养的过程中，培养温度为22℃～28℃，光照强度为1800lx～2200lx，光照时间为11h/d～13h/d，培养时间为28d～35d。
在一个实施例中，所述发芽培养基包括MS培养基、30g/L的蔗糖以及6g/L的琼脂，所述发芽培养的过程中，培养温度为25℃，光照强度为2000lx，光照时间为12h/d，培养时间为30d。
在一个实施例中，所述诱导培养基包括MS培养基、2mg/L的6-BA、0.25mg/L的NAA、30g/L的蔗糖以及6g/L的琼脂，所述诱导培养的过程中，培养温度为25℃，光照强度为3000lx，光照时间为12h/d，培养时间为30d。
在一个实施例中，所述增殖培养基包括MS培养基、2mg/L的6-BA、0.25mg/L的NAA、30g/L的蔗糖以及6g/L的琼脂，所述增殖培养的过程中，培养温度为25℃，光照强度为3000lx，光照时间为12h/d。
在一个实施例中，所述生根培养基包括1/2MS培养基、0.5wt％的活性炭、30g/L的蔗糖以及6g/L的琼脂，所述生根培养的过程中，培养温度为25℃，光照强度为3000lx，光照时间为12h/d，培养时间为30d。
在一个实施例中，所述诱导培养、所述增殖培养以及所述生根培养均为置于培养瓶内封闭培养。
在一个实施例中，还包括在筛选所述生根培养后得到的苗茎超过4mm、苗高超过5cm且已生根的北苍术幼苗的操作之后的如下操作：
将苗茎超过4mm、苗高超过5cm且已生根的所述北苍术幼苗在所述培养瓶的瓶盖打开的状态下，放置于15～20℃、自然光照条件下的培养室内炼苗6d～8d，接着取出所述北苍术幼苗，清洗干净后定植，并温室培养至成活。
在一个实施例中，所述温室培养的过程中，温室室内温度白天20℃～25℃，夜间15℃～20℃，初始光照度为日光的1/10，其后每3天增加10％，湿度开始3d为饱和湿度，其后每3d降低10％，直至与环境湿度相同。
在一个实施例中，所述定植的操作中，培养基质为质量比为3：1：1的草炭、蛭石和珍珠岩；
所述温室培养的操作中，每隔7d～10d轮换喷一次800倍～1000倍杀菌剂溶液，并且移栽一周后，用1/2MS大量元素的水溶液作为追肥，每周一次。
这种北苍术组织培养繁殖方法通过对北苍术嫩茎的单芽茎段进行丛生芽诱导培养、丛生芽增殖培养和无根苗生根培养，可以得到大量的已生根的北苍术幼苗，从而可以实现北苍术的快速繁殖。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
其中：
图1为一实施方式的北苍术组织培养繁殖方法的制备方法的流程图。
图2为实施例1中诱导产生的丛生芽的照片。
图3为实施例1中生根培养产生的北苍术幼苗的照片。
图4为实施例1中生根培养产生的北苍术幼苗的根部的照片。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
如图1所示的一实施方式的北苍术组织培养繁殖方法，包括如下步骤：
S10、提供无菌且无病毒的北苍术嫩茎。
优选的，提供无菌且无病毒的北苍术嫩茎通过如下操作获得：提供北苍术种子，清洗干净后流水冲洗2h，接着继续浸泡1h～2h，接着在无菌条件下依次进行如下操作：用75％的乙醇浸泡消毒30s，用无菌水冲洗5次，然后用0.1％的升汞溶液浸泡消毒12min，用无菌水冲洗5次，将北苍术种子转移到发芽培养基进行发芽培养，将发芽培养获得的无菌且无病毒的幼苗剪去叶片根系，得到所需要的无菌且无病毒的北苍术嫩茎。
北苍术种子应当选择饱满无病虫害的北苍术种子。
发芽培养基包括MS培养基、20g/L～50g/L的蔗糖以及4g/L～9g/L的琼脂，发芽培养基的pH值为5.8～6.0，发芽培养的过程中，培养温度为22℃～28℃，光照强度为1800lx～2200lx，光照时间为11h/d～13h/d，培养时间为28d～35d。
具体来说，发芽培养基包括MS培养基、30g/L的蔗糖以及5g/L的琼脂，发芽培养的过程中，培养温度为22℃～28℃，光照强度为2000lx，光照时间为12h/d，培养时间为30d。
本发明中，无特别说明的情况，对于北苍术种子、嫩茎、幼苗等的处理均在超净工作台上。
本发明中，发芽培养、诱导培养、增殖培养以及生根培养均为置于培养瓶内封闭培养。
S20、将S10得到的北苍术嫩茎剪切成单芽茎段，并且将单芽茎段转移到诱导培养基上，进行丛生芽诱导培养。
诱导培养基包括MS培养基、1mg/L～4mg/L的6-BA(6-苄氨基腺嘌呤、细胞分裂素)、0.15mg/L～0.5mg/L的NAA(萘乙酸，1-Naphthaleneacetic acid)、20g/L～50g/L的蔗糖以及4g/L～9g/L的琼脂，诱导培养基的pH值为5.8～6.0，诱导培养的过程中，培养温度为22℃～28℃，光照强度为2800lx～3200lx，光照时间为11h/d～13h/d，培养时间为28d～35d。
为了促进腋芽的伸长，诱导培养基中加入1mg/L～4mg/L的6-BA和0.15mg/L～0.5mg/L的NAA。
具体来说，诱导培养基包括MS培养基、2mg/L的6-BA、0.25mg/L的NAA、30g/L的蔗糖以及6g/L的琼脂，诱导培养的过程中，培养温度为25℃，光照强度为3000lx，光照时间为12h/d，培养时间为30d。
S30、将S20中诱导培养后得到的丛生芽分离为丛生芽单株，将丛生芽单株转移到增殖培养基上，进行丛生芽增殖培养。
丛生芽增殖培养的目的为：不断分化产生新的丛生苗。
增殖培养基包括MS培养基、1mg/L～4mg/L的6-BA、0.15mg/L～0.5mg/L的NAA、20g/L～50g/L的蔗糖以及4g/L～9g/L的琼脂，增殖培养基的pH值为5.8～6.0，增殖培养的过程中，培养温度为22℃～28℃，光照强度为2800lx～3200lx，光照时间为11h/d～13h/d，每40d继代一次。
为了促进丛生芽单株的增殖，增殖培养基中加入1mg/L～4mg/L的6-BA、0.15mg/L～0.5mg/L的NAA。
具体来说，增殖培养基包括MS培养基、2mg/L的6-BA、0.25mg/L的NAA、30g/L的蔗糖以及6g/L的琼脂，增殖培养的过程中，培养温度为25℃，光照强度为3000lx，光照时间为12h/d。
需要指出的是，S30步骤可以根据需要的北苍术幼苗的数量，选择重复次数。即，为扩大繁殖系数，可反复切割芽体进行多次继代培养，以便获得更多的丛生芽。
S40、筛选S30中增殖培养后得到的苗茎超过2mm且苗高超过3cm的北苍术无根苗转移到生根培养基中，进行无根苗生根培养。
生根培养基包括1/2MS培养基、0.3wt％～0.8wt％的活性炭、20g/L～50g/L的蔗糖以及4g/L～9g/L的琼脂，生根培养基的pH值为5.8～6.0，生根培养的过程中，培养温度为22℃～28℃，光照强度为2800lx～3200lx，光照时间为11h/d～13h/d，培养时间为28d～42d。
为了对根部辅以黑暗条件保护根顶端产生的IAA，生根培养基中加入0.3wt％～0.8wt％的活性炭。
具体来说，生根培养基包括1/2MS培养基、0.5wt％的活性炭、30g/L的蔗糖以及6g/L的琼脂，生根培养的过程中，培养温度为25℃，光照强度为3000lx，光照时间为12h/d，培养时间为30d。
S50、筛选S40中生根培养后得到的苗茎超过4mm、苗高超过5cm且已生根的北苍术幼苗。
优选的，北苍术组织培养繁殖方法还包括在筛选生根培养后得到的苗茎超过4mm、苗高超过5cm且已生根的北苍术幼苗的操作之后的如下操作：将苗茎超过4mm、苗高超过5cm且已生根的北苍术幼苗在培养瓶的瓶盖打开的状态下，放置于15～20℃、自然光照条件下的培养室内炼苗6d～8d，接着取出北苍术幼苗，清洗干净后定植，并温室培养至成活。
温室培养的过程中，温室室内温度白天20℃～25℃，夜间15℃～20℃，初始光照度为日光的1/10，其后每3天增加10％，湿度开始3d为饱和湿度，其后每3d降低10％，直至与环境湿度相同。
具体来说，定植的操作中，培养基质为质量比为3：1：1的草炭、蛭石和珍珠岩。
具体来说，温室培养的操作中，每隔7d～10d轮换喷一次800倍～1000倍杀菌剂溶液，并且移栽一周后，用1/2MS大量元素的水溶液作为追肥，每周一次。
具体来说，杀菌剂为多菌灵或百菌清。
这种北苍术组织培养繁殖方法通过对北苍术嫩茎的单芽茎段进行丛生芽诱导培养、丛生芽增殖培养和无根苗生根培养，可以得到大量的已生根的北苍术幼苗，从而可以实现北苍术的快速繁殖。
以下为具体实施例。
实施例1
(1)无病毒体系的获得：选择饱满无病虫的北苍术种子，清洗干净，流水冲洗2h后，继续浸泡1.5h，置于超净工作台中，用75％的乙醇浸泡消毒30s，用无菌水冲洗5次，然后用0.1％的升汞溶液浸泡消毒12min，再用无菌水冲洗5次，接种在MS+30g/L蔗糖+6g/L的琼脂培养基上进行培养。培养基pH值为5.8～6.0，培养温度为25℃，光照强度2000lx，光照时间12小时/天，于无菌培养室培养30天，获得无菌、无病毒幼苗。
(2)外植体的处理及接种：将步骤(1)获得的无菌、无病毒幼苗剪去叶片根系保留嫩茎，剪成单芽茎段接种在MS+2mg/L 6-BA+0.25mg/L NAA+30g/L蔗糖+6g/L的琼脂培养基上，进行丛生芽诱导。培养温度为25℃，光照强度3000lx，时间12小时/天，培养25天。
图2为诱导产生的丛生芽的照片，由图2可以看出，诱导产生的丛生芽生长良好。
(3)继代培养：在超净工作台上将诱导产生的丛生芽切下分离为单株，转入MS+2mg/L 6-BA+0.25mg/L NAA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂的增殖培养基进行增殖培养。培养温度为25℃，光照强度3000lx，时间12小时/天。
(4)壮苗生根培养：将步骤(3)得到生长健壮、苗高在3.0cm以上的无根苗接种到1/2MS+0.5％活性炭+30g/L蔗糖+6g/L琼脂的生根培养基上进行生根培养，培养温度为25℃，光照强度3000lx，时间12小时/天。
图3和图4为生根培养产生的北苍术幼苗的照片，由图3和图4可以看出，生根培养产生的北苍术幼苗生长良好，并且已经长出了根部。
(5)炼苗移栽：挑选苗高达5cm以上、生长健壮、已生根的北苍术幼苗打开瓶盖放置于15～20℃、自然光照条件下的培养室内炼苗一周，期间注意保持湿度防止植株萎蔫；移栽时将试管苗从培养瓶内取出，用清水洗净根部培养基，定植于苗钵或穴盘中，栽培基质采用质量比为3：1：1的草炭、蛭石和珍珠岩，并且温室培养至成活。培养期间每隔8天轮换喷一次杀菌剂(多菌灵)预防病菌危害。移栽一周后，用1/2MS大量元素的水溶液作为追肥，加快组培苗的生长与。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对申请专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种北苍术组织培养繁殖方法，其特征在于，包括如下步骤：
提供无菌且无病毒的北苍术嫩茎；
将所述北苍术嫩茎剪切成单芽茎段，并且将所述单芽茎段转移到诱导培养基上，进行丛生芽诱导培养，其中，所述诱导培养基包括MS培养基、1mg/L～4mg/L的6-BA、0.15mg/L～0.5mg/L的NAA、20g/L～50g/L的蔗糖以及4g/L～9g/L的琼脂，所述诱导培养基的pH值为5.8～6.0，所述诱导培养的过程中，培养温度为22℃～28℃，光照强度为2800lx～3200lx，光照时间为11h/d～13h/d，培养时间为28d～35d；
将所述诱导培养后得到的丛生芽分离为丛生芽单株，将所述丛生芽单株转移到增殖培养基上，进行丛生芽增殖培养，其中，所述增殖培养基包括MS培养基、1mg/L～4mg/L的6-BA、0.15mg/L～0.5mg/L的NAA、20g/L～50g/L的蔗糖以及4g/L～9g/L的琼脂，所述增殖培养的过程中，培养温度为22℃～28℃，光照强度为2800lx～3200lx，光照时间为11h/d～13h/d，每40d继代一次；
筛选所述增殖培养后得到的苗茎超过2mm且苗高超过3cm的北苍术无根苗转移到生根培养基中，进行无根苗生根培养，其中，所述生根培养基包括1/2MS培养基、0.3wt％～0.8wt％的活性炭、20g/L～50g/L的蔗糖以及4g/L～9g/L的琼脂，所述生根培养基的pH值为5.8～6.0，所述生根培养的过程中，培养温度为22℃～28℃，光照强度为2800lx～3200lx，光照时间为11h/d～13h/d，培养时间为28d～42d；
筛选所述生根培养后得到的苗茎超过4mm、苗高超过5cm且已生根的北苍术幼苗。
2.根据权利要求1所述的北苍术组织培养繁殖方法，其特征在于，所述提供无菌且无病毒的北苍术嫩茎通过如下操作获得：
提供北苍术种子，清洗干净后流水冲洗2h，接着继续浸泡1h～2h，接着在无菌条件下依次进行如下操作：用75％的乙醇浸泡消毒30s，用无菌水冲洗5次，然后用0.1％的升汞溶液浸泡消毒12min，用无菌水冲洗5次，将所述北苍术种子转移到发芽培养基进行发芽培养，将所述发芽培养获得的无菌且无病毒的幼苗剪去叶片根系，得到所需要的无菌且无病毒的所述北苍术嫩茎，其中，所述发芽培养基包括MS培养基、20g/L～50g/L的蔗糖以及4g/L～9g/L的琼脂，所述发芽培养基的pH值为5.8～6.0，所述发芽培养的过程中，培养温度为22℃～28℃，光照强度为1800lx～2200lx，光照时间为11h/d～13h/d，培养时间为28d～35d。
3.根据权利要求2所述的北苍术组织培养繁殖方法，其特征在于，所述发芽培养基包括MS培养基、30g/L的蔗糖以及6g/L的琼脂，所述发芽培养的过程中，培养温度为25℃，光照强度为2000lx，光照时间为12h/d，培养时间为30d。
4.根据权利要求1所述的北苍术组织培养繁殖方法，其特征在于，所述诱导培养基包括MS培养基、2mg/L的6-BA、0.25mg/L的NAA、30g/L的蔗糖以及6g/L的琼脂，所述诱导培养的过程中，培养温度为25℃，光照强度为3000lx，光照时间为12h/d，培养时间为30d。
5.根据权利要求1所述的北苍术组织培养繁殖方法，其特征在于，所述增殖培养基包括MS培养基、2mg/L的6-BA、0.25mg/L的NAA、30g/L的蔗糖以及6g/L的琼脂，所述增殖培养的过程中，培养温度为25℃，光照强度为3000lx，光照时间为12h/d。
6.根据权利要求1所述的北苍术组织培养繁殖方法，其特征在于，所述生根培养基包括1/2MS培养基、0.5wt％的活性炭、30g/L的蔗糖以及6g/L的琼脂，所述生根培养的过程中，培养温度为25℃，光照强度为3000lx，光照时间为12h/d，培养时间为30d。
7.根据权利要求1～6中任意一项所述的北苍术组织培养繁殖方法，其特征在于，所述诱导培养、所述增殖培养以及所述生根培养均为置于培养瓶内封闭培养。
8.根据权利要求7所述的北苍术组织培养繁殖方法，其特征在于，还包括在筛选所述生根培养后得到的苗茎超过4mm、苗高超过5cm且已生根的北苍术幼苗的操作之后的如下操作：
将苗茎超过4mm、苗高超过5cm且已生根的所述北苍术幼苗在所述培养瓶的瓶盖打开的状态下，放置于15～20℃、自然光照条件下的培养室内炼苗6d～8d，接着取出所述北苍术幼苗，清洗干净后定植，并温室培养至成活。
9.根据权利要求8所述的北苍术组织培养繁殖方法，其特征在于，所述温室培养的过程中，温室室内温度白天20℃～25℃，夜间15℃～20℃，初始光照度为日光的1/10，其后每3天增加10％，湿度开始3d为饱和湿度，其后每3d降低10％，直至与环境湿度相同。
10.根据权利要求8所述的北苍术组织培养繁殖方法，其特征在于，所述定植的操作中，培养基质为质量比为3：1：1的草炭、蛭石和珍珠岩；
所述温室培养的操作中，每隔7d～10d轮换喷一次800倍～1000倍杀菌剂溶液，并且移栽一周后，用1/2MS大量元素的水溶液作为追肥，每周一次。
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Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1653889A (zh) * | 2005-02-25 | 2005-08-17 | 江苏大学 | 茅苍术组培繁殖的种质保存方法 |
| CN104719154A (zh) * | 2015-03-05 | 2015-06-24 | 罗焕荣 | 一种苍术组培快繁方法 |
| CN105104211A (zh) * | 2015-10-10 | 2015-12-02 | 山西省农业科学院作物科学研究所 | 北苍术组织培养与快速繁殖方法 |
| CN105993956A (zh) * | 2016-06-14 | 2016-10-12 | 江苏茅山地道中药材种植有限公司 | 一种茅苍术快速繁殖方法 |
| CN106359088A (zh) * | 2016-08-28 | 2017-02-01 | 李志勇 | 一种苍术组织培养方法 |
-
2022
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Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1653889A (zh) * | 2005-02-25 | 2005-08-17 | 江苏大学 | 茅苍术组培繁殖的种质保存方法 |
| CN104719154A (zh) * | 2015-03-05 | 2015-06-24 | 罗焕荣 | 一种苍术组培快繁方法 |
| CN105104211A (zh) * | 2015-10-10 | 2015-12-02 | 山西省农业科学院作物科学研究所 | 北苍术组织培养与快速繁殖方法 |
| CN105993956A (zh) * | 2016-06-14 | 2016-10-12 | 江苏茅山地道中药材种植有限公司 | 一种茅苍术快速繁殖方法 |
| CN106359088A (zh) * | 2016-08-28 | 2017-02-01 | 李志勇 | 一种苍术组织培养方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 巢建国等: "茅苍术快速繁殖", 《中药材》 * |
| 李亮杰等: "茅苍术组培快繁技术研究", 《安徽农学通报》 * |
| 李西腾等: "茅苍术的组织培养和快速繁殖", 《广西热带农业》 * |
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