CN106359088A - 一种苍术组织培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种苍术组织培养方法，特征是苍术通过植物组织培养技术短时间内快速获得大量苍术优良品种试管苗的方法。本发明以苍术茎尖为外植体，经过外植体消毒、启动培养、增殖培养、壮苗培养、生根培养、炼苗及移栽等过程有效地提高了芽的诱导率、继代系数及生根率，进而建立了完整的苍术组织培养体系。

Description

一种苍术组织培养方法
技术领域
本发明涉及到苍术种苗繁殖技术领域，特征是一种苍术组织培养方法。
背景技术
苍术又名茅苍术、北苍术、亦术、南苍术。形态特征是多年生草本，地下根茎结节状圆柱形或疙瘩块状，直径1~4厘米，表面灰术色或黑棕色。茎直立，高30~80厘米，有稀疏的蛛丝状孔或无孔，叶互生，中下部茎叶长8~12厘米，宽5~8厘米，大头羽状深裂或半裂，侧裂片1~4对，楕圆形，长楕圆形或倒卵状长楕圆形，宽0.5~2厘米，顶裂片宽1.5~4.5厘米，上部叶基部有1~2对三角形刺齿裂，全部叶无毛，质地硬，边缘有针刺状毛或三角形刺齿。6~10月开花，花白色或紫兰色，组成头状花序单生于枝顶；总苞直径约1.5厘米，总苞片针刺状羽状全裂或深裂，全部为管状花，果实有毛，顶端有刚毛冠毛，长约8毫米，基部连合成环。根于春秋挖为准，晒干备用。生长环境，我国北方地区及有广泛分布。多生于山地、涝丛、草丛、岩缝，林下等地。性味功效，味辛、苦、性温。健脾燥湿，祛风寒等。由于苍术用药部位以块根为主，其野生资源已处于严重衰竭状态，受人为破坏严重。目前苍术繁育方法远远不能满足大规模生产对苍术种苗的需要。而植物组织培养技术具有加速育种进程、缩短繁殖时间、改良植物品质、节省空间、减少劳动、可终年生产、不受自然条件限制等特点，可有效解决苍术种苗繁殖耗时长、繁殖系数低的问题。目前虽然有关于苍术组织培养研究报道，但都存在外植体消毒困难、易产生内生细菌、繁殖系数低等问题，而本发明具有简便、经济、可操作性高等特点，并有效地提高了芽的诱导率、继代系数及生根率，为其大规模工厂化生产奠定基础。
发明内容
本发明的目的在于提供一种苍术组织培养方法，本发明以苍术茎尖为外植体，经过外植体消毒、启动培养、增殖培养、壮苗培养、生根培养、炼苗及移栽等过程有效地提高了芽的诱导率、继代系数及生根率，进而建立了完整的苍术组织培养体系，从而实现了本发明的目的。
本发明的技术解决方案是这样的，一种苍术组织培养方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）外植体消毒：取健壮苍术当年生的茎尖，刷洗干净后，用洗衣粉溶液浸泡11min后用毛刷刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗4h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒4.5s后用无菌水洗2.5次，再用0.1%升汞溶液消毒9min，用无菌水冲洗3次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用;
（2）启动培养：将经步骤（1）处理后的茎尖接种到启动培养基进行芽诱导，接种后先在29℃条件下全暗培养8天后统计污染率和存活率，然后每天光照9小时，光照强度为1450lx条件下培养31天，统计组培苗的萌动率及生长情况;
（3）增殖培养：将步骤（2）培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的丛生芽切下并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在24℃条件下全暗培养4天，然后每天光照9小时，光照强度为950lx，培养温度为24.5℃的条件下培养29天后观察生长情况和芽增殖情况，多次反复切割芽体进行继代培养，以得到更多的丛生芽;
（4）壮苗培养：将经步骤（3）增殖培养的丛生苗切成3cm，接种到壮苗培养基上进行壮苗培养，以利于生根，接种后先在24℃条件下全暗培养4天，然后置于每天光照10小时，光照强度为1900lx，培养温度为24℃的条件下培养至组培苗生长到3cm以上;
（5）生根培养：将步骤（2）、（3）或（4）过程获得的高度3.0cm以上的组培苗接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在24℃条件下全暗培养4天，然后置于每天光照10小时，光照强度为1900lx，培养温度为24℃的条件下培养29后统计生根情况;
（6）炼苗移栽：将步骤（5）获得的高约5cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土：珍珠岩＝5:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/4MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度 ,待幼苗成活后再移栽大田。
步骤（2）所述的启动培养基为：MS+0.1～1.1mg/L6-BA+0.1～0.6mg/L NAA+31g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.4～5.9。
步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+1.1mg/LNAA+6mg/L 6-BA+31g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.9。
步骤（4）所述的壮苗培养基为：MS+0.6mg/L 6-BA+1.1mg/L GA3+31g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.9。
步骤（5）所述的生根培养基为：1/2MS+6mg/L IBA+31g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.9。
本发明的优点是:通过植物组织培养技术短时间内快速获得大量苍术优良品种试管苗的方法。本发明以苍术茎尖为外植体，经过外植体消毒、启动培养、增殖培养、壮苗培养、生根培养、炼苗及移栽等过程有效地提高了芽的诱导率、继代系数及生根率，进而建立了完整的苍术组织培养体系。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1：
（1）外植体消毒：取健壮苍术当年生的茎尖，刷洗干净后，用洗衣粉溶液浸泡6min后用软毛刷轻轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗2h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒6s后用无菌水洗4次，再用0.2%升汞溶液消毒12min，用无菌水冲洗5次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。
（2）启动培养：将经步骤（1）处理后的茎尖接种到启动培养基进行芽诱导，接种后先在26℃条件下全暗培养5天后污染率低至5%，存活率达80%。然后每天光照12小时，光照强度为1600x条件下培养32天，组培苗的萌动率为70%。所述的启动培养基为：MS+0.6mg/L6-BA+0.2mg/L NAA+32g/L蔗糖+5g/L琼脂，pH为5.9。
（3）增殖培养：将步骤（2）培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的丛生芽切下并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在26℃条件下全暗培养2天，然后置于每天光照12小时，光照强度为1200lx，培养温度为26℃的条件下培养32天后芽增殖系数为4.9。多次反复切割芽体进行继代培养，以得到更多的丛生芽。所述的增殖培养基为：MS+0.6mg/LNAA+4mg/L 6-BA+16g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，pH为5.9。
（4）壮苗培养：将经步骤（3）增殖培养的丛生苗切成3cm，接种到壮苗培养基上进行壮苗培养，以利于生根。接种后先在26℃条件下全暗培养2天，然后置于每天光照11小时，光照强度为2200lx，培养温度为26℃的条件下培养16天组培苗即可生长到3cm以上。所述的壮苗培养基为：MS+0.4mg/L 6-BA+0.04/L GA3+16g/L蔗糖+3.8g/L琼脂，pH为5.9。
（5）生根培养：将步骤（2）、（3）或（4）过程获得的高度3cm以上的组培苗接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在26℃条件下全暗培养2天，然后置于每天光照10小时，光照强度为1800lx，培养温度为26℃的条件下培养28天后生根率达93.5%。所述的生根培养基为：1/2MS+2.5mg/L IBA+15.5g/L蔗糖+3.6g/L琼脂，pH为5.9。
（6）炼苗移栽：将步骤（5）获得的高约5.5cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗4天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土：珍珠岩＝4:1混合成的基质,光照培养箱内培养，每天以1/4MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田，移栽成活率为96%以上。
实施例2：
（1）外植体消毒：取健壮苍术当年生的茎尖，刷洗干净后，用洗衣粉溶液浸泡8min后用软毛刷轻轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗3h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒11s后用无菌水洗6次，再用0.1%升汞溶液消毒14min，用无菌水冲洗6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。
（2）启动培养：将经步骤（1）处理后的茎尖接种到启动培养基进行芽诱导，接种后先在26℃条件下全暗培养4天后污染率低至6%，存活率达82%。然后置于每天光照9小时，光照强度为1400x条件下培养29天，组培苗的萌动率为78%。所述的启动培养基为：MS+1.0mg/L6-BA+0.3mg/L NAA+29g/L蔗糖+4.0g/L琼脂，pH为5.7。
（3）增殖培养：将步骤（2）培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的丛生芽切下并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在26℃条件下全暗培养5天，然后每天光照13小时，光照强度为1450lx，培养温度为29℃的条件下培养29天后芽增殖系数5.10。多次反复切割芽体进行继代培养，以得到更多的丛生芽。所述的增殖培养基为：MS+0.25mg/LNAA+4.5mg/L 6-BA+21g/L蔗糖+4.0g/L琼脂，pH为5.7。
（4）壮苗培养：将经步骤（3）增殖培养的丛生苗切成3cm，接种到壮苗培养基上进行壮苗培养，以利于生根。接种后先在29℃条件下全暗培养3天，然后每天光照11小时，光照强度为2600lx，培养温度为26℃的条件下培养18天组培苗即可生长到3cm以上。所述的壮苗培养基为：MS+0.35mg/L 6-BA+0.15/L GA3+15.5g/L蔗糖+3.55g/L琼脂，pH为5.7。
（5）生根培养：将步骤（2）、（3）或（4）过程获得的高度3cm以上的组培苗接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在26℃条件下全暗培养2天，然后置于每天光照10小时，光照强度为2200lx，培养温度为26℃的条件下培养29天后生根率达96.5%。所述的生根培养基为：1/2MS+5mg/L IBA+19g/L蔗糖+3.8g/L琼脂，pH为5.9。
（6）炼苗移栽：将步骤（5）获得的高约5cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖自然光照下炼苗6天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土：珍珠岩＝5:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/4MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田，移栽成活率为93%以上。

Claims (5)

1.一种苍术组织培养方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤 （1）外植体消毒：取健壮苍术当年生的茎尖，刷洗干净后，用洗衣粉溶液浸泡11min后用毛刷刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗4h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒4.5s后用无菌水洗2.5次，再用0.1%升汞溶液消毒9min，用无菌水冲洗3次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用;
步骤 （2）启动培养：将经步骤（1）处理后的茎尖接种到启动培养基进行芽诱导，接种后先在29℃条件下全暗培养8天后统计污染率和存活率，然后每天光照9小时，光照强度为1450lx条件下培养31天，统计组培苗的萌动率及生长情况;
步骤 （3）增殖培养：将步骤（2）培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的丛生芽切下并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在24℃条件下全暗培养4天，然后每天光照9小时，光照强度为950lx，培养温度为24.5℃的条件下培养29天后观察生长情况和芽增殖情况，多次反复切割芽体进行继代培养，以得到更多的丛生芽;
步骤（4）壮苗培养：将经步骤（3）增殖培养的丛生苗切成3cm，接种到壮苗培养基上进行壮苗培养，以利于生根，接种后先在24℃条件下全暗培养4天，然后置于每天光照10小时，光照强度为1900lx，培养温度为24℃的条件下培养至组培苗生长到3cm以上;
步骤（5）生根培养：将步骤（2）、（3）或（4）过程获得的高度3.0cm以上的组培苗接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在24℃条件下全暗培养4天，然后置于每天光照10小时，光照强度为1900lx，培养温度为24℃的条件下培养29后统计生根情况;
步骤（6）炼苗移栽：将步骤（5）获得的高约3cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土：珍珠岩＝5:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/4MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度 ,待幼苗成活后再移栽大田。
2. 根据权利要求1所述的一种苍术组织培养方法，其特征在于步骤（2）所述的启动培养基为：MS+0.1～1.1mg/L6-BA+0.1～0.6mg/L NAA+31g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.4～5.9。
3. 根据权利要求1所述的一种苍术组织培养方法，其特征在于步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+1.1mg/LNAA+6mg/L 6-BA+31g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.9。
4. 根据权利要求1所述的一种苍术组织培养方法，其特征在于步骤（4）所述的壮苗培养基为：MS+0.6mg/L 6-BA+1.1mg/L GA3+31g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.9。
5.根据权利要求1所述的一种苍术组织培养方法，其特征在于步骤（5）所述的生根培养基为：1/2MS+6mg/L IBA+31g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.9。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108575749A (zh) * 2018-04-24 2018-09-28 镇江市德尔生物制品研究所有限公司 茅苍术无菌苗培养基及应用其的茅苍术无菌苗培养工艺
CN110226519A (zh) * 2019-07-16 2019-09-13 信阳市厚朴农业有限公司 一种茅苍术的快速繁殖方法
CN110352853A (zh) * 2019-08-26 2019-10-22 南京农业大学 一种提高茅苍术试管苗品质和移栽成活率的方法
CN115281085A (zh) * 2022-07-08 2022-11-04 内蒙古民族大学 北苍术组织培养繁殖方法
CN115316274A (zh) * 2022-08-29 2022-11-11 中国中医科学院中药研究所 一种启动培养基与一种茅苍术试管苗及其培育方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘梅萍等: ""药用植物茅苍术的组织培养"", 《现代中药研究与实践》 *
梁小敏等: ""白术茎尖的离体快繁研究"", 《安徽农业科学》 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108575749A (zh) * 2018-04-24 2018-09-28 镇江市德尔生物制品研究所有限公司 茅苍术无菌苗培养基及应用其的茅苍术无菌苗培养工艺
CN110226519A (zh) * 2019-07-16 2019-09-13 信阳市厚朴农业有限公司 一种茅苍术的快速繁殖方法
CN110352853A (zh) * 2019-08-26 2019-10-22 南京农业大学 一种提高茅苍术试管苗品质和移栽成活率的方法
CN115281085A (zh) * 2022-07-08 2022-11-04 内蒙古民族大学 北苍术组织培养繁殖方法
CN115316274A (zh) * 2022-08-29 2022-11-11 中国中医科学院中药研究所 一种启动培养基与一种茅苍术试管苗及其培育方法
CN115316274B (zh) * 2022-08-29 2023-03-14 中国中医科学院中药研究所 一种启动培养基与一种茅苍术试管苗及其培育方法

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