CN107494275A - 一种土茯苓组培快繁方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种土茯苓组培快繁方法，特征是土茯苓攀援状灌木，根茎块根状，有明显结节，着生多数须根。茎无刺。单叶互生；革质，披针形至椭圆状披针形，先端渐尖，基部圆形，全缘。7~8月开单性花，雌雄异株；伞形花序腋生，花序梗极短；花小，白色。9~10结果，浆果球形，直径6~8毫米，红色，其根茎可入药。根茎于秋季采挖，晒干或趁鲜切片晒干备用。本发明以带芽茎段为外植体，经过诱导培养、继代培养、生根以及炼苗移栽等过程成功地获得了土茯苓离体再生植株,建立了土茯苓的离体快速繁殖技术体系，为土茯苓良种快繁和规模生产发展提供了现实保障。

Description

一种土茯苓组培快繁方法
技术领域
本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种土茯苓组培快繁方法。
背景技术
土茯苓又名：草禹余粮、冷饭团、仙遗粮、过山龙、过岗龙。特是攀援状灌木。根茎块根状，有明显结节，着生多数须根。茎无刺。单叶互生；革质，披针形至椭圆状披针形，先端渐尖，基部圆形，全缘。7~8月开单性花，雌雄异株；伞形花序腋生，花序梗极短；花小，白色。9~10结果，浆果球形，直径6~8毫米，红色，其根茎可入药。根茎于秋季采挖为佳，晒干或趁鲜切片晒干备用。生长于安徽、江苏、浙江、福建、广东、湖北、四川。生于山坡、荒山及林边的半阴地。具有味甘淡，性平、无毒。除湿解毒，利关节。目前,国内市场上缺口很大,供应量非常少。因此，合理地开发利用土茯苓资源,必将产生良好的生态效益、经济效益和社会效益。目前，未见国外学者对土茯苓进行研究报道,国内在种子萌发、生物量等方面有一些零散的研究，对其无性繁殖技术研究尚未见有报道。因此,为促进土茯苓繁衍生息,建立土茯苓无性繁殖体系是很有必要的。土茯苓良种快繁和规模生产发展提供有力保障。
发明内容
本发明的目的在于提供出一种土茯苓组培快繁方法，本发明以带芽茎段为外植体，经过诱导培养、继代培养、生根以及炼苗移栽等过程成功地获得了土茯苓离体再生植株,建立了土茯苓的离体快速繁殖技术体系，从而实现了本发明的目的。具良好的生态效益、经济效益和社会效益的一种土茯苓组培快繁方法。
本发明的一种土茯苓组培快繁方法，包括以下的步骤：
（1）诱导培养：采集土茯苓优株根部当年生幼嫩萌芽条,剪取顶部茎段作为外植体,将外植体先用洗洁精浸泡4h，同时用软毛刷刷洗表面的柔毛,再用自来水冲洗6h，茎剪成1.6cm、带3个腋芽的茎段,在超净工作台上，用75%乙醇溶液中消毒35s，再用0.1%升汞浸泡25min，无菌水冲洗9次，接种至诱导培养基中进行不定芽诱,接种后置于每天光照15小时，光照强度为3200lx，置于培养温度为29℃的条件下培养直至形成不定芽;
（2）继代培养：将步骤（1）培养后长出的嫩芽从基部剪下并转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在29℃条件下全暗培养4天，然后置于每天光照16小时，光照强度为3200lx，置于培养温度为29℃的条件下培养，每21天继代一次;
（3）生根培养：将步骤（1）或（2）的芽苗长至3cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后置于每天光照17小时，光照强度为5100lx，培养温度为29℃的条件下培养至生根;
（4）炼苗移栽：将长至5cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖半打开在培养室中炼苗4天后，培养瓶瓶盖全打开在室外于自然光照下炼苗5天后将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入由泥炭土:黄泥土＝1：2混合成的基质中并移栽定植于栽药种地中，移栽2个月保持空气湿度85%以上。
步骤（1）所述的诱导培养基为：MS+8.5mg/L 6-BA+4.5mg/L NAA+31g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.9。
步骤（2）所述的增殖培养基为：MS+1.1mg/L NAA+6.1mg/L 6-BA+31g/L蔗糖+6.1g/L琼脂，pH为5.4～5.9。
步骤（4）所述的生根培养基为：1/2MS+3.1mg/L IBA+2.1mg/L ABT1+31g/L蔗糖+6.1g/L琼脂，pH为5.9。
本发明的优点是：土茯苓是一种常规种植品种，生长条件要求不高，但产量低，留种难。为促进土茯苓繁衍生息，很有必要建立土茯苓的离体快速繁殖技术体系。本发明以带芽茎段为外植体，经过诱导培养、继代培养、生根以及炼苗移栽等过程成功地获得了土茯苓离体再生植株,建立了土茯苓的离体快速繁殖技术体系技术易撑握，为土茯苓良种快繁和规模生产发展提供有力保障。集良好的生态效益、经济效益和社会效益。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1：
（1）诱导培养：采集土茯苓优株根部当年生幼嫩萌芽条,剪取顶部的茎段作为外植体。将外植体先用洗洁精浸3h,同时用软毛刷刷洗表面的柔毛,再用自来水冲洗5h，茎剪成1.6cm、带3个腋芽的茎段。在超净工作台上，用70%乙醇溶液中消毒11s，再用0.1%升汞浸泡13min，无菌水冲洗8次，接种至诱导培养基中进行不定芽诱导。接种后置于每天光照14小时，光照强度为2100lx，置于培养温度为26℃的条件下培养直至形成不定芽，诱导率为68%，所述的诱导培养基为：MS+5.5mg/L 6-BA+1.6mg/L NAA+24g/L蔗糖+4.2g/L琼脂，pH为5.8。
（2）继代培养：将步骤（1）培养后长出的嫩芽从基部剪下并转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在26℃条件下全暗培养2天，然后置于每天光照14小时，光照强度为2100lx，置于培养温度为26℃的条件下培养，每21天继代一次，增殖率为46%。所述的增殖培养基为：MS+0.2mg/L NAA+3.8mg/L 6-BA+28g/L蔗糖+4.6g/L琼脂，pH为5.5。
（3）生根培养：将步骤（1）或（2）的芽苗长至3cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后置于每天光照15小时，光照强度为3100lx，培养温度为26℃的条件下培养至生根，生根率为79%。所述的生根培养基为：1/2MS+2.6mg/L IBA+1.3mg/LABT1+31g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH为5.5。
（4）炼苗移栽：将长至5cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖半打开在培养室中炼苗2天后，培养瓶瓶盖全打开在室外于自然光照下炼苗3天后将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入由泥炭土:黄泥土＝1：2混合成的基质中并移栽定植于大田中，移栽1~2个月内保持空气湿度82%以上，移栽成活率为85%。
实施例2：
（1）诱导培养：采集土茯苓优株根部当年生幼嫩萌芽条,剪取所需要的茎段作为外植体。将外植体先用洗洁精浸泡4h,同时用软毛刷刷洗表面的柔毛,再用自来水冲洗6h，茎剪成1.6cm、带3个腋芽的茎段。在超净工作台上，用70%乙醇溶液中消毒21s，再用0.1%升汞浸泡16min，无菌水冲洗8次，接种至诱导培养基中进行不定芽诱导。接种后置于每天光照15小时，光照强度为3100lx，置于培养温度为27℃的条件下培养直至形成不定芽，诱导率为702%，所述的诱导培养基为：MS+6.5mg/L 6-BA+1.5mg/L NAA+29g/L蔗糖+4.8g/L琼脂，pH为5.9。
（2）继代培养：将步骤（1）培养后长出的嫩芽从基部剪下并转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在28℃条件下全暗培养3天，然后置于每天光照15小时，光照强度为3100lx，置于培养温度为28℃的条件下培养，每21天继代一次，增殖率为38%。所述的增殖培养基为：MS+0.65mg/L NAA+4.6mg/L 6-BA+31g/L蔗糖+4.6g/L琼脂，pH为5.5。
（3）生根培养：将步骤（1）或（2）的芽苗长至3cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后置于每天光照15小时，光照强度为4100lx，培养温度为28℃的条件下培养至生根，生根率为75%。所述的生根培养基为：1/2MS+3.5mg/L IBA+1.2mg/LABT1+31g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.5。
（4）炼苗移栽：将长至5cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖半打开在培养室中炼苗2天后，培养瓶瓶盖全打开在室外于自然光照下炼苗3天后将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入由泥炭土:黄泥土＝1：2混合成的基质中并移栽定植于栽种地中，移栽2个月保持空气湿度82%以上，移栽成活率为78%。

Claims (4)

1.一种土茯苓组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）诱导培养：采集土茯苓优株根部当年生幼嫩萌芽条,剪取顶部茎段作为外植体,将外植体先用洗洁精浸泡4h，同时用软毛刷刷洗表面的柔毛,再用自来水冲洗6h，茎剪成1.6cm、带3个腋芽的茎段,在超净工作台上，用75%乙醇溶液中消毒35s，再用0.1%升汞浸泡25min，无菌水冲洗9次，接种至诱导培养基中进行不定芽诱,接种后置于每天光照15小时，光照强度为3200lx，置于培养温度为29℃的条件下培养直至形成不定芽;
（2）继代培养：将步骤（1）培养后长出的嫩芽从基部剪下并转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在29℃条件下全暗培养4天，然后置于每天光照16小时，光照强度为3200lx，置于培养温度为29℃的条件下培养，每21天继代一次;
（3）生根培养：将步骤（1）或（2）的芽苗长至3cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后置于每天光照17小时，光照强度为5100lx，培养温度为29℃的条件下培养至生根;
（4）炼苗移栽：将长至5cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖半打开在培养室中炼苗4天后，培养瓶瓶盖全打开在室外于自然光照下炼苗5天后将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入由泥炭土:黄泥土＝1：2混合成的基质中并移栽定植于栽药种地中，移栽2个月保持空气湿度85%以上。
2.根据权利要求1所述的一种土茯苓组培快繁方法，其特征在于步骤（1）所述的诱导培养基为：MS+8.5mg/L 6-BA+4.5mg/L NAA+31g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.9。
3.根据权利要求1所述的一种土茯苓组培快繁方法，其特征在于步骤（2）所述的增殖培养基为：MS+1.1mg/L NAA+6.1mg/L 6-BA+31g/L蔗糖+6.1g/L琼脂，pH为5.4～5.9。
4.根据权利要求1所述的一种土茯苓组培快繁方法，其特征在于步骤（4）所述的生根培养基为：1/2MS+3.1mg/L IBA+2.1mg/L ABT1+31g/L蔗糖+6.1g/L琼脂，pH为5.9。
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