CN104719155A - 一种闽楠组培快繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种闽楠组培快繁方法，闽楠（Phoebe bournei）为樟科楠属常绿乔木,为我国特有的园林绿化树种和优良的珍贵用材树种,是建筑、家具、雕刻和精密木模等的珍贵材料。由于各种原因,闽楠现已处于濒危状态,为我国II级濒危树种。为促进闽楠繁衍生息，很有必要建立闽楠的离体快速繁殖技术体系。本发明以带芽茎段为外植体，经过诱导培养、继代培养、生根以及炼苗移栽等过程成功地获得了闽楠离体再生植株,建立了闽楠的离体快速繁殖技术体系，对于闽楠良种快繁和规模生产发展具有重要的现实意义。
Description
技术领域
本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种闽楠组培快繁方法。
背景技术
闽楠（Phoebe bournei）为樟科楠属常绿乔木,为我国特有的园林绿化树种和优良的珍贵用材树种,其木材切削面光滑美观，是建筑、家具、雕刻和精密木模等的珍贵材料。在古老的建筑中,如世界自然和文化保护遗产——武夷山自然保护区白岩崖壁中的闽楠船棺,其建造年代距今己有3000多年,仍保存完好不朽；北京十三陵中有两人合抱的楠木柱,经久不腐,足以见得楠木的名贵和不朽的特性。但是由于自身生物学特性、人为砍伐以及自然环境等综合因素作用,致使闽楠资源接近枯竭,已成为我国II级珍稀颜危树种，现仅有福建、江西、湖南、湖北西部、浙江南部、广东北部、贵州东部和广西等省区海拔在200～1000m的山地常绿阔叶林中有零星分布。闽楠种子和幼苗的存活经历较大的环境压力,在高湿度生境中的母树树冠下的种子不仅易受到土壤病原菌的感染,同样容易遭受动物所捕食,从而导致野外的闽楠种子发芽率和幼苗存活率较低。
楠木材质有香气,质地柔和,结构致密,切面光滑美丽,不变形,是高档家具家装上等珍贵材料。随着我国经济的不断发展和人们的生活水平不断提高,近年以致今后较长的时期内,中高档品质的装饰装修材料和家具的需求量将会越来越大。目前,国内市场上楠木缺口很大,供应量非常少。因此，合理地开发利用闽楠资源,必将产生良好的生态效益、经济效益和社会效益。目前，未见国外学者对闽楠进行研究报道,国内在种子萌发、生物量等方面有一些零散的研究，对其无性繁殖技术研究更是鲜见报道。因此,为促进闽楠繁衍生息,建立闽楠无性繁殖体系是很有必要的，同时对于闽楠良种快繁和规模生产发展也具有重要的现实意义。
发明内容
本发明的目的在于提供出一种闽楠组培快繁方法，本发明以带芽茎段为外植体，经过诱导培养、继代培养、生根以及炼苗移栽等过程成功地获得了闽楠离体再生植株,建立了闽楠的离体快速繁殖技术体系，从而实现了本发明的目的。
本发明的一种闽楠组培快繁方法，包括以下的步骤：
（1）诱导培养：采集闽楠优株根部当年生幼嫩萌芽条,剪取所需要的茎段作为外植体。将外植体先用洗洁精浸泡1～3h,同时用软毛刷刷洗表面的柔毛,再用自来水冲洗3～5h，茎剪成1.0～1.5cm、带1～2个腋芽的茎段。在超净工作台上，用70%～80%乙醇溶液中消毒10～30s，再用0.1%升汞浸泡7～20min，无菌水冲洗7～8次，接种至诱导培养基中进行不定芽诱导。接种后置于每天光照10～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成不定芽。
（2）继代培养：将步骤（1）培养后长出的嫩芽从基部剪下并转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照11～15小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养，每20天继代一次。
（3）生根培养：将步骤（1）或（2）的芽苗长至1.5～2.5cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后置于每天光照14～16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根。
（4）炼苗移栽：将长至3～4cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖半打开在培养室中炼苗1～3天后，培养瓶瓶盖全打开在室外于自然光照下炼苗2～4天后将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入由泥炭土:黄泥土＝1：1混合成的基质中并移栽定植于大田中，移栽1个月内保持空气湿度80%以上。
上述步骤（1）所述的诱导培养基为：MS+2.0～8.0mg/L 6-BA+1.0～4.0mg/L NAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
上述步骤（2）所述的增殖培养基为：MS+0.1～1.0mg/L NAA+2.0～6.0mg/L 6-BA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
上述步骤（3）所述的生根培养基为：1/2MS+1.0～3.0mg/L IBA+1.0～2.0mg/L ABT1+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
本发明的优点是：闽楠（Phoebe bournei）为樟科楠属常绿乔木,为我国特有的园林绿化树种和优良的珍贵用材树种,是建筑、家具、雕刻和精密木模等的珍贵材料。由于各种原因,闽楠现已处于濒危状态,为我国II级濒危树种。为促进闽楠繁衍生息，很有必要建立闽楠的离体快速繁殖技术体系。本发明以带芽茎段为外植体，经过诱导培养、继代培养、生根以及炼苗移栽等过程成功地获得了闽楠离体再生植株,建立了闽楠的离体快速繁殖技术体系，对于闽楠良种快繁和规模生产发展具有重要的现实意义。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1
（1）诱导培养：采集闽楠优株根部当年生幼嫩萌芽条,剪取所需要的茎段作为外植体。将外植体先用洗洁精浸泡2h,同时用软毛刷刷洗表面的柔毛,再用自来水冲洗4h，茎剪成1.0～1.5cm、带1～2个腋芽的茎段。在超净工作台上，用70%乙醇溶液中消毒10s，再用0.1%升汞浸泡12min，无菌水冲洗7次，接种至诱导培养基中进行不定芽诱导。接种后置于每天光照13小时，光照强度为2000lx，置于培养温度为25℃的条件下培养直至形成不定芽，诱导率为67.8%，所述的诱导培养基为：MS+5.5mg/L 6-BA+1.5mg/L NAA+23g/L蔗糖+4.1g/L琼脂，pH为5.6。
（2）继代培养：将步骤（1）培养后长出的嫩芽从基部剪下并转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在25℃条件下全暗培养1天，然后置于每天光照13小时，光照强度为2000lx，置于培养温度为25℃的条件下培养，每20天继代一次，增殖率为45%。所述的增殖培养基为：MS+0.1mg/L NAA+3.6mg/L 6-BA+26g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.4。
（3）生根培养：将步骤（1）或（2）的芽苗长至1.5～2.5cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后置于每天光照14小时，光照强度为3000lx，培养温度为25℃的条件下培养至生根，生根率为78%。所述的生根培养基为：1/2MS+2.5mg/L IBA+1.2mg/L ABT1+30g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.4。
（4）炼苗移栽：将长至3～4cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖半打开在培养室中炼苗1天后，培养瓶瓶盖全打开在室外于自然光照下炼苗2天后将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入由泥炭土:黄泥土＝1：1混合成的基质中并移栽定植于大田中，移栽1个月内保持空气湿度80%以上，移栽成活率为81.3%。
实施例2
（1）诱导培养：采集闽楠优株根部当年生幼嫩萌芽条,剪取所需要的茎段作为外植体。将外植体先用洗洁精浸泡3h,同时用软毛刷刷洗表面的柔毛,再用自来水冲洗5h，茎剪成1.0～1.5cm、带1～2个腋芽的茎段。在超净工作台上，用70%乙醇溶液中消毒20s，再用0.1%升汞浸泡15min，无菌水冲洗7次，接种至诱导培养基中进行不定芽诱导。接种后置于每天光照14小时，光照强度为3000lx，置于培养温度为26℃的条件下培养直至形成不定芽，诱导率为70.1%，所述的诱导培养基为：MS+6.0mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA+28g/L蔗糖+4.7g/L琼脂，pH为5.8。
（2）继代培养：将步骤（1）培养后长出的嫩芽从基部剪下并转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在27℃条件下全暗培养2天，然后置于每天光照14小时，光照强度为3000lx，置于培养温度为27℃的条件下培养，每20天继代一次，增殖率为37%。所述的增殖培养基为：MS+0.6mg/L NAA+4.5mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.4。
（3）生根培养：将步骤（1）或（2）的芽苗长至1.5～2.5cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后置于每天光照15小时，光照强度为4000lx，培养温度为27℃的条件下培养至生根，生根率为73.7%。所述的生根培养基为：1/2MS+3.0mg/L IBA+1.0mg/L ABT1+30g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.4。
（4）炼苗移栽：将长至3～4cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖半打开在培养室中炼苗1天后，培养瓶瓶盖全打开在室外于自然光照下炼苗2天后将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入由泥炭土:黄泥土＝1：1混合成的基质中并移栽定植于大田中，移栽1个月内保持空气湿度80%以上，移栽成活率为76.9%。
Claims (4)
1.一种闽楠组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）诱导培养：采集闽楠优株根部当年生幼嫩萌芽条,剪取所需要的茎段作为外植体,将外植体先用洗洁精浸泡1～3h,同时用软毛刷刷洗表面的柔毛,再用自来水冲洗3～5h，茎剪成1.0～1.5cm、带1～2个腋芽的茎段,在超净工作台上，用70%～80%乙醇溶液中消毒10～30s，再用0.1%升汞浸泡7～20min，无菌水冲洗7～8次，接种至诱导培养基中进行不定芽诱,接种后置于每天光照10～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成不定芽;
（2）继代培养：将步骤（1）培养后长出的嫩芽从基部剪下并转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照11～15小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养，每20天继代一次;
（3）生根培养：将步骤（1）或（2）的芽苗长至1.5～2.5cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后置于每天光照14～16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根;
（4）炼苗移栽：将长至3～4cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖半打开在培养室中炼苗1～3天后，培养瓶瓶盖全打开在室外于自然光照下炼苗2～4天后将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入由泥炭土:黄泥土＝1：1混合成的基质中并移栽定植于大田中，移栽1个月内保持空气湿度80%以上。
2.根据权利要求1所述的一种闽楠组培快繁方法，其特征在于步骤（1）所述的诱导培养基为：MS+2.0～8.0mg/L 6-BA+1.0～4.0mg/L NAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
3.根据权利要求1所述的一种闽楠组培快繁方法，其特征在于步骤（2）所述的增殖培养基为：MS+0.1～1.0mg/L NAA+2.0～6.0mg/L 6-BA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
4.根据权利要求1所述的一种闽楠组培快繁方法，其特征在于步骤（4）所述的生根培养基为：1/2MS+1.0～3.0mg/L IBA+1.0～2.0mg/L ABT1+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
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