CN104719153A - 一种毛竹组织培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种毛竹组织培养方法，毛竹（Phyllostachys Pubescens）又名楠竹，属于禾本科刚竹属植物，是集经济效益、生态功能和观赏价值于一身的竹种，具有生长快、繁殖强、成材早、用途广、投资少、收益大等特点。组织培养育苗具有繁殖快、花费少、增殖系数高等特点。本发明以毛竹种子为外植体，经过种子消毒、诱导、增殖、生根以及炼苗移栽等步骤建立了毛竹组织培养快繁技术体系，为毛竹组培的进一步工厂化育苗提供技术支撑,并为毛竹的遗传转化和品种改良等奠定基础。
Description
技术领域
本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种毛竹组织培养方法。
背景技术
毛竹（Phyllostachys Pubescens）又名楠竹，属于禾本科刚竹属植物，是一种大型的多年生常绿散生竹类，具有生长快、繁殖强、成材早、用途广、投资少、收益大等特点。我国是毛竹的中心分布区之一，素有“东亚文明及竹子文明”之称，主要分布于长江以南,南岭以北,戴云山以西,武陵山以东。毛竹林在创造生态环境佳境的同时,在农业建设中占据重要的地位,在国民经济中也占有一定的比例。毛竹利用及应用遍及各行各业，主要在农村和农业用竹、手工业用竹、建筑业用竹、造纸业用竹、竹等加工利用等方面，而且“以竹代木”,“以竹代塑”等正为解决我国资源紧缺提供了广阔的前景,具有深远的战略意义。因此，发展竹林是发展林业的重大措施,也是山区致富的重要途径。
毛竹是集经济效益、生态功能和观赏价值于一身的竹种,产生着巨大的社会、经济和生态价值。传统的毛竹繁殖方式主要以埋鞭、埋秆、埋节等无性繁殖方式为主,但传统无性繁殖方法取材比较困难、繁殖系数不高、成本难以控制在较低水平,难以满足当前生产的需要。组织培养育苗具有繁殖快、花费少、增殖系数高等特点。竹子组织培养技术体系的建立，有助于竹子的快速繁殖,转基因培育优质竹种等研究，并有望实现毛竹产业化的发展。
发明内容
本发明的目的在于提供出一种毛竹组织培养方法，本发明以毛竹种子为外植体，经过种子消毒、诱导、增殖、生根以及炼苗移栽等步骤建立了建立了毛竹组织培养快繁技术体系，从而实现了本发明的目的。
本发明的一种毛竹组织培养方法，包括以下的步骤：
（1）种子萌发：采集回来的种子在通风阴凉处干燥后置于4℃的冰箱中密封保存备用。去掉种子的外稃,选择颗粒饱满,色泽明亮的完整种子并去掉毛尖。淸水洗去表面附着物后,洗衣服液浸泡5～15min,然后流水冲洗1～3h。于30～40℃中浸种10～18h后，在超净工作台中用4%～8%次氯酸钠溶液中消毒10～30min，后用无菌水洗3～5次，再用0.1%～0.3%升汞溶液消毒10～25min，用无菌水冲洗4～6次后用无菌滤纸吸去水分后以平放方式接种到种子萌发培养基中进行诱导培养。接种后先在25～28℃条件下全暗培养7～14天，然后置于每天光照12～16小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成丛生芽。
（2）增殖培养：将步骤（1）培养得到的小苗，从基部切取芽并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照12～16小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养，30天继代一次。
（3）生根培养：将步骤（1）或（2）的丛生芽长至3～4cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照14～16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根。
（4）炼苗移栽：将高约5～6cm的生根试管苗的培养瓶盖半开炼苗3～5天，再全开瓶盖加入适量的自来水并置于自然光照下炼苗5～7天，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:黄沙泥=2:1混合成的基质中并定植于大田中。
上述步骤（1）所述的萌发培养基为：MS+1.0～3.0mg/L 6-BA+2.0～6.0mg/LTDZ+4.0～8mg/LGA3+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
上述步骤（2）所述的增殖培养基为：MS+0.1～1.0mg/L 6-BA+1.0～3.0mg/LTDZ+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
上述步骤（3）所述的生根培养基为：1/2MS+1.0～5.0mg/L GGR +1.0～3.0g/L GA3+0.1～0.5mg/L IBA+1.0～5.0mg/L La(NO3)3+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
本发明的优点是：毛竹（Phyllostachys Pubescens）又名楠竹，属于禾本科刚竹属植物，是集经济效益、生态功能和观赏价值于一身的竹种，具有生长快、繁殖强、成材早、用途广、投资少、收益大等特点。组织培养育苗具有繁殖快、花费少、增殖系数高等特点。本发明以毛竹种子为外植体，经过种子消毒、诱导、增殖、生根以及炼苗移栽等步骤建立了建立了毛竹组织培养快繁技术体系，为毛竹组培的进一步工厂化育苗提供技术支撑,并为毛竹的遗传转化和品种改良等奠定基础。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1：
（1）种子萌发：采集回来的种子在通风阴凉处干燥后置于4℃的冰箱中密封保存备用。去掉种子的外稃,选择颗粒饱满,色泽明亮的完整种子并去掉毛尖。淸水洗去表面附着物后,洗衣服液浸泡5min,然后流水冲洗1h。于30℃中浸种10h后，在超净工作台中用4%次氯酸钠溶液中消毒10min，后用无菌水洗3次，再用0.1%升汞溶液消毒10min，用无菌水冲洗4次后用无菌滤纸吸去水分后以平放方式接种到种子萌发培养基中进行诱导培养。接种后先在25℃条件下全暗培养7天，然后置于每天光照14小时，光照强度为3000lx，置于培养温度为25℃的条件下培养直至形成丛生芽，诱导率90%。所述的萌发培养基为：MS+1.0mg/L 6-BA+4.0mg/LTDZ+4.0mg/LGA3+23g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，pH为5.6。
（2）增殖培养：将步骤（1）培养得到的小苗，从基部切取芽并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25℃条件下全暗培养1天，然后置于每天光照12小时，光照强度为2000lx，置于培养温度为25℃的条件下培养，30天继代一次，增殖系数为5.8。所述的增殖培养基为：MS+0.6mg/L 6-BA+1.5mg/LTDZ+30g/L蔗糖+4.2g/L琼脂，pH为5.6。
（3）生根培养：将步骤（1）或（2）的丛生芽长至3～4cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25℃条件下全暗培养1天，然后置于每天光照14小时，光照强度为3000lx，培养温度为25℃的条件下培养至生根，生根率为78.9%。所述的生根培养基为：1/2MS+3.2mg/L GGR +1.4g/L GA3+0.3mg/L IBA+3.5mg/L La(NO3)3+18g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.6。
（4）炼苗移栽：将高约5～6cm的生根试管苗的培养瓶盖半开炼苗3天，再全开瓶盖加入适量的自来水并置于自然光照下炼苗6天，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:黄沙泥=2:1混合成的基质中并定植于大田中，移栽成活率为91%。
实施例2：
（1）种子萌发：采集回来的种子在通风阴凉处干燥后置于4℃的冰箱中密封保存备用。去掉种子的外稃,选择颗粒饱满,色泽明亮的完整种子并去掉毛尖。清水洗去表面附着物后,洗衣服液浸泡10min,然后流水冲洗3h。于30℃中浸种10h后，在超净工作台中用4%次氯酸钠溶液中消毒20min，后用无菌水洗5次，再用0.2%升汞溶液消毒15min，用无菌水冲洗5次后用无菌滤纸吸去水分后以平放方式接种到种子萌发培养基中进行诱导培养。接种后先在28℃条件下全暗培养12天，然后置于每天光照14小时，光照强度为3500lx，置于培养温度为28℃的条件下培养直至形成丛生芽，诱导率84%。所述的萌发培养基为：MS+1.5mg/L 6-BA+6.0mg/LTDZ+5.0mg/LGA3+20g/L蔗糖+4.0g/L琼脂，pH为5.8。
（2）增殖培养：将步骤（1）培养得到的小苗，从基部切取芽并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在28℃条件下全暗培养3天，然后置于每天光照14小时，光照强度为3000lx，置于培养温度为28℃的条件下培养，30天继代一次，增殖系数为5.3。所述的增殖培养基为：MS+1.0mg/L 6-BA+2.5mg/LTDZ+30g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.8。
（3）生根培养：将步骤（1）或（2）的丛生芽长至3～4cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在28℃条件下全暗培养1天，然后置于每天光照15小时，光照强度为4000lx，培养温度为28℃的条件下培养至生根，生根率为80.9%。所述的生根培养基为：1/2MS+3.5mg/L GGR +2.0g/L GA3+0.5mg/L IBA+5.0mg/L La(NO3)3+20g/L蔗糖+4.7g/L琼脂，pH为5.8。
（4）炼苗移栽：将高约5～6cm的生根试管苗的培养瓶盖半开炼苗3天，再全开瓶盖加入适量的自来水并置于自然光照下炼苗5天，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:黄沙泥=2:1混合成的基质中并定植于大田中，移栽成活率为90.5%。
Claims (4)
1.一种毛竹组织培养方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）种子萌发：采集回来的种子在通风阴凉处干燥后置于4℃的冰箱中密封保存备用,去掉种子的外稃,选择颗粒饱满,色泽明亮的完整种子并去掉毛尖,淸水洗去表面附着物后,洗衣液浸泡5～15min,然后流水冲洗1～3h,于30～40℃中浸种10～18h后，在超净工作台中用4%～8%次氯酸钠溶液中消毒10～30min，后用无菌水洗3～5次，再用0.1%～0.3%升汞溶液消毒10～25min，用无菌水冲洗4～6次后用无菌滤纸吸去水分后以平放方式接种到种子萌发培养基中进行诱导培养,接种后先在25～28℃条件下全暗培养7～14天，然后置于每天光照12～16小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成丛生芽;
（2）增殖培养：将步骤（1）培养得到的小苗，从基部切取芽并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照12～16小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养，30天继代一次;
（3）生根培养：将步骤（1）或（2）的丛生芽长至3～4cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照14～16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根一种毛竹组织培养方法；
（4）炼苗移栽：将高约5～6cm的生根试管苗的培养瓶盖半开炼苗3～5天，再全开瓶盖加入适量的自来水并置于自然光照下炼苗5～7天，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:黄沙泥=2:1混合成的基质中并定植于大田中。
2.根据权利要求1所述的一种毛竹组织培养方法，其特征在于步骤（1）所述的萌发培养基为：MS+1.0～3.0mg/L 6-BA+2.0～6.0mg/LTDZ+4.0～8mg/LGA3+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
3.根据权利要求1所述的一种毛竹组织培养方法，其特征在于步骤（2）所述的增殖培养基为：MS+0.1～1.0mg/L 6-BA+1.0～3.0mg/LTDZ+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
4.根据权利要求1所述的一种毛竹组织培养方法，其特征在于步骤（3）所述的生根培养基为：1/2MS+1.0～5.0mg/L GGR +1.0～3.0g/L GA3+0.1～0.5mg/L IBA+1.0～5.0mg/L La(NO3)3+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
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