CN105028209A

CN105028209A - 一种提高兔眼蓝莓组培苗生根的方法

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Publication number: CN105028209A
Application number: CN201510525827.9A
Authority: CN
Inventors: 吴文龙; 王小敏; 胡淑英; 闾连飞; 李维林
Original assignee: Institute of Botany of CAS
Current assignee: Institute of Botany of CAS
Priority date: 2015-08-26
Filing date: 2015-08-26
Publication date: 2015-11-11
Anticipated expiration: 2035-08-26
Also published as: CN105028209B

Abstract

本发明涉及一种促进兔眼蓝莓组培苗生根的方法。其特征在于：采用初代培养、继代增殖获得的兔眼蓝莓优质不定芽为材料，在以蛭石为基质、添加适宜浓度NAA的1/2WPM培养基上诱导生根，诱导培养40~60天，生根率可以达到95%以上，单株生根数超过20条，根长2.0~3.0cm，且生根苗生长健壮，移栽成活率高，缓苗期短。本发明选用节本高效的生根基质，采用常规的组培条件，使兔眼蓝莓组培苗的生根率提高了34.7%，移栽成活率提高了60.3%，解决了目前生产上兔眼蓝莓组培苗生根率低、移栽困难等问题，为兔眼蓝莓优良品种种苗生产提供了优质高效的繁殖方法，也可为其他类型蓝莓组培育苗提供参考。

Description

一种提高兔眼蓝莓组培苗生根的方法

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体为提高兔眼蓝莓组培苗生根率的方法。

背景技术

蓝莓（Vacciniumspp.）属杜鹃花科（Ericaceae）越桔属多年生落叶或常绿灌木果树，又称蓝浆果或越桔。蓝莓作为第三代新兴小果类果树的重要成员，深受国内外广大消费者的喜爱，近年来在我国发展迅猛。兔眼蓝莓是适合我国南方种植的主要蓝莓类型，目前在江苏、浙江、江西、贵州等我国中南部地区都有栽培。适合北方种植的高丛蓝莓多采用组培方法培育种苗，而兔眼蓝莓基本都是依靠夏季嫩枝扦插育苗，虽然也有一些报道称利用组培方法能够获得兔眼蓝莓苗，但市场上很难见到，究其原因是在常规组培方法中兔眼蓝莓组培苗生根困难。为了克服兔眼蓝莓组培苗生根困难的问题，有许多学者开展了一些研究，但对其组培苗生根基质研究尚未见详细报道。我们在常规固体培养基中诱导蓝莓组培苗生根的实验中发现，组培苗在贴近培养基表层的位置容易分化出不定根。鉴于此发现和蓝莓对透气性需求高的特点，通过几种基质的对比研究，我们最终采用了通透性好、利于养分运输的蛭石作为培养基质，辅以激素处理，结果发现兔眼蓝莓组培苗的生根率大大提高，从而解决了兔眼蓝莓组培苗生根困难的问题。

本发明突破了传统技术中利用常规固体培养基诱导生根的方法，以蛭石为培养基质联合激素处理进行兔眼蓝莓组培苗的生根诱导，方法易于掌握，瓶内生根率较传统方法提高了34.7%，移栽成活率提高了60.3%，且苗木健壮，移栽缓苗期短，大大提高了育苗效率，为兔眼蓝莓工厂化育苗提供了技术保证。

发明内容

发明目的：本发明的目的是针对兔眼蓝莓组培苗在常规固体培养基上生根率低的问题，提供一种利用低成本生根基质（蛭石），辅以激素处理，提高兔眼蓝莓组培苗生根率和移栽成活率，为兔眼蓝莓规模化生产提供快速生产优质种苗的方法。

具体内容：

（1）初代培养与继代增殖。5~10月晴天上午10点左右，剪取兔眼蓝莓当年生未木质化或半木质化的幼嫩枝条作为外植体，接种到WPM+ZT0.5mg/L的培养基上进行初代培养，培养30天后，将不定芽从基部切下，分成单一的不定芽，接种到WPM+ZT1.0mg/L培养基中进行继代培养，45天转接一次，连续继代培养2~5次，获得充足的优质不定芽材料。

（2）生根诱导。选择继代培养的健壮的不定芽，接种到以蛭石为基质、添加0.15~0.25mg/L浓度NAA的1/2WPM培养基中，培养40~50天。兔眼蓝莓组培苗的平均生根率可以达到95%左右，单株生根数可以达到20条以上，根长2~3cm，且苗木健壮。

（3）移栽。将生根的试管苗在组培室打开瓶盖炼苗7天，然后移栽到装有基质（泥炭土：蛭石：河沙=4:3:2）的穴盘中，移栽后的前半个月注意保湿与遮阳，然后逐渐通风、增加光照，一个月后可以追施速效有机肥。在较好的管理条件下，兔眼蓝莓移栽成活率可以达到90%以上，且缓苗时间短，苗木生长快而健壮，如春天炼苗移栽，第二年春天即可用于大田种植。

（4）培养条件。初代培养、继代增殖、生根诱导的培养条件为：温度（25±3）℃，光照度（1500~2000）lx，光照时间（12~14）h/d。

（5）WPM培养基。无机盐：NH₄N0₃400mg/L，Ca(NO₃)₂.4H₂O556mg/L，K₂SO₄990mg/L，CaCl₂·2H₂O96mg/L，KH₂PO₄170mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O0.25mg/L，MgSO₄·7H₂O370mg/L，MnSO₄·H₂O22.4mg/L，ZnSO₄·7H₂O8.6mg/L，CuSO₄·5H₂O0.25mg/L，FeSO₄·7H₂O27.8mg/L，Na₂-EDTA37.3mg/L；有机物：肌醇100mg/L，维生素B₁1.0mg/L，烟酸0.5mg/L，维生素B₆0.5mg/L，甘氨酸2.0mg/L，蔗糖20g/L，琼脂6g/L（1/2WPM中为0g/L），pH5.2~5.5。

本发明的技术方案是瓶外获取兔眼蓝莓茎段作为外植体，瓶内诱导产生不定芽，通过初代培养、继代增殖获得大量不定芽，选用健壮的不定芽，以蛭石为基质，以1/2WPM为基本培养基，添加一定浓度的生长素，在组培条件下进行不定芽生根诱导，获得健壮的组培苗，最后再经炼苗、移栽，培育出符合生产需要的兔眼蓝莓优质种苗。由实施案例三可知，本发明方法的兔眼蓝莓苗生根率可达97.2%，生根数25.4条，平均根长2.4cm；由实施案例四可知，本发明方法的兔眼蓝莓组培苗移栽成活率达到93.10%，且苗木健壮。

本发明的优点是方法简便、易于掌握、效果显著。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细说明，但实施例仅是示例性的，对本发明不构成任何限制。本领域的技术人员应该理解的是在不偏离本发明精神和范围的情况下，可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，而这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

以下实施例所采用的兔眼蓝莓栽培品种为“巨蓝（Prolific）”，如无特殊要求，所用植物组织培养的培养基的配制方法均按常规植物组织培养培养基的配制方法配制。

实施例一：不同的激素对兔眼蓝莓组培苗生根的影响

选择继代培养两次的健壮的组培不定芽，接种到以琼脂为基质、添加不同种类及浓度激素（NAA、IBA、2,4-D与NAA、IBA组合）的1/2WPM培养基上诱导生根。每处理接种30株，重复3次，45天后观察并统计试管苗生根情况。

由表1可知，添加不同浓度激素的培养基中，含NAA的培养基中组培苗的生根率、平均根长都显著高于其他激素，对蓝莓的生根效果最好，且低浓度（0.2mg/L）生根效果好于高浓度（0.5mg/L、1.0mg/L）。IBA诱导生根的效果次之，IBA作为生根诱导激素时，高浓度（0.75mg/L、1.0mg/L）较好。IAA不适合作为蓝莓生根的激素，因为在实验中发现有些植株培养一段时间就会枯死。在添加2,4-D的培养基中，不定芽叶片发红，植株矮小，根部愈伤较多，所以2,4-D也不适合用于蓝莓的生根诱导。因此，NAA最适宜作为蓝莓组培苗生根诱导的激素，且低浓度≤0.2mg/L为佳。

表1不同的激素与浓度对蓝莓组培苗生根的影响

处理	NAA	IBA	IAA	2,4-D	生根率(%)	平均生根数	平均根长(cm)	根部愈伤	不定芽长势
										1	0.2			71.4	15.2	2.2	+	健壮
2	0.5				64.2	6.5	1.7	++	健壮
										3	1			51.3	2.4	1.4	+++	健壮
4		0.5			40.1	5.1	1.5	+	矮小
										5		0.75		66.2	8.4	1.8	++	健壮
6		1			60.7	2.6	2.1	+++	健壮
										7			0.2	12.1	2.4	1.6	-	有枯死现象
8	0.2			0.2	23.8	3.3	1.7	++	叶片发红

实施例二：不同培养基质对兔眼蓝莓组培苗生根的影响

选择继代培养两次的健壮的组培不定芽，接种到以不同材料（琼脂、蛭石、河沙、泥炭土、泥炭土与蛭石以1:1比例混合）为基质、添加0.2mg/LNAA的1/2WPM培养基上诱导生根。每种基质中接种30株，重复3次，45天后观察并统计试管苗生根情况。

由表2可见，当以蛭石作为基质时，蓝莓组培苗的生根效果最好，生根率达97.4%，显著高于其他基质，平均生根数、根长也明显高于其他基质，而且组培苗植株健壮。琼脂中组培苗的生根率低于蛭石，而且根部有稍许愈伤。实验中发现，以泥炭土、河沙为基质的植株弱小，叶片发黄，不适合作为蓝莓的生根诱导基质。

表2不同培养基质对蓝莓组培苗生根的影响

处理	基质	生根率(%)	平均生根数	平均根长(cm)	根部愈伤	不定芽长势
							1	琼脂	72.3	14.7	2.3	+	健壮
2	蛭石	97.4	23.1	2.4	-	健壮
							3	泥炭土	10.1	2.3	0.7	-	叶片发黄
4	河沙	30.2	5.8	1.2	+	苗弱小
							5	泥炭土：蛭石=1:1	40.7	10.5	1.1	+	健壮

实施例三：最佳生根条件的筛选

选择继代培养两次的健壮的组培不定芽，接种到以蛭石为基质、添加不同种类及浓度激素（NAA、IBA、2,4-D与NAA、IBA组合）的1/2WPM培养基上诱导生根。每处理接种30株，重复3次，45天后观察并统计试管苗生根情况。

由表3可知，NAA的浓度为0.2mg/L的培养基中，蓝莓组培苗的生根效果最好，生根率最高，为97.2%，生根数也最多，达到25.4条，平均根长2.4cm，远好于其他处理。当添加IBA0.75mg/L时，蓝莓的生根效果也比较好，仅次于NAA0.2mg/L，生根率达87.5%，平均生根数为18.8。而且发现未添加激素的处理（处理1：只添加去离子水）中，组培苗的生根率也可达40.7%，而且生根数达21.3，这说明以蛭石作为培养基质有利于组培苗生根。因此兔眼蓝莓组培苗诱导生根时以蛭石为培养基质、添加适宜浓度（0.2mg/L）的NAA至关重要。

表3蓝莓生根诱导最佳条件的筛选

处理	NAA	IBA	2-4D	生根率(%)	平均生根数	平均根长(cm)	根部愈伤	不定芽长势
									1				40.7	21.3	2.3	-	健壮
2	0.1			46.6	15.2	2.4	-	健壮
									3	0.2			97.2	25.4	2.4	-	健壮
4	0.3			76.8	17.6	2.1	+	健壮
									5	0.5			40.1	15.0	1.7	+	健壮
6		0.2		10.3	2.1	0.5	-	有枯死植株
									7		0.5		12.3	4.2	0.3	-	叶片发黄
8		0.75		87.5	18.8	1.7	-	健壮
									9	0.2		0.2	7.2	4.2	0.6	-	有枯死植株
10		0.2	0.2	2.1	2.1	0.2	-	叶片发红

实施例四：不同基质中诱导的组培生根苗移栽成活率及生长势的比较

将不同生根基质诱导的兔眼蓝莓组培生根苗，经过一周炼苗后，移栽到装有泥炭土：蛭石：河沙=4:3:2混合基质的穴盘中，在避雨大棚中进行抚育，前半个月注意遮阳、保湿，然后逐步去掉遮阳网和保湿薄膜，1个月后调查苗木成活率，3个月后测量苗木高度，并目测苗木的长势，结果见表4。

由表4可见，无论是苗木的成活率，还是苗木的生长量以及生长势，以琼脂为基质诱导的组培苗都远不及以蛭石为基质诱导的组培苗。虽然试验中琼脂基质诱导的组培苗成活率也可以达到70%以上，但在移栽时必须将根部的琼脂洗干净才能移栽到穴盘中，否则残留的琼脂极易导致植株霉烂。清洗琼脂时对会幼根造成较大损伤，导致苗木成活率低、生长缓慢。以蛭石基质诱导的组培苗，无需清洗根部的蛭石，直接移栽到林木穴盘中，降低了移栽对根部的损伤，所以苗木成活率高，较琼脂中生根苗的移栽成活率提高了60.3%，且缓苗期短，苗木生长健壮，大大提高了育苗效率。

表4不同基质兔眼蓝莓组培苗移栽成活率及苗木生长情况

生根基质	移栽数量	成活数量	成活率/%	90天苗木高度/cm	苗木长势
						琼脂	315	183	58.10	5.24±1.07	一般
蛭石	739	688	93.10	9.38±1.29	健壮

Claims

1.一种提高兔眼蓝莓组培苗生根的方法，其特征在于：以初代培养、继代增殖获得的兔眼蓝莓优质不定芽为材料，在以蛭石为基质、添加适宜浓度NAA的1/2WPM培养基中诱导生根，诱导培养40~60天，可使生根率达到95%以上，单株生根数达到20条以上，根长2~3cm，苗木健壮，移栽成活率达到90%以上，且缓苗期短。

2.权利要求1所述初代培养，其特征在于：5~10月晴天上午10点左右，剪取兔眼蓝莓当年生未木质化或半木质化的幼嫩枝条作为外植体，接种到WPM+ZT0.5mg/L的培养基上培养。

3.权利要求1所述继代增值，其特征在于：初代培养30天后，将不定芽从基部切下，分成单一的不定芽，接种到WPM+ZT1.0mg/L培养基中培养，45天转接一次，连续继代培养2~5次，获得充足的优质不定芽材料。

4.权利要求1所述生根诱导的条件，其特征在于：以蛭石为基质；以1/2WPM为基本培养基；以NAA为诱导激素，添加浓度为0.15~0.25mg/L；诱导生根培养的时间为40~60天。

5.权利要求1所述的初代培养、继代增值和生根诱导的培养条件，其特征在于：培养室温度（25±3）℃，光照度（1500~2000）lx，光照时间（12~14）h/d。