CN112753574A - 一种黑色宝塔接骨木组培苗瓶内生根的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种黑色宝塔接骨木组培苗瓶内生根的方法，包括以下步骤：S1、选取黑色宝塔接骨木继代苗；S2、将选取的继代苗转接到瓶装的生根培养基上培养；所述生根培养基为蛭石吸收1/2WPM+IBA 0.6～1.0mg/L+糖0～10g/L液体培养基后形成的固体培养基。本发明的方法采用的生根培养基为蛭石吸收液体培养基后形成的固体培养基，采用蛭石作为固体支撑，降低黑色宝塔接骨木继代苗根部环境的亮度，增加根部的有氧呼吸，降低碳源的使用，促进继代苗生根；液体培养基中采用IBA作为生长素，能够有效地提高继代苗生根率、良品率。蛭石与液体培养基配合，培养的继代苗生根率高达95％～100％，缩短生根周期，提高植物形状稳定性，且IBA可高温灭菌，适宜快速繁殖的工厂化生产体系。

Description

一种黑色宝塔接骨木组培苗瓶内生根的方法
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种黑色宝塔接骨木组培苗瓶内生根的方法。
背景技术
接骨木“黑色宝塔”由虹越花卉股份有限公司从荷兰引进的新品种。如图2、图3所示，“黑色宝塔”属于接骨木的品种之一，属小乔木，落叶对生，奇数羽状复叶，小叶有锯齿，花小，聚合成圆锥状聚伞花序，粉色或白色，适合竖向空间的瘦高柱型耐寒品种，叶片深紫色，边缘光滑，纹理精致，花朵亮粉红色。“黑色宝塔”是一款极其时尚的品种，和各种其他景观植物都能完美搭配。叶片茂密的深紫色，晚春夏初大量亮粉红色的花朵和叶片交相辉映，视觉冲击力强。秋季结美丽的黑红色浆果。茎枝(接骨木)：甘、苦、平、祛风、利湿、活血、止痛，用于风湿筋骨痛、腰痛、水肿、风疹、瘾疹、产后血晕、跌打肿痛、骨折、创伤出血。根或根皮(接骨木根)：甘、平，用于风湿关节痛、痰饮、水肿、泄泻、黄疸、跌打损伤、烫伤。叶(接骨木叶)：苦、凉、活血、行瘀、止痛，用于跌打骨折、风湿痹痛、筋骨疼痛。花(接骨木花)：用于发汗、利尿。具有观赏性的“黑色宝塔”可以作为观赏植物。现有关于黑色宝塔接骨木的培养方法并不多，若采用常规的嫁接方式，则繁殖成活率低、苗弱、抗逆性差；若采用常规的组培方法，生根难、移栽成活率低。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明提供一种本发明提供一种黑色宝塔接骨木组培苗瓶内生根的方法，黑色宝塔接骨木继代苗生根率高、生根周期短。
为了实现以上目的，本发明通过以下技术方案实现。
本发明提供一种黑色宝塔接骨木组培苗瓶内生根的方法，包括以下步骤：
S1、选取黑色宝塔接骨木继代苗；
S2、将选取的继代苗转接到瓶装的生根培养基上培养；所述生根培养基为蛭石吸收1/2WPM+IBA 0.6～1.0mg/L+糖0～10g/L液体培养基后形成的固体培养基。
优选地，所述生根培养基原料中固液体积比为1.5～3：1。
优选地，所述生根培养基原料中固液体积比为2：1。
优选地，所述蛭石用量为40～60ml。
优选地，所述生根培养基PH为5.8～6.2。
优选地，所述步骤S1具体包括：
将黑色宝塔接骨木继代苗分成单株，并按高矮分类，选取单株高度3～4cm且生长健壮、叶片舒展的黑色宝塔接骨木继代苗。
优选地，所述步骤S2的培养条件为白天24～28℃、夜间15～22℃，每天光照时间10～14h，光照强度2200～3300lx。
优选地，所述步骤S2的培养时间为7～15天。
优选地，步骤S1、步骤S2均为无菌操作。
优选地，步骤S2中，生根培养基接种继代苗前先于115℃～121℃下高温灭菌。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：
本发明提供一种黑色宝塔接骨木组培苗瓶内生根的方法，所采用的生根培养基为蛭石吸收液体培养基后形成的固体培养基，采用蛭石作为固体支撑，降低黑色宝塔接骨木继代苗根部环境的亮度，增加根部的有氧呼吸，降低碳源的使用进一步刺激根的生长，促进继代苗生根；液体培养基中采用IBA作为生长素，能够有效地提高继代苗生根率、良品率。采用蛭石与含有IBA生长素的液体培养基的混合形成的培养基，继代苗生根率高达95％～100％，缩短生根周期，提高植物形状稳定性，且IBA可高温灭菌，适宜快速繁殖的工厂化生产体系，加速了黑色宝塔接骨木的工厂化生产，可为市场提供优质的黑色宝塔接骨木种苗。
本上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。本发明的具体实施方式由以下实施例及其附图详细给出。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本申请的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1为本发明的培养方法的步骤流程图；
图2为高株黑色宝塔接骨木的外观远景图；
图3为高株黑色宝塔接骨木的外观近景图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，本发明的前述和其它目的、特征、方面和优点将变得更加明显，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。在附图中，为清晰起见，可对形状和尺寸进行放大，并将在所有图中使用相同的附图标记来指示相同或相似的部件。在下列描述中，诸如中心、厚度、高度、长度、前部、背部、后部、左边、右边、顶部、底部、上部、下部等用词为基于附图所示的方位或位置关系。特别地，“高度”相当于从顶部到底部的尺寸，“宽度”相当于从左边到右边的尺寸，“深度”相当于从前到后的尺寸。这些相对术语是为了说明方便起见并且通常并不旨在需要具体取向。涉及附接、联接等的术语(例如，“连接”和“附接”)是指这些结构通过中间结构彼此直接或间接固定或附接的关系、以及可动或刚性附接或关系，除非以其他方式明确地说明。
下面，结合附图以及具体实施方式，对本发明做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。
本发明提供一种黑色宝塔接骨木组培苗瓶内生根的方法，如图1所示，包括以下步骤：
S1、选取黑色宝塔接骨木继代苗；
具体地，黑色宝塔接骨木继代苗的培养方法包括步骤：选取生长健壮、无病虫的黑色宝塔接骨木的嫩枝条，去除叶片，清水冲洗以洗去外植体外表面附着的杂质，得外植体；在超净工作台上将外植体放入混有1～2滴吐温的0.08％～0.12％升汞溶液中消毒，消毒完用无菌水冲洗，洗净附着在外植体上的升汞溶液，用高温灭菌的镊子将外植体取出放置在无菌铝板上，切除伤口褐化部分；处理后的外植体切成2～3cm的若干段后接种到所述初代培养基上，培养5～9天；从初代培养基中选取无污染外植体并接种到所述诱导培养基上，培养至不定芽增高至2～3cm；将初代培养所得的植株分株后种入所述增殖培养基中培养；其中，初代培养基为含有蔗糖和琼脂粉的1/2MS+2-ip0.6～1.0mg/L培养基；芽诱导培养基为含有蔗糖、琼脂粉、KT、2-ip的MS培养基；增殖培养基为含有蔗糖、琼脂粉、KT、2-ip的MS培养基；进一步地，初代培养基、芽诱导培养基、增殖培养基为的蔗糖含量均为20～30g/L、琼脂含量均为4～6g/L；进一步地，芽诱导培养基中KT含量为0.5～1.5mg/L，2-ip含量为0.5～1.0mg/L；进一步地，增殖培养基中KT含量为0.5～1.5mg/L，2-ip含量为0.5～1.0mg/L；
S2、将选取的继代苗转接到瓶装的生根培养基上培养；所述生根培养基为蛭石吸收1/2WPM+IBA 0.6～1.0mg/L+糖0～10g/L液体培养基后形成的固体培养基，1/2WPM、0.6～1.0mg/L的IBA、0～10g/L的糖的混合物构成原料液体营养物质，将液态状的1/2WPM+IBA0.6～1.0mg/L+糖0～10g/L液体培养基与蛭石混合，蛭石吸收液体培养基并形成固体培养基。具体地，采用蛭石替代传统生根培养基采用的琼脂用以作为生根培养基的固体支撑，琼脂为透明状，蛭石透光弱，则与液态营养物质混合后构成的生根培养基透光率降低，为生根提供暗培养环境，增加根部的有氧呼吸，降低碳源的使用进一步刺激根的生长，有利于黑色宝塔接骨木继代苗生根。相对于萘乙酸NAA生长素，NAA对于黑色宝塔接骨木继代苗生根培养中，继代苗根系粗、须根少，移栽后不易成活；相对于吲哚乙酸IAA生长素，IAA不耐高温，后续对生根培养基进行灭菌处理时需采用滤膜过滤灭菌，工厂化生产通常采用高温蒸汽灭菌，采用IAA则不适宜工厂化生产。本发明采用吲哚丁酸IBA作为生长素，能够有效地促进继代苗主根生长，生根率、成活率高，且后续生根培养基灭菌可采用高温灭菌，操作简便、成本低，适合工厂化生产。根据继代苗培育需求，可在生根培养基中添加糖，提供继代苗生根所需碳源，还可调节生根培养基的渗透压，加快继代苗细胞对生根培养基的吸收，进而提高生根率。进一步地，糖为蔗糖。
在一实施例中，所述生根培养基原料中固液体积比为1.5～3：1，保证黑色宝塔接骨木继代苗生根所需的营养物质、激素的同时，满足继代苗根部环境的暗度。进一步地，所述生根培养基原料中固液体积比为2：1。
在一实施例中，所述蛭石用量为40～60ml。进一步地，瓶容量为240ml，根据生根培养基中固液体积比为1.5～3：1，在瓶中加入40～60ml的蛭石和相应体积用量的液体营养物质，蛭石吸收液体培养基，形成固体培养基将继代苗接种到生根培养基中，继代苗的根部固定于生根培养基中并吸收蛭石含有的液体营养物质以加快生根。进一步地，先将蛭石加入瓶内，再加入液体培养基，搅拌混合均匀，使得蛭石充分吸收液体培养基。
在一实施例中，所述生根培养基PH为5.8～6.2，以与黑色宝塔接骨木继代苗体液PH相匹配，适宜继代苗细胞分化以进行生根。
在一实施例中，所述步骤S1具体包括：
将黑色宝塔接骨木继代苗分成单株，并按高矮分类，选取单株高度3～4cm且生长健壮、叶片舒展的黑色宝塔接骨木继代苗，以提高继代苗生根率及移栽成活率。
在一实施例中，所述步骤S2的培养条件为白天24～28℃、夜间15～22℃，每天光照时间10～14h，光照强度2200～3300lx，以提供继代苗生根适宜的生长环境，加快生根。
在一实施例中，所述步骤S2的培养时间为7～15天，采用上述生根培养基，培养7～15天继代苗长出新根，生根率95％～100％。
在一实施例中，步骤S1、步骤S2均为无菌操作，步骤S1、S2中采用的工具、接触到的物件均需进行灭菌处理后再使用，以避免继代苗或接种继代苗后的生根营养基滋生微生物，阻碍了继代苗生根。其中，工具包括但不限于用以拿取继代苗的镊子、用以将继代苗分成单株的手术刀、用以操作的工作台面，其中，镊子和手术刀用完一次需进行一次灭菌，可采用高温灭菌。
在一实施例中，步骤S2中，生根培养基接种继代苗前先于115℃～121℃下高温灭菌，冷却后再使用，以避免生根培养基中存在的微生物阻碍继代苗的生根。
应当理解，1/2WPM包含NH4NO3浓度200.00mg/L、K2SO4浓度495mg/L、MgSO4.7H2O浓度185mg/L、KH2PO4浓度85mg/L、Ca(NO3)2.4H2O浓度278mg/L、CaCl2.2H2O浓度48mg/L、Na2-EDTA浓度37.3mg/L、FeSO4.7H2O浓度27.8mg/L、甘氨酸浓度2.0mg/L、VB1浓度1mg/L、VB6浓度0.5mg/L、烟酸浓度0.5mg/L、肌醇浓度100mg/L、MnSO4.H2O浓度16.9mg/L、ZnSO4.7H2O浓度8.6mg/L、H3BO4浓度6.2mg/L、CuSO4.5H2O浓度0.25mg/L、Na2MoO4.2H2O浓度0.25mg/L。
为了阐述本文的发明，以下以具体实施例进行阐述。应当理解这些实施例仅用于说明性目的并且不应被理解为以任何方式限制本发明。
实施例1
一种黑色宝塔接骨木组培苗瓶内生根的方法，包括以下步骤：
(1)在超净工作台上，将黑色宝塔接骨木继代苗分成单株，按高矮分类，选取单株高度为3cm、生长健壮、叶片舒展的黑色宝塔接骨木继代苗；
(2)在超净工作台上，将选取的继代苗转接到生根培养基上培养；所述生根培养基为蛭石吸收1/2WPM+IBA 0.6mg/L液体培养基后形成的固体培养基；其中，生根培养基PH为5.8，蛭石用量为40mL，蛭石与1/2WPM、0.6mg/L的IBA组成的液体培养基的固液体积比为1.5：1，培养15天继代苗长出根，培养条件为白天28℃、夜间22℃，每天光照时间14h，光照强度3300lx，生根率为95％。
上述步骤中采用的镊子、手术刀、铝板需经过高温灭菌，手术刀、镊子用完一次消毒一次；生根培养基经高温灭菌冷却后使用。
实施例2
一种黑色宝塔接骨木组培苗瓶内生根的方法，包括以下步骤：
(1)在超净工作台上，将黑色宝塔接骨木继代苗分成单株，按高矮分类，选取单株高度为3cm、生长健壮、叶片舒展的黑色宝塔接骨木继代苗；
(2)在超净工作台上，将选取的继代苗转接到生根培养基上培养；所述生根培养基为蛭石吸收1/2WPM+IBA 0.7mg/L+糖3g/L的液体培养基后形成的固体培养基；其中，生根培养基PH为5.9，蛭石用量为45mL，蛭石与1/2WPM、0.6mg/L的IBA组成的液体培养基的固液体积比为2：1，培养13天继代苗长出根，培养条件为白天27℃、夜间21℃，每天光照时间13h，光照强度3000lx，生根率为97％。
上述步骤中采用的镊子、手术刀、铝板需经过高温灭菌，手术刀、镊子用完一次消毒一次；生根培养基经高温灭菌冷却后使用。
实施例3
一种黑色宝塔接骨木组培苗瓶内生根的方法，包括以下步骤：
(1)在超净工作台上，将黑色宝塔接骨木继代苗分成单株，按高矮分类，选取单株高度为3cm、生长健壮、叶片舒展的黑色宝塔接骨木继代苗；
(2)在超净工作台上，将选取的继代苗转接到生根培养基上培养；所述生根培养基为蛭石吸收1/2WPM+IBA 0.8mg/L+糖5g/L的液体培养基后形成的固体培养基；其中，生根培养基PH为6.0，蛭石用量为50mL，蛭石与1/2WPM、0.6mg/L的IBA组成的液体培养基的固液体积比为2.5：1，培养11天继代苗长出根，培养条件为白天26℃、夜间20℃，每天光照时间12h，光照强度2800lx，生根率为100％。
上述步骤中采用的镊子、手术刀、铝板需经过高温灭菌，手术刀、镊子用完一次消毒一次；生根培养基经高温灭菌冷却后使用。
实施例4
一种黑色宝塔接骨木组培苗瓶内生根的方法，包括以下步骤：
(1)在超净工作台上，将黑色宝塔接骨木继代苗分成单株，按高矮分类，选取单株高度为3cm、生长健壮、叶片舒展的黑色宝塔接骨木继代苗；
(2)在超净工作台上，将选取的继代苗转接到生根培养基上培养；所述生根培养基为蛭石吸收1/2WPM+IBA 0.9mg/L+糖7g/L的液体培养基后形成的固体培养基；其中，生根培养基PH为6.1，蛭石用量为55mL，蛭石与1/2WPM、0.6mg/L的IBA组成的液体培养基的固液体积比为2.5：1，培养9天继代苗长出根，培养条件为白天25℃、夜间18℃，每天光照时间11h，光照强度2500lx，生根率为99％。
上述步骤中采用的镊子、手术刀、铝板需经过高温灭菌，手术刀、镊子用完一次消毒一次；生根培养基经高温灭菌冷却后使用。
实施例5
一种黑色宝塔接骨木组培苗瓶内生根的方法，包括以下步骤：
(1)在超净工作台上，将黑色宝塔接骨木继代苗分成单株，按高矮分类，选取单株高度为3cm、生长健壮、叶片舒展的黑色宝塔接骨木继代苗；
(2)在超净工作台上，将选取的继代苗转接到生根培养基上培养；所述生根培养基为蛭石吸收1/2WPM+IBA 1.0mg/L+糖10g/L的液体培养基后形成的固体培养基；其中，生根培养基PH为6.2，蛭石用量为60mL，蛭石与1/2WPM、0.6mg/L的IBA组成的液体培养基的固液体积比为3：1，培养7天继代苗长出根，培养条件为白天24℃、夜间15℃，每天光照时间10h，光照强度2200lx，生根率为99％。
上述步骤中采用的镊子、手术刀、铝板需经过高温灭菌，手术刀、镊子用完一次消毒一次；生根培养基经高温灭菌冷却后使用。
对比例1
操作方法与实施例1相同，对照组生根培养基中采用5g/L的琼脂替代蛭石作为固体支撑物，22天苗长出根，生根率为80％。由此可知，采用蛭石作为固体支撑物，降低了继代苗根部周围环境的亮度，有效缩短生根时间、提高生根率。
本发明相比现有技术，提供一种黑色宝塔接骨木组培苗瓶内生根的方法，有效提高黑色宝塔接骨木组培苗(继代苗)生根率及良品率高，生根率高达95％～100％。
以上，仅为本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制；凡本行业的普通技术人员均可按说明书附图所示和以上而顺畅地实施本发明；但是,凡熟悉本专业的技术人员在不脱离本发明技术方案范围内，利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时,凡依据本发明的实质技术对以上实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变等，均仍属于本发明的技术方案的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种黑色宝塔接骨木组培苗瓶内生根的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、选取黑色宝塔接骨木继代苗；
S2、将选取的继代苗转接到瓶装的生根培养基上培养；所述生根培养基为蛭石吸收1/2WPM+IBA 0.6～1.0mg/L+糖0～10g/L液体培养基后形成的固体培养基。
2.根据权利要求1所述的一种黑色宝塔接骨木组培苗瓶内生根的方法，其特征在于，所述生根培养基原料中固液体积比为1.5～3：1。
3.根据权利要求2所述的一种黑色宝塔接骨木组培苗瓶内生根的方法，其特征在于，所述生根培养基原料中固液体积比为2：1。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的一种黑色宝塔接骨木组培苗瓶内生根的方法，其特征在于，所述蛭石用量为40～60ml。
5.根据权利要求1所述的一种黑色宝塔接骨木组培苗瓶内生根的方法，其特征在于，所述生根培养基PH为5.8～6.2。
6.根据权利要求1所述的一种黑色宝塔接骨木组培苗瓶内生根的方法，其特征在于，所述步骤S1具体包括：
将黑色宝塔接骨木继代苗分成单株，并按高矮分类，选取单株高度3～4cm且生长健壮、叶片舒展的黑色宝塔接骨木继代苗。
7.根据权利要求1所述的一种黑色宝塔接骨木组培苗瓶内生根的方法，其特征在于，所述步骤S2的培养条件为白天24～28℃、夜间15～22℃，每天光照时间10～14h，光照强度2200～3300lx。
8.根据权利要求1所述的一种黑色宝塔接骨木组培苗瓶内生根的方法，其特征在于，所述步骤S2的培养时间为7～15天。
9.根据权利要求1所述的一种黑色宝塔接骨木组培苗瓶内生根的方法，其特征在于，步骤S1、步骤S2均为无菌操作。
10.根据权利要求1所述的一种黑色宝塔接骨木组培苗瓶内生根的方法，其特征在于，步骤S2中，生根培养基接种继代苗前先于115℃～121℃下高温灭菌。
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