CN103155867A - 大樱桃砧木g-7快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种大樱桃砧木G-7快速繁殖方法,它包括以下步骤:(1)无菌系建立切取大樱桃砧木G-7新梢顶端茎段接入启动分化培养基,所述培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:白砂糖10~30g、琼脂粉4~7g、6-苄氨基嘌呤0.1~0.6mg、吲哚乙酸0.1~0.3mg;(2)扩繁继代培养,接入扩繁继代培养基,所述培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:白砂糖20~30g、琼脂粉4~7g、6-苄氨基嘌呤0.2~1.0mg、吲哚乙酸0.1~0.5mg、吲哚丁酸0.1~0.5mg;(3)生根培养接入生根培养基,所述培养基为在1升1/2MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:白砂糖10~20g、琼脂粉4~7g、吲哚乙酸0.3~0.8mg、吲哚丁酸0.1~0.4mg、活性炭2~5g;(4)炼苗培养和移栽。
Description
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域,具体是一种通过植物组织培养技术繁殖大樱桃砧木G-7的方法。
背景技术
大樱桃砧木G-7(Gisela)亲本为酸樱桃×灰毛叶樱桃。该种砧木树体开张,大小仅为马扎德砧木的50%,属矮化砧。用其作甜樱桃砧木花量大,早实丰产性能高,抗寒、抗涝、抗根癌病、洋李矮缩病毒,固定性能良好,适用范围广,用其嫁接的甜樱桃结果早,产量高,是甜樱桃进行矮化密植、保护地栽培的理想砧木材料,在国内外具有广泛市场潜力。
植物组织培养方法是利用植物细胞的全能性,即组成植物的每一个细胞都具有发育成为一个完整植株的潜在能力,采取植物上的单个细胞、细胞团、分生组织或器官的一部分,通过人工配置不同营养成分和激素的培养基来培养并调控其发育,使这些细胞、组织等形成成千上万个小植株并且保持了母本植株的全部的优良性状,采用植物组织培养方法可以在短期内快速繁殖多种植物,不仅繁殖速率极高,且因为是无性繁殖,可以保持原繁殖母株的优良性状,近年来在生产上应用越来越广,这种方法可以在短时间内获得大量的组培苗,并能在人工控制条件下一年四季生产,因而可以实现种苗繁殖的工厂化生产,在较小的面积内进行大规模生产,无需占用大量土地,可以有效的降低生产成本,实现规模化生产。
在现有技术中,大樱桃砧木G-7组培苗扩繁系数低,生根困难,移栽成活率低使其一直无法实现大规模工厂化生产。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种大樱桃砧木G-7快速繁殖方法。
本发明的技术方案是:一种大樱桃砧木G-7快速繁殖方法,包括以下步骤:(1)无菌系建立切取大樱桃砧木G-7新梢顶端3~4节2~3cm长的茎段,依次用洗洁精清洗、酒精和升汞溶液消毒后,切成1.5~2cm长单芽茎段,作为外植体接入装有启动分化培养基的培养瓶,该启动分化培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:白砂糖10~30g 琼脂粉4~7g 6-苄氨基嘌呤0.1~0.6mg 吲哚乙酸0.1~0.3mg,将所述培养瓶置于培养室培养,培养条件为:温度20~26℃,湿度55~75%,光照强度2000~2500Lx,光照时间14小时/天;(2)扩繁继代培养选取步骤(1)中2~4cm长组培苗为材料,切成1.3~1.7cm长的带芽茎段接入装有扩繁继代培养基的培养瓶中培养,该扩繁继代培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:白砂糖20~30g 琼脂粉4~7g 6-苄氨基嘌呤0.2~1.0mg 吲哚乙酸0.1~0.5mg 吲哚丁酸0.1~0.5mg,培养条件为:温度22~28℃,湿度55~75%,光照强度1800~2800Lx,光照时间16小时/天;(3)生根培养选取步骤(2)中2~6cm长组培苗为材料,切成长1.6~2.0cm带顶芽或侧芽茎段接入装有生根培养基的培养瓶中培养,该生根培养基为在1升1/2MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:白砂糖10~20g 琼脂粉4~7g 吲哚乙酸0.3~0.8mg 吲哚丁酸0.1~0.4mg 活性炭2~5g,培养条件为:温度22~26℃,湿度55~75%,光照强度1800~2400Lx,光照时间12小时/天;(4)炼苗培养和移栽包括如下环节:闭瓶锻炼、开瓶锻炼、移栽到蛭石基质、移栽到由细砂石、森林土、牛粪组成的营养土中。
优选的,所述启动分化培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:白砂糖20g 琼脂粉5g 6-苄氨基嘌呤0.3mg 吲哚乙酸0.2mg;所述扩繁继代培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:白砂糖30g 琼脂粉5g 6-苄氨基嘌呤0.4mg 吲哚乙酸0.2mg 吲哚丁酸0.3mg;所述生根培养基为在1升1/2MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:白砂糖15g 琼脂粉5g 吲哚乙酸0.4mg 吲哚丁酸0.3mg 活性炭3g。
其中,在所述移栽到蛭石基质环节前将苗木在800倍多菌灵溶液中浸泡10分钟,所述细砂石、森林土、牛粪的体积比为1∶1∶0.5。
针对培养基组成及其配比与无菌系建立、扩繁继代培养、生根培养等阶段培养效果的关系或影响,发明人做了实验研究,为了进一步阐述本发明,将实验数据和研究结果分述如下:
1、不同的激素组合对初代培养成活率的影响
在MS培养基中,加入不同的6-苄胺基嘌呤(6-BA)和吲哚乙酸(IAA)进行初代培养,实验结果见表1。
表1不同激素及浓度对初代培养成活率的影响。
实验结果表明,在在MS培养基中,加入0.3mg/l 6-苄胺基嘌呤和0.2mg/l吲哚乙酸,琼脂粉5g、白砂糖20g、PH为5.6,进行初代培养,极大的提高了大樱桃G-7的初代培养成活率,可使初代培养成活率达到49%,从而赢得了时间,提高了工效、降低了成本,为工厂化生产做了铺垫。
2、不同的激素组合对扩繁系数的影响
在MS培养基中,加入不同的6-苄胺基嘌呤(6-BA)、吲哚乙酸(IAA)和吲哚丁酸(IBA),通过正交试验,取得大樱桃砧木G-7扩繁继代培养的最佳增殖培养基。
从表2、表3可以看出,大樱桃砧木G-7瓶苗在①号培养基中扩繁系数达到6.4,明显高于其它培养基,与其它处理差异极显著。④,②,⑨号培养基之间
表2试验因子与水平
表3大樱桃砧木G-7差异显著表
差异不显著但与⑦,③,⑤,⑥,⑧号培养基差异显著。⑦,③,⑤,⑥号培养基之间差异不显著。与⑧号培养基差异显著。⑧号培养基的扩繁系数最低。
本实验结果表明:大樱桃砧木G-7瓶苗的适宜培养基为处理①,即MS+BA0.4mg/l+IBA0.3mg/l+IAA0.2mg/l,琼脂粉5g,白砂糖30g,PH为5.6,其扩繁系数为6.4.本试验实施取得的试验结果为大樱桃砧木G-7的组培快繁工厂化生产提供了重要的技术依据,提高了工效、降低了成本,从而为工厂化生产和后续的苗木生根奠定了基础。
3、不同的激素组合对生根率的影响
在1/2MS培养基中,加入不同的吲哚乙酸、吲哚丁酸和活性炭进行生根培养,实验结果见表4、表5。
表4不同的激素组合对生根率的影响
4、不同活性炭的浓度对生根率的影响
在1升1/2MS+IBA0.3mg/L+IAA0.4mg/L,琼脂粉5g,白砂糖15g,PH为5.6的培养基中加入不同活性炭进行生根培养,实验结果见表5。
表5不同活性炭的浓度对生根率的影响
通过表4、表5可以看出,在1升1/2MS+IBA0.3mg/L+IAA0.4mg/L,琼脂粉5g,白砂糖15g,PH为5.6的培养基中加入3g活性炭,能有效的促进大樱桃砧木G-7的生根,苗木生根率最高可达到99%,且苗木健壮,叶色浓绿,极有利于苗木的后期移栽,可提高苗木的移栽成活率,为大樱桃砧木G-7号工厂化生产提供了有力的技术保障。
本发明的有益效果是,本发明组培步骤采用了适合大樱桃砧木G-7快速繁殖的启动分化培养基、扩繁继代培养基和生根培养培养基,初代培养成活率好,增殖系数高,生根效果好,移栽成活率使大樱桃砧木G-7初代培养成活率达到39-49%,扩繁系数达到6.4,生根率达到95%-98%,同时组培苗生长健壮,叶片舒展,叶色浓绿,根系粗壮整齐,在生产中有效地节约了人力物力,移栽成活率高,可达到96%,为工厂化生产奠定了基础。本发明组培方法具有简便易行,简化了程序,提高了工效,降到了成本等优点,适用于大樱桃G-7的快速繁殖。
具体实施方式
实施例1
一种大樱桃砧木G-7快速繁殖方法,包括以下步骤:
(1)无菌系建立
5-6月份连续晴天的早晨,用消毒的刀片,切取大樱桃砧木G-7新梢顶端3-4节的茎段,除去大叶片,剪2-3cm长,装入广口瓶内,带回实验室备用。把采来的茎段放在洗洁精1000倍稀释液中浸泡30分钟,以排除表面汽泡,充分润湿,用流水冲洗2小时,在无菌条件下,用75%的酒精浸泡10-15秒钟,用无菌水冲洗3-5次,依材料的老嫩,用0.1%升汞溶液浸泡3-8分钟,再用无菌水冲洗5-6次,然后将表面消毒后的材料置于无菌滤纸上,吸取材料上多余的水分,切去受伤药面,切成长约1.5-2cm单芽茎段,作为外植体接入启动分化培养基。该启动分化培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:
将配好的培养基分装在培养瓶中,每瓶装25毫升,盖好瓶盖,在压力为0.1-0.15MPa下灭菌20-25分钟,将灭菌好的培养基在培养室放置3天后,接入大樱桃砧木G-7处理好的外植体。转入温度为20-26℃,湿度为55-75%,光照强度为2000-2500Lx(时间14小时/天)的培养室中培养。长到20-25天后,选取2-4cm长,长势健壮的组培苗为材料,切成长1.3-1.7cm左右的带芽茎段进行扩繁继代培养。
(2)扩繁继代培养
将步骤(1)中切好的初代培养材料放入扩繁继代培养基中进行培养,所用的扩繁继代培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:
将配好的扩繁继代培养基分装在培养瓶中,每瓶装25毫升,盖好瓶盖,在压力为0.1-0.15MPa下灭菌20分钟,将灭菌好的培养基在培养室放置3天后,接入步骤(1)中切好的初代培养材料。转入温度为22-28℃,湿度为55-75%,光照强度为1800-2800Lx(时间16小时/天)的培养室中培养。30-35天后,选取2-6cm长,长势健壮,叶色浓绿的组培苗为材料,切成长1.6-2.0cm左右的带顶芽或侧芽茎段进行生根培养。
(3)生根培养
将步骤(2)中切好的扩繁继代培养材料放入生根培养基中进行培养,所用的生根培养基为在1升1/2MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:
将配好的生根培养基分装在培养瓶中,每瓶装25毫升,盖好瓶盖,在压力为0.1-0.15MPa下灭菌20-25分钟,将灭菌好的培养基在培养室放置3天后,接入步骤(2)中切好的初代培养材料。转入温度为22-26℃,湿度为55-75%,光照强度为1800-2400Lx(时间12小时/天)的培养室中培养。25-35天后,可长成高为3-5cm,有4-6片叶,约4-5条长0.5-1.0cm根的完整植株,此时可移入温室炼苗培养和移栽。
(4)炼苗培养和移栽。
将长好的大樱桃砧木G-7组培苗完整植株移入温度为20-28℃,湿度为75-95%,光照强度为1000-8000Lx(时间8-10小时/天)的温室,驯化10-15天,让其接受7个太阳光散射光源的照射锻炼后,打开瓶盖,加入0.5-1.0cm高的自来水防污染和保湿,再炼苗4-8天,当苗高达到4-6cm,根长1-2cm时,将苗木用手术镊取出,洗去根部琼脂,用在800倍多菌灵溶液中浸泡10分钟后移栽到口径8cm营养钵中,基质采用蛭石,每钵4株,放入小拱棚内,保持棚内温度18-28℃,相对湿度90%以上,一周后在小拱棚棚膜上划小口透气,20天后苗子开始成活,逐渐加大小拱棚通气强度及光照强度,等试管苗完全适应温室条件后,及时移栽到细砂石+森林土+牛粪比例为1∶1∶0.5的营养土中,放入钢结构的简易塑料大棚,2周后可长出新叶,移栽成活率达96%。
实施例2
在本实施例中,所述启动分化培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:
在本实施例中,所述扩繁继代培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:
在本实施例中,所述生根培养基为在1升1/2MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:
在本实施例中,其他步骤与实施例1相同。
实施例3
在本实施例中,所述启动分化培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:
在本实施例中,所述扩繁继代培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:
在本实施例中,所述生根培养基为在1升1/2MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:
在本实施例中,其他步骤与实施例1相同。
实施例4
在本实施例中,所述启动分化培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:
在本实施例中,所述扩繁继代培养基与实施例3相同。
在本实施例中,所述生根培养基为在1升1/2MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:
在本实施例中,其他步骤与实施例1相同。
实施例5
在本实施例中,所述启动分化培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:
在本实施例中,所述扩繁继代培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:
在本实施例中,所述生根培养基为在1升1/2MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:
在本实施例中,其他步骤与实施例1相同。
Claims (3)
1.一种大樱桃砧木G-7快速繁殖方法,其特征在于,它包括以下步骤:(1)无菌系建立切取大樱桃砧木G-7新梢顶端3~4节2~3cm长的茎段,依次用洗洁精清洗、酒精和升汞溶液消毒后,切成1.5~2cm长单芽茎段,作为外植体接入装有启动分化培养基的培养瓶,该启动分化培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:白砂糖10~30g 琼脂粉4~7g 6-苄氨基嘌呤0.1~0.6mg 吲哚乙酸0.1~0.3mg,将所述培养瓶置于培养室培养,培养条件为:温度20~26℃,湿度55~75%,光照强度2000~2500Lx,光照时间14小时/天;(2)扩繁继代培养选取步骤(1)中2~4cm长组培苗为材料,切成1.3~1.7cm长的带芽茎段接入装有扩繁继代培养基的培养瓶中培养,该扩繁继代培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:白砂糖20~30g 琼脂粉4~7g 6-苄氨基嘌呤0.2~1.0mg 吲哚乙酸0.1~0.5mg 吲哚丁酸0.1~0.5mg,培养条件为:温度22~28℃,湿度55~75%,光照强度1800~2800Lx,光照时间16小时/天;(3)生根培养选取步骤(2)中2~6cm长组培苗为材料,切成长1.6~2.0cm带顶芽或侧芽茎段接入装有生根培养基的培养瓶中培养,该生根培养基为在1升1/2MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:白砂糖10~20g 琼脂粉4~7g 吲哚乙酸0.3~0.8mg 吲哚丁酸0.1~0.4mg 活性炭2~5g,培养条件为:温度22~26℃,湿度55~75%,光照强度1800~2400Lx,光照时间12小时/天;(4)炼苗培养和移栽包括如下环节:闭瓶锻炼、开瓶锻炼、移栽到蛭石基质、移栽到由细砂石、森林土、牛粪组成的营养土中。
2.根据权利要求1所述的大樱桃砧木G-7快速繁殖方法,其特征在于,所述启动分化培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:白砂糖20g琼脂粉5g 6-苄氨基嘌呤0.3mg 吲哚乙酸0.2mg;所述扩繁继代培养基为在1升MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:白砂糖30g 琼脂粉5g 6-苄氨基嘌呤0.4mg 吲哚乙酸0.2mg 吲哚丁酸0.3mg;所述生根培养基为在1升1/2MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成:白砂糖15g 琼脂粉5g 吲哚乙酸0.4mg 吲哚丁酸0.3mg 活性炭3g。
3.根据权利要求1所述的大樱桃砧木G-7快速繁殖方法,其特征在于,在所述移栽到蛭石基质环节前将苗木在800倍多菌灵溶液中浸泡10分钟,所述细砂石、森林土、牛粪的体积比为1∶1∶0.5。
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