CN103416308A - 一种野生甜樱桃木组培快繁的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种野生甜樱桃木组培快繁的方法，它包括以下步骤：S1.切取外植体；S2外植体灭菌；S3.诱导培养：将灭菌后的带芽茎段接种于诱导培养基中进行培养，可诱导腋芽萌发；S4.继代培养：将已萌发的腋芽接种于继代培养基中进行培养，可诱导丛生芽产生；S5.生根培养：将切割的丛生芽接种于生根培养基中进行培养，可诱导其生根；S6.炼苗移栽。本发明采用组培繁殖的手段成功获得四川省巴中市南江县本地野生甜樱桃的无菌苗，并建立组培快繁体系，可在短时间内获得大量无菌后代，即能保持母本原有的优良性状，又能减少病虫害的发生，为实现野生甜樱桃规模工厂化生产提供了基础材料。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物的培养方法，具体涉及一种野生甜樱桃木组培快繁的方法。
背景技术
植物组织培养指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。采用植物组织培养方法可以在短期内快速繁殖多种植物，不仅繁殖速率极高，且因为其是无性繁殖，可以保持原繁殖木株的优良形状，近年来在生产上应用越来越广。植物组织培养技术的原理是利用植物细胞的全能性，即组成植物体的每一个细胞都具有发育成为一个完整植株的潜在能力，采用植物体上的单个细胞、细胞团、分生组织或器官的一部分，通过人工配制不同营养成分和激素的培养基来培养并调控其发育，使这些细胞、组织等形成成千上万个小植株并且保持了母本植株的全部的优良形状，这种方法可以在短时间内获得大量的组培苗，并能在人工控制条件的车间内一年四季进行，因而可以实现种苗繁殖的工厂化生产，可在较小的面积内进行大规模生产，因而无需占用大量土地。
四川省巴中市南江县本地野生甜樱桃（俗称米樱桃），由于此野生甜樱桃汁多，果肉饱满，味道纯正，果味浓郁，芳香甘甜，具有优异的市场开发价值。但此种本地野生甜樱桃多为山地野生，未经开发，繁殖方式多为自然的种子繁殖或扦插，传统的繁殖方式不能满足开发及生产之需要，并且多有退化现象，无法保持母本的优良性状。
发明内容
本发明的目的即在于克服现有技术的不足，提供一种四川省巴中市南江县本地野生甜樱桃木组培快繁的方法，本发明采用组培繁殖的手段成功获得本地甜樱桃的无菌苗，为实现野生甜樱桃规模工厂化生产提供了基础材料。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种野生甜樱桃木组培快繁的方法，它包括以下步骤：
S1. 切取外植体：于晴天中午或下午采集无病害的野生甜樱桃的当年生枝条，去除多余叶片，切取带芽茎段，于流水中冲洗5～10min后，吸干水分；
S2. 外植体灭菌：将冲洗后的外植体放入超净工作台，用浓度为70～75%的酒精消毒25～35s，用无菌水冲洗4～6次，再放入浓度为0.1～0.2%的升汞中灭菌3～8min，用无菌水冲洗4～6次，置于无菌纸上晾干；
S3. 诱导培养：将灭菌后的外植体接种于诱导培养基中进行培养，其中，诱导培养基为MS+6-BA 3.0mg/L+IAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，pH值为5.5～6.5，培养条件为：光照强度2000～3000LX，光照时间14～18h，温度24～26℃，培养时间14～17d，经诱导培养，可诱导腋芽萌发；
S4. 继代培养：将经诱导培养后已萌发的腋芽剪下，接种于继代培养基中进行培养，其中，继代培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+IAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，pH值为5.5～6.5，培养条件为：光照强度2000～3000LX，光照时间14～18h，温度24～26℃，培养时间27～32d，经继代培养后，可诱导丛生芽产生；
S5. 生根培养：切割丛生芽，将丛生芽接种于生根培养基中进行培养，其中，生根培养基为1/2MS+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，pH值为5.5～6.5，培养条件为：光照强度2000～3000LX，光照时间14～18h，温度24～26℃，培养时间8～12d，经生根培养后，可诱导其生根；
S6. 炼苗移栽：将生长达8～12cm的生根组培苗从培养室取出，置于室外培养4～7d，洗掉组培苗上的培养基，保持温度和湿度，分别为22～26℃、68～75%，移植于基质中；其中所述移植基质为腐殖土混合蛭石，混合比例为1～2:1。
本发明的有益效果是：本发明采用组培繁殖的手段成功获得四川省巴中市南江县本地野生甜樱桃的无菌苗，并建立组培快繁体系，可在短时间内获得大量无菌后代，既能保持母本原有的优良性状，又能减少病虫害的发生，为实现野生甜樱桃规模工厂化生产提供了基础材料；该方法具有简便易行、程序简单、工效高、成本低的特性。
附图说明
图1为诱导培养后本地野生甜樱桃的腋芽萌发示意图；
图2为继代培养后本地野生甜樱桃的丛生芽示意图；
图3为生根培养后本地野生甜樱桃的生根苗示意图；
图4为生根培养后本地野生甜樱桃根系示意图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的描述，本发明的保护范围不局限于以下所述。
实施例1：一种野生甜樱桃木组培快繁的方法，它包括以下步骤：
S1. 切取外植体：于晴天中午或下午采集无病害的野生甜樱桃的当年生枝条，去除多余叶片，切取带芽茎段，于流水中冲洗5min后，吸干水分；
S2. 外植体灭菌：将冲洗后的外植体放入超净工作台，用浓度为70%的酒精消毒25s，用无菌水冲洗4次，再放入浓度为0.1%的升汞中灭菌3min，用无菌水冲洗4次，置于无菌纸上晾干；
S3. 诱导培养：将灭菌后的外植体接种于诱导培养基中进行培养，其中，诱导培养基为MS+6-BA 3.0mg/L+IAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，pH值为5.5，培养条件为：光照强度2000LX，光照时间14h，温度24℃，培养时间14d，经诱导培养，可诱导腋芽萌发；
S4. 继代培养：将经诱导培养后已萌发的腋芽剪下，接种于继代培养基中进行培养，其中，继代培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+IAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，pH值为5.5，培养条件为：光照强度2000LX，光照时间14h，温度24℃，培养时间27d，经继代培养后，可诱导丛生芽产生；
S5. 生根培养：切割丛生芽，将丛生芽接种于生根培养基中进行培养，其中，生根培养基为1/2MS+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，pH值为5.5，培养条件为：光照强度2000LX，光照时间14h，温度24℃，培养时间8d，经生根培养后，可诱导其生根；
S6. 炼苗移栽：将生长达8cm的生根组培苗从培养室取出，置于室外培养4d，洗掉组培苗上的培养基，保持温度和湿度，分别为22℃、68%，移植于基质中；其中所述移植基质为腐殖土混合蛭石，混合比例为1:1。
实施例2：一种野生甜樱桃木组培快繁的方法，它包括以下步骤：
S1. 切取外植体：于晴天中午或下午采集无病害的野生甜樱桃的当年生枝条，去除多余叶片，切取带芽茎段，于流水中冲洗10min后，吸干水分；
S2. 外植体灭菌：将冲洗后的外植体放入超净工作台，用浓度为75%的酒精消毒35s，用无菌水冲洗6次，再放入浓度为0.2%的升汞中灭菌8min，用无菌水冲洗6次，置于无菌纸上晾干；
S3. 诱导培养：将灭菌后的外植体接种于诱导培养基中进行培养，其中，诱导培养基为MS+6-BA 3.0mg/L+IAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，pH值为6.5，培养条件为：光照强度3000LX，光照时间18h，温度26℃，培养时间17d，经诱导培养，可诱导腋芽萌发；S4. 继代培养：将经诱导培养后已萌发的腋芽剪下，接种于继代培养基中进行培养，其中，继代培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+IAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，pH值为6.5，培养条件为：光照强度3000LX，光照时间18h，温度26℃，培养时间32d，经继代培养后，可诱导丛生芽产生；
S5. 生根培养：切割丛生芽，将丛生芽接种于生根培养基中进行培养，其中，生根培养基为1/2MS+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，pH值为6.5，培养条件为：光照强度3000LX，光照时间18h，温度26℃，培养时间12d，经生根培养后，可诱导其生根；
S6. 炼苗移栽：将生长达12cm的生根组培苗从培养室取出，置于室外培养7d，洗掉组培苗上的培养基，保持温度和湿度，分别为26℃、75%，移植于基质中；其中所述移植基质为腐殖土混合蛭石，混合比例为2:1。
实施例3：一种野生甜樱桃木组培快繁的方法，它包括以下步骤：
S1. 切取外植体：于晴天中午或下午采集无病害的野生甜樱桃的当年生枝条，去除多余叶片，切取带芽茎段，于流水中冲洗8min后，吸干水分；
S2. 外植体灭菌：将冲洗后的外植体放入超净工作台，用浓度为73%的酒精消毒30s，用无菌水冲洗5次，再放入浓度为0.15%的升汞中灭菌5min，用无菌水冲洗5次，置于无菌纸上晾干；
S3. 诱导培养：将灭菌后的外植体接种于诱导培养基中进行培养，其中，诱导培养基为MS+6-BA 3.0mg/L+IAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，pH值为6，培养条件为：光照强度2500LX，光照时间16h，温度25℃，培养时间16d，经诱导培养，可诱导腋芽萌发；
S4. 继代培养：将经诱导培养后已萌发的腋芽剪下，接种于继代培养基中进行培养，其中，继代培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+IAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，pH值为6.2，培养条件为：光照强度2800LX，光照时间16h，温度25℃，培养时间30d，经继代培养后，可诱导丛生芽产生；
S5. 生根培养：切割丛生芽，将丛生芽接种于生根培养基中进行培养，其中，生根培养基为1/2MS+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，pH值为5.8，培养条件为：光照强度2500LX，光照时间16h，温度25℃，培养时间10d，经生根培养后，可诱导其生根；
S6. 炼苗移栽：将生长达9cm的生根组培苗从培养室取出，置于室外培养6d，洗掉组培苗上的培养基，保持温度和湿度，分别为23℃、70%，移植于基质中；其中所述移植基质为腐殖土混合蛭石，混合比例为1.5:1。
实施例4：一种野生甜樱桃木组培快繁的方法，它包括以下步骤：
S1. 切取外植体：于晴天中午或下午采集无病害的野生甜樱桃的当年生枝条，去除多余叶片，切取带芽茎段，于流水中冲洗10min后，吸干水分；
S2. 外植体灭菌：将冲洗后的外植体放入超净工作台，用浓度为72%的酒精消毒25s，用无菌水冲洗4次，再放入浓度为0.2%的升汞中灭菌7min，用无菌水冲洗4次，置于无菌纸上晾干；
S3. 诱导培养：将灭菌后的外植体接种于诱导培养基中进行培养，其中，诱导培养基为MS+6-BA 3.0mg/L+IAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，pH值为6.5，培养条件为：光照强度3000LX，光照时间16h，温度24℃，培养时间17d，经诱导培养，可诱导腋芽萌发；
S4. 继代培养：将经诱导培养后已萌发的腋芽剪下，接种于继代培养基中进行培养，其中，继代培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+IAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，pH值为5.5，培养条件为：光照强度3000LX，光照时间14h，温度25℃，培养时间32d，经继代培养后，可诱导丛生芽产生；
S5. 生根培养：切割丛生芽，将丛生芽接种于生根培养基中进行培养，其中，生根培养基为1/2MS+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，pH值为6.5，培养条件为：光照强度2300LX，光照时间14h，温度26℃，培养时间10d，经生根培养后，可诱导其生根；
S6. 炼苗移栽：将生长达11cm的生根组培苗从培养室取出，置于室外培养5d，洗掉组培苗上的培养基，保持温度和湿度，分别为22℃、75%，移植于基质中；其中所述移植基质为腐殖土混合蛭石，混合比例为2:1。
Claims (2)
1.一种野生甜樱桃木组培快繁的方法，其特征在于，它包括以下步骤：
S1. 切取外植体：于晴天中午或下午采集无病害的野生甜樱桃的当年生枝条，去除多余叶片，切取带芽茎段，于流水中冲洗5～10min后，吸干水分；
S2. 外植体灭菌：将冲洗后的外植体放入超净工作台，用浓度为70～75%的酒精消毒25～35s，用无菌水冲洗4～6次，再放入浓度为0.1～0.2%的升汞中灭菌3～8min，用无菌水冲洗4～6次，置于无菌纸上晾干；
S3. 诱导培养：将灭菌后的外植体接种于诱导培养基中进行培养，其中，诱导培养基为MS+6-BA 3.0mg/L+IAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，pH值为5.5～6.5，培养条件为：光照强度2000～3000LX，光照时间14～18h，温度24～26℃，培养时间14～17d，经诱导培养，可诱导腋芽萌发；
S4. 继代培养：将经诱导培养后已萌发的腋芽剪下，接种于继代培养基中进行培养，其中，继代培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+IAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，pH值为5.5～6.5，培养条件为：光照强度2000～3000LX，光照时间14～18h，温度24～26℃，培养时间27～32d，经继代培养后，可诱导丛生芽产生；
S5. 生根培养：切割丛生芽，将丛生芽接种于生根培养基中进行培养，其中，生根培养基为1/2MS+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，pH值为5.5～6.5，培养条件为：光照强度2000～3000LX，光照时间14～18h，温度24～26℃，培养时间8～12d，经生根培养后，可诱导其生根；
S6. 炼苗移栽：将生长达8～12cm的生根组培苗从培养室取出，置于室外培养4～7d，洗掉组培苗上的培养基，保持温度和湿度，分别为22～26℃、68～75%，移植于基质中。
2.根据权利要求1所述的一种野生甜樱桃木组培快繁的方法，其特征在于，步骤S6中所述移植基质为腐殖土混合蛭石，混合比例为1～2:1。
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