CN108040885A - 一种利用樱桃茎段进行组织培养的方法 - Google Patents

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蔡小军
蔡军利
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BAOJI SONGLIANG AGRICULTURAL TECHNOLOGY Co.,Ltd.
Shaanxi Pufeng Modern Agriculture Co., Ltd
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Baoji Song Liang Agricultural Science And Technology Co Ltd
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    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
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    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
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    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants

Abstract

本发明涉及一种利用樱桃茎段进行组织培养的方法。诱导生根时把增殖后达到3cm以上，具有3片以上子叶的植株插入基质上，该基质为MS+蛭石，光照时间16h，1500‑2000LX，温度25±2℃，湿度80％，二氧化碳浓度900ppm‑1000ppm，培养室洁净度1000级以上，培养20天以后形成根系发达的苹果完整植株。本发明采用无性繁殖方式，使母本的优良性状完整保留。并突破了木本组培苗生根质量差的难题，组培苗根系发达，完整，成活率高，无须炼苗。

Description

一种利用樱桃茎段进行组织培养的方法
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，特别涉及一种利用苹果茎段进行组织培养的方法。
背景技术
樱桃属于蔷薇科落叶乔木果树，成熟时颜色鲜红，玲珑剔透，味美形娇，树姿优美，富含糖和铁质，营养丰富，是重要的果树和园林绿化树，又具有很高的食用和药用价值，近年来在我国广泛栽培，发展潜力巨大。
目前樱桃的生产中主要采用扦插、压条和分根蘖繁殖，不但繁殖系数低，而且造成品种退化，病虫害传播蔓延。采用组织培养技术可以快速繁殖作物新品种，加快新品种的推广速度，同时植物组织培养培育的组培苗，遗传基因高度一致，生产稳定，苗木品质性能好，能为产业化生产提供优质的苗木。
樱桃组织培养技术始于20世纪70年代末，以茎尖、茎段、子叶、根尖、种子和花器官等器官作为外植体进行离体培养，是樱桃组织培养中一个主要的方面。同时，对胚培养、细胞悬浮培养和胚状体的诱导也进行了初步的研究；近些年，在组织细胞培养物的超低温保存以及基因工程方面也取得了一些进展。目前植物组织培养方面应用最多、最广泛和最有效的是脱毒和离体快繁，利用组织培养快速繁育砧木苗的方法大致分为培养材料的选择与灭菌、培养基的选择、芽分化与增殖继代、诱导生根和移栽等阶段。
但是现有的樱桃组织培养的方法中，存在很多缺点，特别是在生根阶段都是需要含糖培养基，但是糖是污染源，容易增大生根阶段的污染率，而且，传统方法生根时只能获得一定数量主根，而且没根毛，需后期炼苗培养。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种利用苹果茎段进行组织培养的方法。
为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案予以实现：
1、采集樱桃新鲜茎杆，清水洗干净。把茎杆截成4cm左右的茎段，至少保留2个腋芽，0.1％升汞灭菌15m，75％酒精灭菌5m，无菌水清洗3-5遍。插入MS+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+6-BA 0.8mg/L+IBA 0.5mg/L的培养基中，光照2000-3000Lx，14h，温度25±2℃，湿度70％，培养25天左右后，腋芽部位生出不定芽，获得初代。
2、继代培养(增殖培养)把形成的不定芽插入MS+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+6-BA1.2mg/L+IAA0.8mg/L的培养基上，光照2000-3000LX，14h，温度25±2℃，湿度70％，培养25天左右；
3、诱导生根把增殖后达到3cm以上，具有3片以上子叶的植株插入专用生根设备里面的基质上，该基质为MS+蛭石，光照时间16h，1500-2000LX，温度25±2℃，湿度80％，二氧化碳浓度900ppm-1000ppm，培养室洁净度1000级以上，培养20天以后形成根系发达的苹果完整植株。
MS+蛭石为每升MS溶液加800g蛭石。
4、把樱桃完整植株移栽到降解袋里面，移植到温棚，温度15-30℃，湿度85％，一周后即可移到大田。
本发明采用无性繁殖方式，使母本的优良性状完整保留。并突破了木本组培苗生根质量差的难题，组培苗根系发达，完整，成活率高，无须炼苗。
附图说明：
图1：实施例3的立体结构示意图；
图2：实施例3的剖面结构示意图；
图3：实施例3所述根床的俯视结构示意图。
具体实施方式
以下结合较佳实施例，对依据本发明提供的具体实施方式详述如下：
实施例1
以莱阳矮樱茎段作为组培材料，使用本发明的方法进行组织培养。
1、采集莱阳矮樱的新鲜茎杆，清水洗干净。把茎杆截成4cm左右的茎段，至少保留2个腋芽，0.1％升汞灭菌15m，75％酒精灭菌5m，无菌水清洗3-5遍。插入MS+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+6-BA 0.8mg/L+IBA 0.5mg/L的培养基中，光照2000-3000Lx，14h，温度25±2℃，湿度70％，培养25天左右后，腋芽部位生出不定芽，获得初代。
2、继代培养(增殖培养)把形成的不定芽插入MS+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+6-BA1.2mg/L+IAA 0.8mg/L的培养基上，光照2000-3000LX，14h，温度25±2℃，湿度70％，培养25天左右；
3、诱导生根把增殖后达到3cm以上，具有3片以上子叶的植株插入专用生根设备(实施例3)里面的基质上，该基质为MS+蛭石，光照时间16h，1500-2000LX，温度25±2℃，湿度80％，二氧化碳浓度900ppm-1000ppm，培养室洁净度1000级以上，培养20天以后形成根系发达的苹果完整植株。
MS+蛭石为每升MS溶液加800g蛭石。
4、把莱阳矮樱完整植株移栽到降解袋里面，移植到温棚，温度15-30℃，湿度85％，一周后即可移到大田。
实施例2
以莱阳矮樱作为组培材料，使用不同的方法进行组织培养中的诱导生根步骤。选用的材料为增殖后达到3cm以上，具有3片以上子叶的植株。
实验组：使用本发明实施例1的诱导生根的方法；
对照组1：MS基础母液8ML/L+25g/L蔗糖+6.5g/L琼脂+1.0mg/L IAA+0.2mg/L IBA+活性碳1000mg/L，光照强度3000lx，每天持续12小时光照，室内湿度保持70％-80％进行诱导生根培养。
对照组2：培养基为：F14+IBA 1.0mg/L+800mg/L活性炭，其他条件与实验组相同。
对照组3：与实验组相同，仅将蛭石替换为等量的活性炭。
对照组4：培养基为：1/2MS基本培养基+IBA 0.05-0.1mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂7g·L-1，其他条件与对照组相同。
对照组5：与实验组相同，所采用的光照时间10h，温度25±2℃，湿度85％，其他与实验组相同。
对照组6：诱导生根步骤所采用的二氧化碳浓度1200ppm，其他与实验组相同。
实施例3
一种组织培养专用生根设备，如图1至图3所示，包括：盒体1、盒盖2和根床3，所述盒盖2通过合页26与盒体1相连接，可相对盒体1翻转；所述根床3由若干相互垂直的隔板组成，所述根床3具有若干个相互独立的井字形的用于容置培养基的根床区域30，所述盒盖2的底面上设置有LED灯20，所述盒体1的侧壁面上开设有若干通风孔10，所述通风孔10所处位置高于根床3的顶面。通过根床3可以将猕猴桃苗生长的根都分隔，避免了培苗完成后，它们的根系缠绕于一起，将它们分离时费时费力且易损伤根系。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims (3)

1.一种利用樱桃茎段组织培养的诱导生根方法，其特征在于，
把增殖后达到3cm以上，具有3片以上子叶的植株插入基质上，该基质为MS+蛭石，光照时间16h，1500-2000LX，温度25±2℃，湿度80％，二氧化碳浓度900ppm-1000ppm，培养室洁净度1000级以上，培养20天以后形成根系发达的苹果完整植株。
2.根据权利要求1所述的一种利用樱桃茎段组织培养的诱导生根方法，其特征在于，MS+蛭石为每升MS溶液加800g蛭石。
3.根据权利要求1或2所述的一种利用樱桃茎段组织培养的诱导生根方法，其特征在于，具体的方法为：
1)采集樱桃新鲜茎杆，清水洗干净。把茎杆截成4cm左右的茎段，至少保留2个腋芽，0.1％升汞灭菌15m，75％酒精灭菌5m，无菌水清洗3-5遍。插入MS+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+6-BA 0.8mg/L+IBA 0.5mg/L的培养基中，光照2000-3000Lx，14h，温度25±2℃，湿度70％，培养25天左右后，腋芽部位生出不定芽，获得初代。
2)继代培养(增殖培养)把形成的不定芽插入MS+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+6-BA1.2mg/L+IAA0.8mg/L的培养基上，光照2000-3000LX，14h，温度25±2℃，湿度70％，培养25天左右；
3)诱导生根把增殖后达到3cm以上，具有3片以上子叶的植株插入基质上，该基质为MS+蛭石，光照时间16h，1500-2000LX，温度25±2℃，湿度80％，二氧化碳浓度900ppm-1000ppm，培养室洁净度1000级以上，培养20天以后形成根系发达的苹果完整植株；
MS+蛭石为每升MS溶液加800g蛭石。
4)把苹果完整植株移栽到降解袋里面，移植到温棚，温度15-30℃，湿度85％，一周后即可移到大田。
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