CN103053421B

CN103053421B - 一种黄连木快速繁殖的方法

Info

Publication number: CN103053421B
Application number: CN201310004503.1A
Authority: CN
Inventors: 施江; 辛莉; 郭倩; 戴凌峰; 马香丽; 史国安
Original assignee: Henan University of Science and Technology
Current assignee: Henan University of Science and Technology
Priority date: 2013-01-07
Filing date: 2013-01-07
Publication date: 2015-06-24
Anticipated expiration: 2033-01-07
Also published as: CN103053421A

Abstract

本发明属于植物生物技术领域，具体涉及一种黄连木快速繁殖的方法。包括选取种子、消毒、培养、取材和增殖培养五个步骤。本发明在黄连木种子长成茎尖长1～2cm，子叶变绿展平，并长出两片小真叶，且全长3～4cm的无菌幼苗植株后，取出植株，切割成三部分，将茎尖接于培养基中，再将剩下的子叶节也接种在培养基中进行培养。通过采用本发明方法，不仅操作简单，而且减少了切割操作对子叶节的伤害，大大避免在取子叶节的时候对子叶节的伤害，本发明的茎尖组织培养后剩下的子叶节也可以组织培养，大大提高了材料利用率。

Description

一种黄连木快速繁殖的方法

技术领域

本发明属于植物生物技术领域，具体涉及一种黄连木快速繁殖的方法。

背景技术

黄连木（Pistacia chinensis Bunge.)又名楷树、楷木、黄楝树等，属漆树科黄连木属落叶乔木，成年树高达20 m以上，材质优良，叶片随季节变换而呈现不同色泽，花序红色，极为美观，宜作景观绿化，是一种多用途树种。因其种子含油率42.5％，出油率20％～30％，可提炼成生物柴油，因此被国家列为“十一五”期间重点开发的主要生物质能源树种之一，极具发展潜力。

目前，黄连木主要通过播种和嫁接繁殖，但出芽率和成活率都不是很高；而在黄连木组培快繁上有纯粹的利用子叶节进行繁殖，也有纯粹的利用黄连木芽进行繁殖，而没有将这两种组培快繁方法结合使用，繁殖系数和成苗率都不高；远不能满足国内对黄连木种苗的需求。

传统的利用黄连木芽进行组织培养快速繁殖的方法为：

1、选取成熟饱满且种皮呈绿蓝色的种子，去除黄连木种皮。

2、在超净工作台内，将黄连木种子用酒精消毒，再用无菌水冲洗，之后用升汞消毒，再将消毒后的黄连木种子用无菌水冲洗。

3、将消毒后的黄连木种子放于培养基中进行接种培养，之后观察茎尖诱导情况，进行取材。

4、在无菌操作台内取出，切其顶芽接于培养基上进行培养。后续过程同通常的组培成苗过程。

传统的利用黄连木子叶节进行组织培养快速繁殖的方法为：

1、选取成熟饱满且种皮呈绿蓝色的种子，去除黄连木种皮。

3、将消毒后的黄连木种子放于培养基中进行接种培养，取材时间控制严格，要求培养实生苗长至子叶变绿展平，并长出两片小真叶后，进行取材。

4、取出无菌苗，在超净工作台里用解剖刀切去两端，留下子叶节（切时上胚轴、下胚轴各留0.5 cm左右），再沿胚轴中轴线切开两个子叶节，将获得的两个子叶节再分别切除1/3子叶，剩下的子叶节部分接种在芽诱导的培养基上，培养后得幼芽。此时茎尖尚小，无快繁利用价值。后续过程同通常的组培成苗过程。

发明内容

本发明的目的是提供一种黄连木快速繁殖的方法，能够大大提高黄连木的出芽率和成活率。

本发明所采用的技术方案是：一种黄连木快速繁殖的方法，包括以下步骤：

A、选取成熟饱满且种皮呈蓝绿色的黄连木种子，去除黄连木种皮，备用；

B、在超净工作台内，将黄连木种子用质量浓度为75 %的酒精消毒20～30s，再用无菌水冲洗3～5次，每次3～5分钟；之后用质量浓度为0.2%的升汞消毒5～6 分钟，再将消毒后的黄连木种子用无菌水冲洗3～5次，每次3～5分钟，备用；

C、将消毒后的黄连木种子种脐向下垂直放于MS培养基上进行培养；

D、待黄连木种子长成茎尖长1～2cm，子叶变绿展平，并长出两片小真叶，且全长3～4 cm的无菌幼苗植株后，取出植株，用灭菌后的剪刀在超净工作台内将黄连木植株剪成3部分，上部是1～2cm长的茎尖，中间是长1～2cm的子叶节，下部是黄连木的根，备用；

E、分别将茎尖和子叶节接种于相同的生长培养基上，进行芽增殖培养。

所述步骤E中的生长培养基为加有1/2WPM 、4.0 mg/L 6-BA、0.1 mg/L IBA、30 g/L蔗糖和6.7 g/L琼脂的pH为5.8～6. 0的培养基。

本发明的有益效果是：本发明在黄连木种子长成茎尖长1～2cm，子叶变绿展平，并长出两片小真叶，且全长3～4 cm的无菌幼苗植株后，取出植株，切割成三部分，将茎尖接于培养基中，再将剩下的子叶节也接种在培养基中进行培养。通过采用本发明方法，具有以下优点：

1、操作简单，本发明在超净工作台里用剪刀将无菌苗剪成3段，分别为上端的茎尖和中间的子叶节以及下部的根，此后即可直接将茎尖和子叶节接种于生长培养基上进行快繁培养，将无菌苗分为三段用时5~10s；而前人在处理时获取子叶节的时间较长，且切下的子叶节还要沿胚轴中轴线纵切以切取子叶节，还要切去1/3的子叶，剩下的部分用于接种，操作过于复杂，最快需要1~2 min左右，也就说此法在时间上比起原来可以省8倍左右的时间，大大提高了工作效率，对于大量组培生产有很大的帮助，可以更大程度的获取利益。

2、减少了切割操作对子叶节的伤害，由于减少了操作步骤，可以大大避免在取子叶节的时候对子叶节的伤害，而且由于本发明操作简单，因此基本无污染。

3、材料利用率高，本发明利用的是茎尖快繁的下脚料，无须为子叶节快繁专门准备材料，提高了材料的利用率。

4、成苗快繁殖系数更高，与前人纯粹的用子叶节或茎尖接种相比，此方法更进一步，将上面的茎尖和子叶节分开，再分别接种到加有1/2WPM 、4.0 mg/L 6-BA、0.1 mg/L IBA、30 g/L蔗糖和6.7 g/L琼脂的pH为5.8～6. 0的培养基上，茎尖继续正常生长快繁，子叶节生出两个幼芽，这样扩大了繁殖系数。

附图说明

图1为采用本发明的子叶节培养20天后长出两个新生芽。

具体实施例

下面对本发明的实施例做详细说明：本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

一种黄连木快速繁殖的方法，包括以下步骤：

B、在超净工作台内，将黄连木种子用质量浓度为75 %的酒精消毒25s，再用无菌水冲洗4次，每次4分钟；之后用质量浓度为0.2%的升汞消毒5分钟，再将消毒后的黄连木种子用无菌水冲洗4次，每次4分钟，备用；

D、待黄连木种子长成茎尖长1～2cm，子叶变绿展平，并长出两片小真叶，且全长3～4 cm的无菌幼苗植株后，取出植株，用灭菌后的剪刀在超净工作台内将黄连木植株剪成3部分，上部是1.5cm长的茎尖，中间是长1.5cm的子叶节，下部是黄连木的根，备用；

E、分别将茎尖和子叶节接种于相同的生长培养基上，进行芽增殖培养。生长培养基为加有1/2WPM 、4.0 mg/L 6-BA、0.1 mg/L IBA、30 g/L蔗糖和6.7 g/L琼脂的pH为5.8～6. 0的培养基。

结果表明：本发明方法操作简单，将无菌苗分为三段用时5~10s即可获得子叶节和茎尖，大大提高了工作效率，对于大量组培生产有很大的帮助。本发明方法切取子叶节时成功率可达到98%，且95%的子叶节都能成活，利用本发明方法大大提高了材料的利用率，且有85%的子叶节和94%的茎尖在接种20天后就能新生芽，效果明显。

Claims

1. 一种黄连木快速繁殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

B、在超净工作台内，将黄连木种子用质量浓度为75 %的酒精消毒20～30s，再用无菌水冲洗3～5次，每次3～5 分钟；之后用质量浓度为0.2%的升汞消毒5～6 分钟，再将消毒后的黄连木种子用无菌水冲洗3～5次，每次 3～5分钟，备用；

C、将消毒后的黄连木种子种脐向下垂直放于 MS 培养基上进行培养；

D、待黄连木种子长成茎尖长1～2cm，子叶变绿展平，并长出两片小真叶，且全长3～4cm 的无菌幼苗植株后，取出植株，用灭菌后的剪刀在超净工作台内将黄连木植株剪成3部分，上部是1.5cm长的茎尖，中间是长1.5cm的子叶节，下部是黄连木的根，备用；

E、分别将茎尖和子叶节接种于相同的生长培养基上，进行增殖培养；

所述步骤 E 中的生长培养基为加有1/2WPM、4.0 mg/L 6-BA、0.1 mg/L IBA、30g/L蔗糖和6.7g/L琼脂的pH为6.0 的培养基。