CN105165633A - 一种用于组织培养红叶黄连木的培养基、应用及培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种培养基、应用及培养方法，具体涉及利用组培技术生产红叶黄连木种苗的培养基、应用及其培养方法。所述培养基分为初代培养基、增殖培养基和生根培养基，所述增殖培养基组分由以下组分组成：MS、1.5-2.5mg/L？6-苄基腺嘌呤、0.05-0.15mg/L萘乙酸、15-25g/L蔗糖、5.5-6.5g/L琼脂；所述生根培养基组分由以下组分组成：1/2MS、0.15-0.25mg/L萘乙酸、0.75-0.85mg/L3-吲哚丁酸、15-25g/L蔗糖、5.5-6.5g/L琼脂、0.15-0.25mg/L活性炭；所述增殖培养基灭菌前pH调至5.5-6.5；所述生根培养基灭菌前pH调至5.5-6.0。本申请所述培养基可以有效的提高红叶黄连木的出芽率、成活率，并且在保持优良树种的遗传稳定性的同时，有效提高其繁殖系数。
Description
技术领域
本发明涉及一种培养基、应用及培养方法，具体涉及利用组培技术生产红叶黄连木种苗的培养基、应用及其培养方法。
背景技术
红叶黄连木又名楷树、楷木、黄楝树等，属漆树科黄连木属落叶乔木，成年树高达20m以上，材质优良，叶片随季节变换而呈现不同色泽，花序红色，极为美观，宜作景观绿化，是一种多用途树种。因其种子含油率42.5％，出油率20％～30％，可提炼成生物柴油。近年来，红叶黄连木被国家列为“十一五”期间重点开发的主要生物质能源树种之一，极具发展潜力。
目前，红叶黄连木主要通过播种和嫁接繁殖，但出芽率和成活率都不是很高，远不能满足国内对种苗的需求。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种适用于组织培养红叶黄连木的培养基、应用及培养方法，其可以有效的提高红叶黄连木的出芽率、成活率，并且在保持优良树种的遗传稳定性的同时，有效提高其繁殖系数。
为解决以上技术问题，本发明的技术方案提供的第一方面的技术方案为一种适用于组织培养红叶黄连木的培养基，所述培养基分为初代培养基、增殖培养基和生根培养基；
所述初代培养基由以下组分组成：MS、0.5-1.5mg/L6-苄基腺嘌呤、0.005-0.015mg/L萘乙酸、0.5-1.5g/L聚乙烯吡咯烷酮、15-25g/L蔗糖、5.5-6.5g/L琼脂；
所述增殖培养基组分由以下组分组成：MS、1.5-2.5mg/L6-苄基腺嘌呤、0.05-0.15mg/L萘乙酸、15-25g/L蔗糖、5.5-6.5g/L琼脂；
所述生根培养基组分由以下组分组成：1/2MS、0.15-0.25mg/L萘乙酸、0.75-0.85mg/L3-吲哚丁酸、15-25g/L蔗糖、5.5-6.5g/L琼脂、0.15-0.25mg/L活性炭；
所述初代培养基灭菌前pH调至5.5-6.5；所述增殖培养基灭菌前pH调至5.5-6.5；所述生根培养基灭菌前pH调至5.5-6.0。
优选的，所述初代培养基由以下组分组成：MS、1mg/L6-苄基腺嘌呤、0.01mg/L萘乙酸、1g/L聚乙烯吡咯烷酮、20g/L蔗糖、6g/L琼脂。
优选的，所述增殖培养基由以下组分组成：MS、2mg/L6-苄基腺嘌呤、0.1mg/L萘乙酸、20g/L蔗糖、6g/L琼脂。
优选的，所述生根培养基由以下组分组成：1/2MS、0.2mg/L萘乙酸、0.8mg/L3-吲哚丁酸、20g/L蔗糖、6g/L琼脂、0.2mg/L活性炭。
优选的，所述初代培养基灭菌前pH调至6.0；所述增殖培养基灭菌前pH调至6.0，所述生根培养基灭菌前pH调至6.0。
本申请还提供第二方面的技术方案为前述任一所述的培养基在组织培养红叶黄连木上的应用。
本申请还提供第三方面的技术方案为一种组织培养红叶黄连木的培养方法，所述培养方法包括以下步骤：
A、采集一年生半木质化的红叶黄连木的植物组织，先用洗涤剂溶液浸泡15-25min，刷洗腋芽部位后放在流水下冲洗过夜；在无菌的操作台上，先用75％酒精处理20-40s，用无菌水清洗，再用0.1％的升汞处理8-12min，再用无菌水清洗，晾干得培养材料；
B、将A步骤得到的培养材料接种到前述任一所述的初代培养基上，然后将所得培养基在光照培养条件下进行初代培养得分化出的芽；
C、将B步骤所得初代培养分化出的芽，在无菌操作台上切取下来，放在前述任一所述的增殖培养基上进行丛生芽诱导；
D、将红叶黄连木增殖的丛生芽分离成单株，将其接种到前述任一所述的生根培养基上，然后将所得培养基在光照培养条件下进行培养。
优选的，所述B步骤中光照培养的条件为温度为25±2℃，光照2500Lx，光照时间12h/d。
优选的，所述D步骤中光照培养的条件为温度为25±2℃，光照2500Lx，光照时间12h/d。
优选的，所述A步骤中植物组织为顶芽或腋芽茎段。
优选的，所述A步骤中无菌水清洗次数为3-7次。
本申请提供的主要技术方案即为用于组织培养红叶黄连木的培养基，该培养基设置为初代培养基、增殖培养基和生根培养基，三者采用特定的组培配方，从而有效用于红叶黄连木的组织培养，有效的提高红叶黄连木的出芽率、成活率，并且在保持优良树种的遗传稳定性的同时，有效提高其繁殖系数。
本申请所述培养基在培养红叶黄连木上，或者采用本申请的培养方式，红叶黄连木组织7天左右有明显的愈伤组织出现，14天左右愈伤组织开始生根，每株平均根数在3-4根，根长在3cm以上。
前述所述MS均指现有植物组培领域中常规使用的培养基MS组分，1/2MS即指常规使用的培养基MS组分，并且大量元素减半，其余成份保持不变。
附图说明
图1为红叶黄连木增殖培养接种28天后组织情况；
图2为红叶黄连木生根培养接种21天后组织情况。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细说明。
本申请采用以下步骤对红叶黄连木进行组织培养：
A、采集一年生半木质化的红叶黄连木的植物组织，所述植物组织为顶芽或腋芽茎段；先用洗涤剂溶液浸泡15-25min，刷洗腋芽部位后放在流水下冲洗过夜；在无菌的操作台上，先用75％酒精处理20-40s，用无菌水清洗，清洗次数为3-7次，再用0.1％的升汞处理8-12min，再用无菌水清洗，清洗次数为3-7次，晾干得培养材料；
B、将A步骤得到的培养材料接种到初代培养基上，然后将所得培养基在光照培养条件下进行初代培养得分化出的芽；所述光照培养的条件为温度为25±2℃，光照2500Lx，光照时间12h/d；所述初代培养基组分由以下组分组成：MS、0.5-1.5mg/L6-苄基腺嘌呤、0.005-0.015mg/L萘乙酸、0.5-1.5g/L聚乙烯吡咯烷酮、15-25g/L蔗糖、5.5-6.5g/L琼脂；所述初代培养基灭菌前pH调至5.5-6.5；
C、将B步骤所得初代培养分化出的芽，在无菌操作台上切取下来，放在增殖培养基上进行丛生芽诱导；所述增殖培养基组分由以下组分组成：MS、1.5-2.5mg/L6-苄基腺嘌呤、0.05-0.15mg/L萘乙酸、15-25g/L蔗糖、5.5-6.5g/L琼脂；所述增殖培养基灭菌前pH调至5.5-6.5；
D、将红叶黄连木增殖的丛生芽分离成单株，将其接种到生根培养基上，然后将所得培养基在光照培养条件下进行培养；所述光照培养的条件为温度为25±2℃，光照2500Lx，光照时间12h/d；所述生根培养基组分由以下组分组成：1/2MS、0.15-0.25mg/L萘乙酸、0.75-0.85mg/L3-吲哚丁酸、15-25g/L蔗糖、5.5-6.5g/L琼脂、0.15-0.25mg/L活性炭；所述生根培养基灭菌前pH调至5.5-6.0。
采用前述步骤进行红叶黄连木的组织培养，分别采用以下实施例：
实施例1
(1)将萌发的健康、无菌腋芽，切成2cm的带芽茎段，作为备用材料；
(2)将试验材料按照前述步骤顺序进行初代培养得分化出的芽，并将所得芽依次接种到添加不同浓度激素的MS增殖培养基上，每个浓度梯度接种20瓶，设3次重复，每个培养瓶接3棵带芽茎段，统计增殖系数；
(3)将接种好的试验材料放在光照2500Lx，温度25±2℃，光照时间12h/d的培养条件下，进行常规培养；
(4)每7天对芽的增殖情况进行一次统计，试验周期为35天；
(5)对试验数据进行处理与分析。
增殖处理对比试验A：
增殖处理对比试验B：
由试验数据表比对，设计2即MS+2.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA对黄连木增殖效果最好，且芽粗壮。
图1为红叶黄连木增殖培养接种28天后组织情况。
实施例2
(1)将增殖培养所得丛生芽，分离成单株，作为备用材料；
(2)将试验材料接种到添加不同浓度激素的1/2MS生根培养基上，每个浓度梯度接种20瓶，设3次重复，每个培养瓶接3棵丛生芽，统计生根率；
(3)将接种好的试验材料放在光照2500Lx，温度25±2℃，光照时间12h/d的培养条件下，进行常规培养；
(4)每7天对生根情况进行一次统计，试验周期为35天；
(5)对试验数据进行处理与分析。
生根处理对比试验A
生根处理对比试验B
由试验数据表对比可知，在试验设计3即1/2MS+0.2mg/LNAA+0.8mg/L的培养基上，生根率最高，且生长周期短，平均根数与根长比较均匀一致。
图2为红叶黄连木生根培养接种21天后组织情况。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种用于组织培养红叶黄连木的培养基，其特征在于：所述培养基分为初代培养基、增殖培养基和生根培养基；
所述初代培养基由以下组分组成：MS、0.5-1.5mg/L6-苄基腺嘌呤、0.005-0.015mg/L萘乙酸、0.5-1.5g/L聚乙烯吡咯烷酮、15-25g/L蔗糖、5.5-6.5g/L琼脂；
所述增殖培养基组分由以下组分组成：MS、1.5-2.5mg/L6-苄基腺嘌呤、0.05-0.15mg/L萘乙酸、15-25g/L蔗糖、5.5-6.5g/L琼脂；
所述生根培养基组分由以下组分组成：1/2MS、0.15-0.25mg/L萘乙酸、0.75-0.85mg/L3-吲哚丁酸、15-25g/L蔗糖、5.5-6.5g/L琼脂、0.15-0.25mg/L活性炭；
所述初代培养基灭菌前pH调至5.5-6.5；所述增殖培养基灭菌前pH调至5.5-6.5；所述生根培养基灭菌前pH调至5.5-6.0。
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述初代培养基由以下组分组成：MS、1mg/L6-苄基腺嘌呤、0.01mg/L萘乙酸、1g/L聚乙烯吡咯烷酮、20g/L蔗糖、6g/L琼脂。
3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述增殖培养基由以下组分组成：MS、2mg/L6-苄基腺嘌呤、0.1mg/L萘乙酸、20g/L蔗糖、6g/L琼脂。
4.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述生根培养基由以下组分组成：1/2MS、0.2mg/L萘乙酸0.8mg/L3-吲哚丁酸、20g/L蔗糖、6g/L琼脂、0.2mg/L活性炭。
5.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述初代培养基灭菌前pH调至6.0；所述增殖培养基灭菌前pH调至6.0，所述生根培养基灭菌前pH调至6.0。
6.权1-权5任一所述的培养基在组织培养红叶黄连木上的应用。
7.一种组织培养红叶黄连木的培养方法，其特征在于：所述培养方法包括以下步骤：
A、采集一年生半木质化的红叶黄连木的植物组织，先用洗涤剂溶液浸泡15-25min，刷洗腋芽部位后放在流水下冲洗过夜；在无菌的操作台上，先用75％酒精处理20-40s，用无菌水清洗，再用0.1％的升汞处理8-12min，再用无菌水清洗，晾干得培养材料；
B、将A步骤得到的培养材料接种到权1-权5任一所述的初代培养基上，诱导腋芽萌发然后将所得培养物放在光照培养条件下进行初代培养得分化出的芽；
C、将B步骤所得初代培养分化出的芽，在无菌操作台上切取下来，放在权1-权5任一所述的增殖培养基上进行丛生芽诱导；
D、将红叶黄连木增殖的丛生芽分离成单株，将其接种到权1-权5任一所述的生根培养基上，然后将所得培养基在光照培养条件下进行培养。
8.根据权利要求7所述的培养方法，其特征在于：所述B步骤中光照培养的条件为温度为25±2℃，光照2500Lx，光照时间12h/d。
9.根据权利要求7所述的培养方法，其特征在于：所述D步骤中光照培养的条件为温度为25±2℃，光照2500Lx，光照时间12h/d。
10.根据权利要求7所述的培养方法，其特征在于：所述A步骤中植物组织为顶芽或腋芽茎段。
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