CN102771392A - 红叶黄连木组培快繁工艺 - Google Patents
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- Y02P60/216—
Abstract
本发明公开了红叶黄连木组培快繁工艺，它包括以下步骤：A、采集黄连木成熟种子，先用硫酸消化，去外种皮；再灭菌；然后将种子接种于未添加任何激素的MS基本培养基上；B、将无菌实生苗切成带芽茎段，去掉部分枝叶，接种于生根培养基上，或者先接种于增殖培养基上后再转接于生根培养基上；C、将组培苗进行炼苗移栽。本发明的有益效果是：本发明的改进了组织培养方法，优化培养基配方，能够比较容易地获得无菌苗，并且无菌苗能进行快速繁殖，并且生长健壮、旺盛；自然条件下繁殖困难或者缓慢的黄连木，通过本发明可以快速获得大量、高质量的试管苗应用于栽培和生产，且通过本工艺获得的植株后代出现变异的几率低。
Description
技术领域
本发明涉及植物组培快繁技术领域，特别是一种红叶黄连木组培快繁工艺。
背景技术
黄连木(Pistacia chinensis)，又名楷树等，属于漆树科黄连木属，是一种优良用材和观赏落叶乔木。在我国分布广泛，北至河北、 山东，南至广东、 广西， 东到台湾，西至四川、云南都有野生和栽培黄连木，其中以河北、 河南、 山西、 陕西等省最多。黄连木用途十分广泛,，种子含油率42. 5%，出油率20. 0%～30. 0%，已被国家林业局定为“十一五”期间重点发展的林业生物质能源树种之一，具有极高的经济价值。且具有很高的观赏价值，入秋后可显现红、橙、黄绚丽秋景, 具有很高的观赏价值。
目前黄连木繁殖主要是通过扦插和种子繁殖。但是，由于黄连木的种子发芽率极低，而且扦插难以成活，因此通过组织培养技术可以快速繁殖获得植株。有关黄连木的组织培养快速繁殖技术已有一些报道，但仍然存在一些问题。种子萌发率低，难获得无菌实生苗；而茎节段组织培养容易污染、褐变率高、 萌芽缓慢、 新芽易枯死等，难以获得无菌苗。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种比较容易地获得无菌苗，并且无菌苗能进行快速繁殖，并且生长健壮、旺盛的红叶黄连木组培快繁工艺。
本发明的目的通过以下技术方案来实现：红叶黄连木组培快繁工艺，它包括以下步骤：
A、无菌实生苗的获得，采集黄连木成熟种子，先用50～70%硫酸消化12～24h后，去外种皮；再用60～80% 酒精灭菌2～4min，升汞灭菌15～25min，无菌水清洗5～6遍；然后在超净工作台上用钳子夹开种壳，将种子接种于未添加任何激素的MS基本培养基上，先进行3d暗培养3～7天，后进行光/暗培养16hr/8hr，培养室温度为25～28℃；观察记录，1～2月后可见部分种子萌发，长成完整植株，得到无菌实生苗；
B、黄连木组培快繁，将无菌实生苗切成带芽茎段，去掉部分枝叶，接种于生根培养基上，组培苗的培养温度均为25～28℃，光/暗培养16/8h，接种12～16天可见接种基部略膨大并生根，继续培养1～2周，根生长良好；
C、组培苗炼苗和移栽，培养4～6周后，待植株长到7～10 cm，根亦生长良好，茎干粗壮，将组培苗进行炼苗移栽；炼苗时先将培养瓶薄膜露出缝隙，放置过夜，然后取出试管苗将培养基清洗干净，移入盆钵，种于大棚。
所述的步骤B还包括以下操作：无菌实生苗切成带芽茎段，去掉部分枝叶后，先接种于增殖培养基上后再转接于生根培养基上。
所述的步骤B中的生根培养基是指MS+NAA0.3mg/L+6-BA0.1mg/L+活性炭0.3%+蔗糖30g/L+琼脂粉8mg/L，调节其pH为6.0～6.4，煮开熬化分装后，高压灭菌。
所述的步骤B中的生根培养基是指1/2MS+NAA0.3mg/L+6-BA0.1mg/L+活性炭0.3%+蔗糖30g/L+琼脂粉8mg/L，调节其pH为6.0～6.4，煮开熬化分装后，高压灭菌。
所述的步骤B中的增殖培养基包括MS+6-BA 1.0～2.0mg/L+NAA0.3mg/L，调节其pH为6.0～6.4，煮开熬化分装后，高压灭菌。
所述的步骤B还包括以下操作：培养4～6周后，进行茎节段培养瓶中扩繁。
所述的步骤C中的大棚中需要保持湿度，并先用黑色遮阳网进行部分遮光，后逐渐打开，使棚内移栽苗适应外部光照。
所述的步骤C中大棚内的培养基质为草炭土混合蛭石。
本发明具有以下优点：本发明的改进了组织培养方法，优化培养基配方，能够比较容易地获得无菌苗，并且无菌苗能进行快速繁殖，并且生长健壮、旺盛。
自然条件下繁殖困难或者缓慢的黄连木，通过本发明可以快速获得大量、高质量的试管苗应用于栽培和生产。
本发明是从野外采集的红叶黄连木成熟种子，将此种红叶黄连木种子得到无菌实生苗，再用无菌实生苗进行节段法组培快繁的一种技术，解决了黄连木种子繁殖效率低的问题，可以快速为黄连木能源林的建设提供充足的种苗；且通过本工艺获得的植株后代出现变异的几率低。
附图说明
图1 为本发明的种子萌发的示意图
图2 为本发明的组培继代苗的示意图
图3 为本发明的组培苗生根的示意图
图4 为本发明生长健壮的试管苗的示意图
图5 为本发明试管苗移栽成活的示意图
图6 为试管苗移栽后生长1年后的示意图。
具体实施方式
下面结合附图及实施例对本发明做进一步的描述：
实施例1：
红叶黄连木组培快繁工艺，它包括以下步骤：
A、无菌实生苗的获得，野外采集黄连木成熟种子，先用50%硫酸消化12后，去外种皮；再用60% 酒精灭菌4min，升汞灭菌15min，无菌水清洗5遍；然后在超净工作台上用钳子夹开种壳，将种子接种于未添加任何激素的MS基本培养基上，所述的MS培养基不添加任何植物生长调节剂（植物激素类），先进行3d暗培养3～7天，后进行光/暗培养16hr/8hr，培养室温度为25℃；观察记录，1月后可见部分种子萌发，长成完整植株，得到无菌实生苗；
B、黄连木组培快繁，无菌苗用节段法进行组培快繁，将无菌实生苗切成带芽茎段，去掉部分枝叶，接种于生根培养基上，组培苗的培养温度均为25℃，光/暗培养16/8h，接种12天可见接种基部略膨大并生根，继续培养1周，根生长良好；
C、组培苗炼苗和移栽，培养6周后，待植株长到7～10 cm，根亦生长良好，茎干粗壮，可继续进行茎节段培养瓶中扩繁，亦可将组培苗进行炼苗移栽；炼苗时先将培养瓶薄膜露出缝隙，但不可完全揭开，以免失水萎焉，放置过夜，然后取出试管苗将培养基清洗干净，移入盆钵，种于大棚；
所述的步骤B中的生根培养基是指MS+NAA0.3mg/L+6-BA0.1mg/L+活性炭0.3%+蔗糖30g/L+琼脂粉8mg/L，调节其pH为6.0～6.4，煮开熬化分装后，高压灭菌。
所述的步骤B中的生根培养基是指1/2MS+NAA0.3mg/L+6-BA0.1mg/L+活性炭0.3%+蔗糖30g/L+琼脂粉8mg/L，调节其pH为6.0～6.4，煮开熬化分装后，高压灭菌。如转接时间较短，采用此培养基可加快生根速度。
所述的步骤B还包括以下操作：培养4周后，进行茎节段培养瓶中扩繁。
所述的步骤C中的大棚中需要保持湿度，并先用黑色遮阳网进行部分遮光，后逐渐打开，使棚内移栽苗适应外部光照。
所述的步骤C中大棚内的培养基质为草炭土混合蛭石。
实施例2：
红叶黄连木组培快繁工艺，它包括以下步骤：
A、无菌实生苗的获得，野外采集黄连木成熟种子，先用70%硫酸消化12后，去外种皮；再用80% 酒精灭菌2min，升汞灭菌25min，无菌水清洗6遍；然后在超净工作台上用钳子夹开种壳，将种子接种于未添加任何激素的MS基本培养基上，所述的MS培养基不添加任何植物生长调节剂（植物激素类），先进行3d暗培养3～7天，后进行光/暗培养16hr/8hr，培养室温度为28℃；观察记录， 2月后可见部分种子萌发，长成完整植株，得到无菌实生苗；
B、黄连木组培快繁，无菌苗用节段法进行组培快繁，将无菌实生苗切成带芽茎段，去掉部分枝叶，先接种于增殖培养基上后再转接于生根培养基上，组培苗的培养温度均为28℃，光/暗培养16/8h，接种16天可见接种基部略膨大并生根，继续培养2周，根生长良好；
C、组培苗炼苗和移栽，培养4周后，待植株长到7～10 cm，根亦生长良好，茎干粗壮，可继续进行茎节段培养瓶中扩繁，亦可将组培苗进行炼苗移栽；炼苗时先将培养瓶薄膜露出缝隙，但不可完全揭开，以免失水萎焉，放置过夜，然后取出试管苗将培养基清洗干净，移入盆钵，种于大棚；
所述的步骤B中的生根培养基是指MS+NAA0.3mg/L+6-BA0.1mg/L+活性炭0.3%+蔗糖30g/L+琼脂粉8mg/L，调节其pH为6.0～6.4，煮开熬化分装后，高压灭菌。
所述的步骤B中的生根培养基是指1/2MS+NAA0.3mg/L+6-BA0.1mg/L+活性炭0.3%+蔗糖30g/L+琼脂粉8mg/L，调节其pH为6.0～6.4，煮开熬化分装后，高压灭菌，如转接时间较短，采用此培养基可加快生根速度。
所述的步骤B中的增殖培养基包括MS+6-BA 1.0～2.0mg/L+NAA0.3mg/L，调节其pH为6.0～6.4，煮开熬化分装后，高压灭菌。如需更快速繁殖可转接于此培养基上，这种培养基繁殖效率较快，但基部容易着生愈伤组织，且茎干较纤弱，生根状态较差，快繁后需将其转接于生根培养基上进行壮苗生长。
所述的步骤B还包括以下操作：培养6周后，进行茎节段培养瓶中扩繁。
所述的步骤C中的大棚中需要保持湿度，并先用黑色遮阳网进行部分遮光，后逐渐打开，使棚内移栽苗适应外部光照。
所述的步骤C中大棚内的培养基质为草炭土混合蛭石。
实施例3：
红叶黄连木组培快繁工艺，它包括以下步骤：
A、无菌实生苗的获得，野外采集黄连木成熟种子，先用60%硫酸消化18h后，去外种皮；再用70% 酒精灭菌3min，升汞灭菌20min，无菌水清洗5遍；然后在超净工作台上用钳子夹开种壳，将种子接种于未添加任何激素的MS基本培养基上，所述的MS培养基不添加任何植物生长调节剂（植物激素类），先进行3d暗培养3～7天，后进行光/暗培养16hr/8hr，培养室温度为26℃；观察记录，一个半月后可见部分种子萌发，长成完整植株，得到无菌实生苗；
B、黄连木组培快繁，无菌苗用节段法进行组培快繁，将无菌实生苗切成带芽茎段，去掉部分枝叶，先接种于增殖培养基上后再转接于生根培养基上，组培苗的培养温度均为27℃，光/暗培养16/8h，接种14天可见接种基部略膨大并生根，继续培养1.5周，根生长良好；
C、组培苗炼苗和移栽，培养5周后，待植株长到7～10 cm，根亦生长良好，茎干粗壮，可继续进行茎节段培养瓶中扩繁，亦可将组培苗进行炼苗移栽；炼苗时先将培养瓶薄膜露出缝隙，但不可完全揭开，以免失水萎焉，放置过夜，然后取出试管苗将培养基清洗干净，移入盆钵，种于大棚；
所述的步骤B中的生根培养基是指MS+NAA0.3mg/L+6-BA0.1mg/L+活性炭0.3%+蔗糖30g/L+琼脂粉8mg/L，调节其pH为6.0～6.4，煮开熬化分装后，高压灭菌。
所述的步骤B中的生根培养基是指1/2MS+NAA0.3mg/L+6-BA0.1mg/L+活性炭0.3%+蔗糖30g/L+琼脂粉8mg/L，调节其pH为6.0～6.4，煮开熬化分装后，高压灭菌。如转接时间较短，采用此培养基可加快生根速度。
所述的步骤B中的增殖培养基包括MS+6-BA 1.0～2.0mg/L+NAA0.3mg/L，调节其pH为6.0～6.4，煮开熬化分装后，高压灭菌。如需更快速繁殖可转接于此培养基上，这种培养基繁殖效率较快，但基部容易着生愈伤组织，且茎干较纤弱，生根状态较差，快繁后需将其转接于生根培养基上进行壮苗生长。
所述的步骤B还包括以下操作：培养5周后，进行茎节段培养瓶中扩繁。
所述的步骤C中的大棚中需要保持湿度，并先用黑色遮阳网进行部分遮光，后逐渐打开，使棚内移栽苗适应外部光照。
所述的步骤C中大棚内的培养基质为草炭土混合蛭石。
结果：试管苗的建立和移栽，如图1-6所示。种子经过硫酸处理后，如图1所示，发芽率能达到40-60%，获得的无菌苗生长良好。经过多次茎节段继代繁殖，获得生长良好的一批试管苗，如图2、图3、图4所示。观察显示，试管苗的叶片与户外成苗叶片有差异。试管苗的叶片成锯齿状，而成苗后是全缘叶片。但是试管苗在自然状态下，经过一段时间生长，成苗后亦为全缘叶片。如图5所示，试管苗移栽成活；移栽后1年，如图6所示，植株高度可超过1m。
Claims (8)
1.红叶黄连木组培快繁工艺，其特征在于：它包括以下步骤：
A、无菌实生苗的获得，采集黄连木成熟种子，先用50～70%硫酸消化12～24h后，去外种皮；再用60～80% 酒精灭菌2～4min，升汞灭菌15～25min，无菌水清洗5～6遍；然后在超净工作台上用钳子夹开种壳，将种子接种于未添加任何激素的MS基本培养基上，先进行3d暗培养3～7天，后进行光/暗培养16hr/8hr，培养室温度为25～28℃；观察记录，1～2月后部分种子萌发，长成完整植株；
B、黄连木组培快繁，将无菌实生苗切成带芽茎段，去掉部分枝叶，接种于生根培养基上，组培苗的培养温度均为25～28℃，光/暗培养16/8h，接种12～16天，接种基部略膨大并生根，继续培养1～2周，根生长良好；
C、组培苗炼苗和移栽，培养4～6周后，待植株长到7～10 cm，根亦生长良好，茎干粗壮，将组培苗进行炼苗移栽；炼苗时先将培养瓶薄膜露出缝隙，放置过夜，然后取出试管苗将培养基清洗干净，移入盆钵，种于大棚。
2.根据权利要求1所述的红叶黄连木组培快繁工艺，其特征在于：所述的步骤B还包括以下操作：无菌实生苗切成带芽茎段，去掉部分枝叶后，先接种于增殖培养基上后再转接于生根培养基上。
3.根据权利要求1或2所述的红叶黄连木组培快繁工艺，其特征在于：所述的步骤B中的生根培养基是指MS+NAA0.3mg/L+6-BA0.1mg/L+活性炭0.3%+蔗糖30g/L+琼脂粉8mg/L，调节其pH为6.0～6.4，煮开熬化分装后，高压灭菌。
4.根据权利要求1或2所述的红叶黄连木组培快繁工艺，其特征在于：所述的步骤B中的生根培养基是指1/2MS+NAA0.3mg/L+6-BA0.1mg/L+活性炭0.3%+蔗糖30g/L+琼脂粉8mg/L，调节其pH为6.0～6.4，煮开熬化分装后，高压灭菌。
5.根据权利要求2所述的红叶黄连木组培快繁工艺，其特征在于：所述的步骤B中的增殖培养基包括MS+6-BA 1.0～2.0mg/L+NAA0.3mg/L，调节其pH为6.0～6.4，煮开熬化分装后，高压灭菌。
6.根据权利要求1所述的红叶黄连木组培快繁工艺，其特征在于：所述的步骤B还包括以下操作：培养4～6周后，进行茎节段培养瓶中扩繁。
7.根据权利要求1所述的红叶黄连木组培快繁工艺，其特征在于：所述的步骤C中的大棚中需要保持湿度，并先用黑色遮阳网进行部分遮光，后逐渐打开，使棚内移栽苗适应外部光照。
8.根据权利要求1所述的红叶黄连木组培快繁工艺，其特征在于：所述的步骤C中大棚内的培养基质为草炭土混合蛭石。
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| CN102138524A (zh) * | 2011-01-07 | 2011-08-03 | 中国科学院合肥物质科学研究院 | 一种黄连木茎段快速繁殖的方法 |
| CN102144457A (zh) * | 2010-02-04 | 2011-08-10 | 李洁 | 一种黄连木培育方法 |
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2012
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Patent Citations (2)
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| CN102144457A (zh) * | 2010-02-04 | 2011-08-10 | 李洁 | 一种黄连木培育方法 |
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