CN104429941A

CN104429941A - 一种互叶白千层的离体快繁技术

Info

Publication number: CN104429941A
Application number: CN201410574261.4A
Authority: CN
Inventors: 杨业容
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2014-10-24
Filing date: 2014-10-24
Publication date: 2015-03-25

Abstract

一种互叶白千层的离体快繁技术，涉及互叶白千层（ Melaleuca ahemifolia）通过离体快繁技术获得优质种苗的育苗方法。本发明以互叶白千层幼嫩茎段为外植体，经过外植体选择及消毒、初代培养、增殖培养、瓶内生根、炼苗移栽等过程从而实现了互叶白千层离体快繁。为满足对互叶白千层种苗的需求、加速互叶白千层良种的推广具有重要的现实意义。

Description

一种互叶白千层的离体快繁技术

技术领域

本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种互叶白千层的离体快繁技术。

背景技术

互叶白千层（Melaleuca ahemifolia）又称茶油树，是桃金娘科白千层属香料植物。互叶白千层主产于澳大利亚新南威尔士洲北部沿海，被称为澳大利亚黄金，是澳洲土著传说中著名的神奇肌肤治疗用品。其枝叶富含芳香油，即茶树油（Tea Tree Oil）被广泛用于香料调味业、香水、化妆业等。

我国从上世纪90年代开始在广西、广东、福建等地引种互叶白千层。由于互叶白千层的种子发育不全，常败育，且种子发芽率低，致使优良种苗匮乏，制约了互叶白千层的推广种植。因此，有必要建立一种互叶白千层离体快繁技术，为其良种快速繁殖提供技术支撑和保障，也为满足我国对互叶白千层种苗的需求、加速互叶白千层良种的推广种植具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供出一种互叶白千层离体快繁技术，通过外植体选择及消毒、初代培养、增殖培养、瓶内生根、炼苗移栽等过程实现了互叶白千层离体快繁，从而实现了本发明的目的。

本发明的一种互叶白千层离体快繁技术，包括以下的步骤：

（1）外植体的消毒及初代培养：选取生长健壮无病虫的幼树当年生的幼嫩茎作为外植体,经消毒后接种到初代培养基上,先在25～28℃条件下全暗培养15～20天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为1000～1500lx，培养温度为25～28℃条件下培养，直至诱导形成不定芽。

（2）增殖培养：将不定芽转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养直至叶腋处萌生一个侧芽，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为1000～1500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养直至各侧芽伸长到1～2cm。

（3）瓶内生根：将高度约为1～2cm的侧芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养3～7天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为2000～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根。

（4）炼苗移栽：互叶白千层瓶内生根20～30天后，置于自然光照下炼苗5～7天后，洗净根部培养基，移栽由黄心土：河沙＝3：1混合成的基质中。

上述步骤（1）所述的外植体消毒使用的方法是剪取当年生长的互叶白千层枝梢1cm～2cm，置于自来水冲洗2～4h，然后在超净工作台中以70%～80%乙醇浸泡5～10s，0.1%升汞溶液消毒8～20min，再用无菌水清洗3～5次，擦干后切成长度为0.5～1.2cm的茎段。

上述步骤（1）所述的初代培养基为：MS+1～2mg/L6-BA+0.1～1mg/L NAA+2.0%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭+0.01～0.05mmol/L La(NO₃)₂，pH值为5.4～5.8;

上述步骤（2）所述的增殖培养基为MS+0.5～1mg/L6-BA+0.1～1mg/L NAA+2.0%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭+0.1～0.5mg/L IBA，pH值为5.4～5.8。

上述步骤（3）所述的生根培养基为1/2MS+0.5～1mg/LNAA+0.1～1mg/L IBA+1.0%～1.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂,pH值为5.4～5.8。

目前国内外已有互叶白千层离体快繁技术的相关报道，但技术还不够成熟，存在芽诱导率、增殖倍数、生根率低，增殖时间长、移栽存活率低等问题。而本发明具有芽诱导时间、增殖时间、生根时间短特点，提高了快繁效率。通过本发明育成的互叶白千层试管苗移栽成活率达到95%以上，可以有效为互叶白千层组培工厂化生产节约了成本和空间、缩短了生产周期。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。

具体实施

（1）外植体的消毒及初代培养：选取生长健壮无病虫的幼树当年生的幼嫩茎作为外植体,经置于自来水冲洗4h后在超净工作台中以75%乙醇浸泡10s，0.1%升汞溶液消毒20min，再用无菌水清洗3次，擦干后切成长度为0.5～1.2cm的茎段接种到初代培养基上,先在28℃条件下全暗培养20天，然后置于每天光照10小时，光照强度为1500lx，培养温度为25～28℃条件下培养45天形成不定芽。所述初代培养基为：MS2mg/L6-BA+1mg/L NAA+3.5%蔗糖+0.5%琼脂+0.05%活性炭+0.01mmol/L La(NO₃)₂，pH值为5.8

（2）增殖培养：将不定芽转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在28℃条件下全暗培养直至叶腋处萌生一个侧芽，然后置于每天光照12小时，光照强度为1500lx，培养温度为28℃的条件下培养直至各侧芽伸长到1～2cm。增殖培养基为MS+0.8mg/L6-BA+0.4mg/L NAA+3.5%蔗糖+0.35%琼脂+0.1%活性炭+0.1mg/L IBA，pH值为5.8

（3）瓶内生根：将高度约为1～2cm的侧芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在28℃条件下全暗培养7天，然后置于每天光照12小时，光照强度为2500lx，培养温度为28℃的条件下培养30天后生着根。生根培养基为1/2MS+0.5mg/LNAA+0.2mg/L IBA+1.0%蔗糖+0.35%琼脂,pH值为5.8。

（4）炼苗移栽：互叶白千层瓶内生根20天后，置于自然光照下炼苗5～7天后，洗净根部培养基，移栽由黄心土：河沙＝3：1混合成的基质中。

Claims

1.一种互叶白千层的离体快繁技术，其特征在于包括以下步骤：

（1）外植体的消毒及初代培养：选取生长健壮无病虫的幼树当年生的幼嫩茎作为外植体,经消毒后接种到初代培养基上,先在25～28℃条件下全暗培养15～20天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为1000～1500lx，培养温度为25～28℃条件下培养，直至诱导形成不定芽；

（2）增殖培养：将不定芽转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养直至叶腋处萌生一个侧芽，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为1000～1500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养直至各侧芽伸长到1～2cm；

（3）瓶内生根：将高度约为1～2cm的侧芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养3～7天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为2000～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根；

2.根据权利要求1所述的一种互叶白千层的离体快繁技术，其特征在于步骤（1）所述的外植体消毒使用的方法是剪取当年生长的互叶白千层枝梢1cm～2cm，置于自来水冲洗2～4h，然后在超净工作台中以70%～80%乙醇浸泡5～10s，0.1%升汞溶液消毒8～20min，再用无菌水清洗3～5次，擦干后切成长度为0.5～1.2cm的茎段。

3.根据权利要求1所述的一种互叶白千层的离体快繁技术，其特征在于步骤（1）所述的初代培养基为：MS+1～2mg/L6-BA+0.1～1mg/L NAA+2.0%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭+0.01～0.05mmol/L La(NO₃)₂，pH值为5.4～5.8。

4.根据权利要求1所述的一种互叶白千层的离体快繁技术，其特征在于步骤（2）所述的增殖培养基为MS+0.5～1mg/L6-BA+0.1～1mg/L NAA+2.0%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭+0.1～0.5mg/L IBA，pH值为5.4～5.8。

5.根据权利要求1所述的一种互叶白千层的离体快繁技术，其特征在于步骤（3）所述的生根培养基为1/2MS+0.5～1mg/LNAA+0.1～1mg/L IBA+1.0%～1.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂,pH值为5.4～5.8。