CN112425506A - 一种黄金艾草的组织培养快速繁殖方法 - Google Patents

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王继华
梅瑜
蔡时可
顾艳
孙铭阳
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Abstract

本发明提供了一种黄金艾草的组织培养快速繁殖方法，主要是通过摘取野生黄金艾草的腋芽茎段或顶芽作为外植体，然后将经过灭菌处理的外植体置于诱导培养基上培养至产生不定芽，再将不定芽放入新的诱导培养基上继代培养以诱导不定芽快速增殖，最后将单株植株放入生根培养基上培养，诱导不定芽生根得到大量繁殖植株。本发明所公开的黄金艾草的组织培养快速繁殖方法能使1个腋芽在2个月内产生10‑20个新芽，提高了黄金艾草的繁殖能力，缩短育苗时间，节省种植成本，也为黄金艾草的工厂化育苗提供了技术保障。

Description

一种黄金艾草的组织培养快速繁殖方法
技术领域
本发明属于植物组织培养领域，具体是通过诱导黄金艾草的顶芽或腋芽产生不定芽使黄金艾草快速繁殖的方法。
背景技术
艾草为菊科蒿属多年生草本植物，全草入药，是我国传统的中药材，具有温经止血、祛湿散寒、通经活络等功效。我国艾草资源丰富，有186种，44变种，隶属于蒿亚属和龙蒿亚属。其中，黄金艾蒿(Artemisia vulgaris Variegate)是一种重要的蒿属植物，在华南地区均有栽培。相较于其他同属植物，黄金艾蒿苦味相对清淡，嫩芽和幼叶可作菜蔬，而且其干燥的叶片也是制作艾柱、艾条的优质原料，黄金艾蒿对菊长管蚜具有极高抗性，也是植物源农药的优良潜在原料。解决的是如何提升黄金艾草的产量，建立一套黄金艾草种苗的组织培养快速繁殖技术，促进黄金艾草商品化规模种植是我们急需解决的问题。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明的目的是建立一种黄金艾草的种苗组织培养快速繁殖方法，以提高黄金艾草的繁殖系数，使种苗生产满足药用生产的需要。
实现本发明的目的所采用的技术方案如下：
一种黄金艾草的组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：
1)采摘黄金艾草植株，切段，使每段含有一个腋芽或顶芽；
2)将步骤1)中含有腋芽或顶芽的切段植株放入0.1％升汞溶液中消毒，再用无菌水清洗三次，每次清洗2-3min；
3)在超净工作台上将步骤2)中含有腋芽或顶芽的切段植株接种到诱导培养基中进行培养，培养过程中采用强度为1900-2100Lx的人工光照，同时控制培养温度为25-30℃，至长出不定芽，然后将不定芽转接至与诱导培养基成分相同的新诱导培养基中进行多次继代培养，至不定芽的高度生长至0.8-1.5cm；
4)将步骤3)中的不定芽单株接种到生根培养基上，培养3-4周，待植株长至2.5-3.5cm，其人工光照强度和培养温度与步骤3)相同；
5)将步骤4)中的植株炼苗处理一段时间，然后移栽至人工大棚，其中人工大棚的土壤是由泥炭土和园土混合而成的土壤。
优选地，所述步骤2)中含有腋芽或顶芽的切段植株放入0.1％升汞溶液中的消毒时间为8-10min。
优选地，所述步骤3)中的诱导培养基是由以下成分组成：1L MS培养基中添加有3mg 6-BA和0.1mg IBA，然后用NaOH调节诱导培养基的pH为5.5-6.2。
优选地，所述步骤4)中的生根培养基是由以下成分组成：1L MS培养基中添加有0.1mg NAA和0.5mg IBA，然后用NaOH调节诱导培养基的pH为5.5-6.2。
优选地，所述步骤5)中植株炼苗处理天数为5-7天。
优选地，所述步骤5)中泥炭土和园土的质量比为2-4:1。
本发明的有益技术效果是：
本发明通过在特定的培养基上培育含有腋芽的野生黄金艾草植物的茎段，建立了一套使黄金艾草组织快速繁殖方法，提高了黄金艾草的繁殖能力，缩短育苗时间，节省种植成本，也为黄金艾草的工厂化育苗提供了技术保障。该组织培养快速繁殖方法能使1个腋芽在2个月内产生10-20个新芽，极大提高了黄金艾草种苗繁殖能力，为工业化育苗和黄金艾草产业化发展的提供了有力的保障。且该方法能够全年生产种苗，有助于黄金艾草植物规模化种植，也为商业化种植提供保障。同时，对野生黄金艾草的种子资源进行收集和保存，有助于人们进一步研究野生黄金艾草的潜在药用价值。
附图说明
图1为本发明实施例一中以野生黄金艾草的腋芽茎段作为外植体，经消毒后，在超净工作台上将外植体接种到诱导培养基的培育图。
图2为本发明实施例一中腋芽茎段在诱导培养基中经过多次继代培养增生了大量不定芽。
图3为本发明实施例一中不定芽单株在生根培养基上生长出根系后形成的再生植株。
图4为本发明实施例一中不定芽单株在生根培养基上生长出的根系。
图5为本发明实施例一中植株炼苗处理一段时间后移栽至人工大棚的植株。
图6为对比试验的结果图，对比试验a组、b组、c组、d组均采用实施例所述的方法，并且在步骤3)中的诱导培养基中6-BA的含量依次为0.1mg、0.3mg、0.5mg、0.8mg，由图可见，a组和b组的生根植株比较稀疏，c组获得的生根植株的生长状态较为健壮，d组的生根植株长势优于a组和b组但是弱于c组。
具体实施方式
下面，结合附图以及具体实施方式，对本发明做进一步描述：
实施例一
一种黄金艾草的组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：
1)采摘黄金艾草植株，切段，使每段含有一个腋芽或顶芽(如图1所示)；
2)将步骤1)中含有腋芽或顶芽的切段植株放入0.1％升汞溶液中消毒，消毒时间为8min，再用无菌水清洗三次，每次清洗2min；
3)在超净工作台上将步骤2)中含有腋芽或顶芽的切段植株接种到诱导培养基中进行培养，培养过程中采用强度为1900Lx的人工光照，同时控制培养温度为25℃，至长出不定芽，然后将不定芽转接至与诱导培养基成分相同的新诱导培养基中进行多次继代培养，至不定芽的高度生长至0.8cm(如图2所示)；
所述步骤3)中的诱导培养基是由以下成分组成：1L MS培养基中添加有0.5mg 6-BA和0.05mg IBA，然后用NaOH调节诱导培养基的pH为5.5；
4)将步骤3)中的不定芽单株接种到生根培养基上，培养3-4周，待植株长至2.5-3.5cm(如图3所示)，其人工光照强度和培养温度与步骤3)相同；生根培养基是由以下成分组成：1L MS培养基中添加有0.05mg NAA和0.4mg IBA，然后用NaOH调节诱导培养基的pH为5.5；
5)将步骤4)中的植株炼苗处理一段时间，然后移栽至人工大棚，其中人工大棚的土壤是由泥炭土和园土混合而成的土壤；植株炼苗处理天数为5-7天；中泥炭土和园土的质量比为2-4:1(如图5所示)。炼苗处理使植株定植后能够迅速适应不良环境条件，缩短缓苗时间，增强植株对低温、大风等的抵抗能力。
实施例二
一种黄金艾草的组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：
1)采摘黄金艾草植株，切段，使每段含有一个腋芽或顶芽；
2)将步骤1)中含有腋芽或顶芽的切段植株放入0.1％升汞溶液中消毒，消毒时间为10min，再用无菌水清洗三次，每次清洗2-3min；
3)在超净工作台上将步骤2)中含有腋芽或顶芽的切段植株接种到诱导培养基中进行培养，培养过程中采用强度为2100Lx的人工光照，同时控制培养温度为30℃，至长出不定芽，然后将不定芽转接至与诱导培养基成分相同的新诱导培养基中进行多次继代培养，至不定芽的高度生长至0.8-1.5cm；
所述步骤3)中的诱导培养基是由以下成分组成：1L MS培养基中添加有0.1mg 6-BA和0.15mg IBA，然后用NaOH调节诱导培养基的pH为6.2；
4)将步骤3)中的不定芽单株接种到生根培养基上，培养3-4周，待植株长至2.5-3.5cm，其人工光照强度和培养温度与步骤3)相同；生根培养基是由以下成分组成：1L MS培养基中添加有0.15mg NAA和0.6mg IBA，然后用NaOH调节诱导培养基的pH为5.5-6.2；
5)将步骤4)中的植株炼苗处理一段时间，然后移栽至人工大棚，其中人工大棚的土壤是由泥炭土和园土混合而成的土壤；中植株炼苗处理天数为5-7天；中泥炭土和园土的质量比为2-4:1。
实施例三
一种黄金艾草的组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：
1)采摘黄金艾草植株，切段，使每段含有一个腋芽或顶芽；
2)将步骤1)中含有腋芽或顶芽的切段植株放入0.1％升汞溶液中消毒，消毒时间为8-10min，再用无菌水清洗三次，每次清洗2-3min；
3)在超净工作台上将步骤2)中含有腋芽或顶芽的切段植株接种到诱导培养基中进行培养，培养过程中采用强度为2000Lx的人工光照，同时控制培养温度为30℃，至长出不定芽，然后将不定芽转接至与诱导培养基成分相同的新诱导培养基中进行多次继代培养，至不定芽的高度生长至0.8-1.5cm；
所述步骤3)中的诱导培养基是由以下成分组成：1L MS培养基中添加有0.8mg 6-BA和0.1mg IBA，然后用NaOH调节诱导培养基的pH为5.5-6.2；
4)将步骤3)中的不定芽单株接种到生根培养基上，培养3-4周，待植株长至2.5-3.5cm，其人工光照强度和培养温度与步骤3)相同；生根培养基是由以下成分组成：1L MS培养基中添加有0.1mg NAA和0.5mg IBA，然后用NaOH调节诱导培养基的pH为5.5-6.2；
5)将步骤4)中的植株炼苗处理一段时间，然后移栽至人工大棚，其中人工大棚的土壤是由泥炭土和园土混合而成的土壤；中植株炼苗处理天数为5-7天；中泥炭土和园土的质量比为2-4:1。
对于本领域的技术人员来说，可根据以上描述的技术方案以及构思，做出其它各种相应的改变以及变形，而所有的这些改变以及变形都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种黄金艾草的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)采摘黄金艾草植株，切段，使每段含有一个腋芽或顶芽；
2)将步骤1)中含有腋芽或顶芽的切段植株放入0.1％升汞溶液中消毒，再用无菌水清洗三次，每次清洗2-3min；
3)在超净工作台上将步骤2)中含有腋芽或顶芽的切段植株接种到诱导培养基中进行培养，培养过程中采用强度为1900-2100Lx的人工光照，同时控制培养温度为25-30℃，至长出不定芽，然后将不定芽转接至与诱导培养基成分相同的新诱导培养基中进行多次继代培养，至不定芽的高度生长至0.8-1.5cm；
所述步骤3)中的诱导培养基是由以下成分组成：1L MS培养基中添加有0.1～0.8mg 6-BA和0.05～0.15mg IBA，然后用NaOH调节诱导培养基的pH为5.5-6.2；
4)将步骤3)中的不定芽单株接种到生根培养基上，培养3-4周，待植株长至2.5-3.5cm，其人工光照强度和培养温度与步骤3)相同；
5)将步骤4)中的植株炼苗处理一段时间，然后移栽至人工大棚，其中人工大棚的土壤是由泥炭土和园土混合而成的土壤。
2.根据权利要求1所述的黄金艾草的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤2)中含有腋芽或顶芽的切段植株放入0.1％升汞溶液中的消毒时间为8-10min。
3.根据权利要求1所述的黄金艾草的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤4)中的生根培养基是由以下成分组成：1L MS培养基中添加有0.05～0.15mg NAA和0.4～0.6mg IBA，然后用NaOH调节诱导培养基的pH为5.5-6.2。
4.根据权利要求1所述的黄金艾草的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤5)中植株炼苗处理天数为5-7天。
5.根据权利要求1所述的黄金艾草的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤5)中泥炭土和园土的质量比为2-4:1。
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