CN115299345B - 一种互叶白千层一步法组织培养方法 - Google Patents
一种互叶白千层一步法组织培养方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115299345B CN115299345B CN202211079692.4A CN202211079692A CN115299345B CN 115299345 B CN115299345 B CN 115299345B CN 202211079692 A CN202211079692 A CN 202211079692A CN 115299345 B CN115299345 B CN 115299345B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- culture medium
- culture
- melaleuca alternifolia
- proliferation
- seedlings
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/002—Culture media for tissue culture
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明公开了一种互叶白千层一步法组织培养方法。本发明进行芽初步诱导、增殖、伸长及生根培养,均采用同一种含有一种低浓度激素的培养基,为MS培养基添加0.05mg/LBA、30g/L蔗糖和8g/L琼脂,pH5.8。利用该方法从野外取材到获得栽培苗,整个操作过程仅需4个月。之后,试管苗以42天为一个增殖周期,试管苗增殖效率4倍左右,试管苗移栽到土壤的存活率达100%。本发明方法既节约培养成本又简化操作,增殖时间短、生根率高、移栽成活率高,极大地缩短了互叶白千层种苗的生产周期,减少种苗变异风险;可满足目前对互叶白千层优良品种种苗生产技术的需要,在其优良种质维持中具有显著的科学、经济和社会效益意义。
Description
技术领域
本发明属于植物生物技术领域,具体涉及一种互叶白千层一步法组织培养快速获得大量种苗的方法。
背景技术
互叶白千层(Melaleuca alternifolia(Maiden&Betche)Cheel),也称澳洲茶树、茶油树,为桃金娘科白千层属植物,原是澳大利亚著名的芳香油料树种:枝叶富含4-松油醇、桉叶素、α-松油烯、γ-松油烯等,被广泛用于制药、香料、日代、食品等行业。于20世纪90年代初引种进我国,现在广东、广西、福建、云南、贵州等地多有种植,是经济价值极高的人工林。
目前,互叶白千层的繁殖有3种:种子繁殖、枝条扦插、组织培养快繁。采用组织培养快速繁殖技术由于其在保持母本优良性状、脱毒培养、并可在短时间内获大量栽培苗,且技术可适合进行大规模标准化种苗生产,该技术一经问世,已在植物种苗生产中发挥极其重要的作用。同样地,在白千层引进国内种植后,就陆续有互叶白千层组织培养技术的研究和专利的报道,甚至2019年12月至2020年4月制订了“广东省地方标准《互叶白千层组培育苗技术规程》”。目前,互叶白千层的组织培养包括有外植体选材、消毒、初代培养、增殖培养、瓶内生根、炼苗移栽等过程,特别是目前互叶白千层的组培研究论文和专利中有关初代培养、增殖培养、瓶内生根均采用添加高浓度的不同种类的激素,以诱导侧芽萌发、获得丛生芽或芽增殖、生根,因此,需要配制不同培养基,试管苗历经初代培养、增殖培养、瓶内生根过程,生产周期长,既不利于种苗生产又不利于种苗优良性状的保持。另一方面,长时间使用高浓度的激素、多种激素进行组织培养,存在不利于芽的继代增殖、正常发育和优良性状的保持、增加组培苗变异风险的缺点。
发明内容
本发明的目的是针对目前互叶白千层组培技术中芽诱导、芽增殖、芽生根均采用多种激素组合的不同培养基,所需的操作环节多、成本高、激素浓度高或种类多致试管苗变异风险系数高、周期长等缺点,开发了一种只采用一种培养基同时进行芽诱导、芽增殖、芽生根的组培快繁方法。
本发明的一种互叶白千层一步法组织培养方法,包括以下步骤:
S1.切取互叶白千层新梢顶端的嫩枝,去除叶片,经消毒后切成长度1cm的茎段,然后接种到一步培养基上,先在黑暗下培养7天,然后置于光照度50μmol·m–2·s–1,光照12h/天条件下培养,直到侧芽萌发;
S2.将长至1cm长的侧芽切下转接至新鲜的一步培养基,光下培养,侧芽增殖且伸长、生根,至长根的芽高达2.5cm时,将试管苗移出进行炼苗;
所述的一步培养基:为MS培养基添加0.05mg/L BA、30g/L蔗糖和8g/L琼脂,pH5.8。
优选,所述的互叶白千层新梢顶端的嫩枝为顶端6cm以内的嫩枝。
优选,所述的步骤S1的消毒为:将嫩枝用自来水冲洗干净后,移入含质量分数0.05%吐温80的质量分数0.1%升汞水溶液中浸泡15min,取出用无菌水冲洗6遍,然后置无菌纸上吸干水分。
优选,所述的步骤S2的练苗为:洗去试管苗根部培养基,定植在装有栽培基质的盆中,覆盖保鲜膜,3天后在保鲜膜上打孔透气,7天后揭开保鲜膜。
优选,所述的栽培基质为蛭石。
优选,所述的方法,还包括如下的步骤S3:将步骤S2获得的试管苗的芽切为长度1cm左右的茎段外植体或将丛生芽分割开作为增殖用外植体,外植体转接至新鲜的一步培养基进行新一轮的芽增殖、伸长及生根培养。
优选,所述的方法,培养温度为24±1℃。
所述的MS培养基为国际通用的培养基,其成份和配置方法见Toshio Murashige,Folke Skoog(1962)A Revised Medium For Rapid Growth And Bio Assays WithTobacco Tissue Cultures.Physiollogia Plantarum,15:473-497。
目前已有互叶白千层组织培养快繁技术的报道,但其中的培养方法均采用多种激素组合、高浓度激素配比,从芽诱导、芽增殖到生根培养均采用多种含有不同激素配比的培养基,高浓度激素刺激下的芽增殖及生根培养,可能会造成芽变、继代效率低、生根率低等问题,不利于种质优良性状的保持,极大地影响互叶白千层林业的生产。
本发明进行芽初步诱导、增殖、伸长及生根培养,均采用同一种含有一种低浓度激素的培养基。从野外取材到获得栽培苗,整个操作过程仅需4个月。之后,试管苗以42天为一个增殖周期,试管苗增殖效率4倍左右,试管苗移栽到土壤的存活率达100%。本发明方法既节约培养成本又简化操作,增殖时间短、生根率高、移栽成活率高,极大地缩短了互叶白千层种苗的生产周期,减少种苗变异风险;可满足目前对互叶白千层优良品种种苗生产技术的需要,在其优良种质维持中具有显著的科学、经济和社会效益意义。
本发明具有以下优点:
(1)节约培养成本
本发明采用的培养基,只含一种低浓度的激素,极大地节约了试管苗培养的成本。
(2)简化操作过程
目前互叶白千层通过组织培养方法获得栽培苗历经芽初代培养、芽增殖培养、芽生根培养,所需的培养基均不同。本发明只采用一种培养基,同时进行芽诱导、芽增殖、芽伸长及生根培养,极大地简化了互叶白千层的组织培养操作。
(3)缩短试管苗生产周期
本发明采用一种培养基,同时进行芽诱导、芽增殖、芽伸长及生根培养,每42天为一个试管苗增殖周期,极大地缩短了试管苗的生产时间。
(4)试管苗移栽成活率高
本发明技术培育的试管苗,100%移栽成活。
附图说明
图1为茎段外植体消毒后接种培养基35天时茎段萌发的侧芽长势。
图2为将茎段外植体萌发长约1cm的侧芽切下接种新培养基。
图3为长约1cm的侧芽接种生长42天时的表型。
图4为试管苗移栽温室2个月时的表型。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明,而不是对本发明的限制。
实施例1
本实施例的互叶白千层一步法组织培养方法,包括以下步骤:
a.外植体的消毒:选取健康的互叶白千层新梢,切取新梢约6cm长的嫩枝,去除叶片,用自来水冲洗干净后,移入含质量分数0.05%吐温80的质量分数0.1%升汞水溶液中浸泡15min,取出用无菌水冲洗6遍。然后置无菌纸上吸干水分,切成长度1cm的茎段(互叶白千层的茎间特短,长度1cm的茎段上有5个以上节点)为外植体用于接种。经消毒后接种到一步培养基上,先在24±1℃、黑暗下培养7天,然后置于光照度50μmol·m–2·s–1、光照12h/天条件下培养,直到侧芽萌发(图1)。所述的一步培养基:为MS培养基添加0.05mg/L BA(benzyladenine)、30g/L蔗糖和8g/L琼脂,pH5.8。
b.芽增殖、伸长及生根的培养:将长约1cm的侧芽切下转接至新鲜的一步培养基(图2),光下培养,侧芽增殖且伸长、生根(图3),直至长根的芽高约2.5cm时,将长根的试管苗移出进行炼苗;或将其切为长度1cm左右的茎段外植体、或将丛生芽分割开作为增殖用外植体,外植体转接至新鲜的一步培养基进行新一轮的“芽增殖、伸长及生根培养”,期间每21天更换新鲜培养基。
c.试管苗的炼苗移栽:将长根的、长高至约2.5cm的试管苗从培养瓶中移出,洗去根部培养基,定植在装有蛭石栽培基质的盆中,覆盖保鲜膜,3天后在保鲜膜上打上几个小孔,7天后揭开保鲜膜,存活率100%。定植栽培基质中2个月时的生长状态好(图4)。
关于消毒的方法:
实施例2
本实施例与实施例1的方法其余步骤均相同,不同仅在于:本实施例使用含质量分数0.05%吐温80的质量分数0.1%升汞水溶液浸泡的时间为10min,对应的消毒效果如表1所示。
实施例3
本实施例与实施例1的方法其余步骤均相同,不同仅在于:本实施例使用含质量分数0.05%吐温80的质量分数0.1%升汞水溶液浸泡的时间为20min,对应的消毒效果如表1所示。
实施例4
本实施例与实施例1的方法其余步骤均相同,不同仅在于:本实施例在使用含质量分数0.05%吐温80的质量分数0.1%升汞水溶液浸泡15min前,先用体积分数75%乙醇水溶液浸泡30s,对应的消毒效果如表1所示。
对比例1
本对比例与实施例1的方法其余步骤均相同,不同仅在于:本对比例将实施例1中的使用含质量分数0.05%吐温80的质量分数0.%升汞水溶液浸泡15min替换为用质量分数5%的NaClO水溶液浸泡15min,对应的消毒效果如表1所示。
对比例2
本对比例与实施例1的方法其余步骤均相同,不同仅在于:本对比例使用的外植体不是去除叶片的茎段,而是带有叶片的茎段,对应的消毒效果如表1所示。
分别按照实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、对比例1和对比例2的方法进行平行培养,培养时间21d,经统计,结果如表1所示。
表1不同外植体类型、消毒溶液和消毒时间对互叶白千外植体消毒的影响
从表1可以看出,以去叶茎段为外植体,采用含质量分数0.05%吐温80的质量分数0.1%升汞水溶液浸泡消毒15min,在培养21d后外植体污染率为低于10%,消毒效果远远优于实施例2、3,对比例1、对比例2。实施例1的外植体存活率超过83%,远远优于实施例2、实施例3、实施例4、对比例1、对比例2。
关于初代芽诱导、增殖、伸长及生根培养基的BA浓度:
实施例5
本实施例与实施例1的方法其余步骤均相同,不同仅在于:所用的一步培养基中BA浓度与实施例1的不同,本实施例的一步培养基含有的BA为0.5mg/L;培养后初代芽诱导、芽增殖、伸长和生根结果如表2所示。
实施例6
本实施例与实施例1的方法其余步骤均相同,不同仅在于:所用的一步培养基中BA浓度与实施例1的不同,本实施例的一步培养基含有的BA为0.01mg/L,培养后初代芽诱导、芽增殖、伸长和生根结果如表2所示。
对比例3
本对比例与实施例1的方法其余步骤均相同,不同仅在于:所用的培养基中不含BA,培养后初代芽诱导、芽增殖、伸长和生根结果如表2所示。
对比例4
本对比例与实施例1的方法其余步骤均相同,不同仅在于:所用的基本培养基都是1/2MS培养基(指将MS培养基中的所有元素减半得到的培养基),不含BA;即本对比例的培养基为:1/2MS培养基添加30g/L蔗糖和8g/L琼脂,pH5.8;培养后初代芽诱导、芽增殖、伸长和生根结果如表2所示。
分别按照实施例1、实施例5、实施例6、对比例3和对比例4的方法进行平行培养,培养时间42d,经统计,初代芽诱导、芽增殖、伸长和生根培养结果如表2所示。
表2不同培养基对互叶白千层初代芽诱导、增殖、伸长及生根的影响
从表2可以看出,培养基为MS培养基添加0.01-0.5mg/L BA的情况下,初代芽的诱导率均为100%,效果高于对比例3和对比例4;培养基为MS培养基添加0.05-0.5mg/L BA的情况下,芽增殖系数最高,效果高于实施例6、对比例3和对比例4;生根培养以实施例1的最高,生根率100%,远远优于实施例5、实施例6、对比例3、对比例4。综上,培养基中添加0.05mg/L BA在芽初代培养、芽增殖、生根培养中效果最佳,培养42d后初代芽诱导率达100%,增殖系数达4.2,生根率达100%且根部长势好。
Claims (4)
1.一种互叶白千层一步法组织培养方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1. 切取互叶白千层新梢顶端的嫩枝,去除叶片,经消毒后切成长度1 cm的茎段,然后接种到一步培养基上,先在黑暗下培养7天,然后置于光照度50 μmol·m–2·s–1,光照12 h/天条件下培养,直到侧芽萌发;所述的消毒为:将嫩枝用自来水冲洗干净后,移入含质量分数0.05%吐温80的质量分数0.1%升汞水溶液中浸泡15 min,取出用无菌水冲洗6遍,然后置无菌纸上吸干水分;
S2. 将长至1 cm长的侧芽切下转接至新鲜的一步培养基,光下培养,侧芽增殖且伸长、生根,至长根的芽高达2.5 cm时,将试管苗移出进行炼苗;
所述的一步培养基:为MS培养基添加0.05 mg/L BA、30 g/L蔗糖和8 g/L琼脂,pH5.8。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的互叶白千层新梢顶端的嫩枝为顶端6 cm以内的嫩枝。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的步骤S2的炼苗为:洗去试管苗根部培养基,定植在装有栽培基质的盆中,覆盖保鲜膜,3天后在保鲜膜上打孔透气,7天后揭开保鲜膜。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述的栽培基质为蛭石。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211079692.4A CN115299345B (zh) | 2022-09-05 | 2022-09-05 | 一种互叶白千层一步法组织培养方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211079692.4A CN115299345B (zh) | 2022-09-05 | 2022-09-05 | 一种互叶白千层一步法组织培养方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN115299345A CN115299345A (zh) | 2022-11-08 |
CN115299345B true CN115299345B (zh) | 2023-06-16 |
Family
ID=83866891
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202211079692.4A Active CN115299345B (zh) | 2022-09-05 | 2022-09-05 | 一种互叶白千层一步法组织培养方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN115299345B (zh) |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101032223A (zh) * | 2006-08-24 | 2007-09-12 | 厦门涌泉科技有限公司 | 香料植物互叶白千层的组织培养方法 |
CN103931493A (zh) * | 2013-01-18 | 2014-07-23 | 成都中医药大学 | 一种半夏一步成苗的组织培养方法以及新的半夏培养基 |
CN104429941A (zh) * | 2014-10-24 | 2015-03-25 | 杨业容 | 一种互叶白千层的离体快繁技术 |
CN105613293A (zh) * | 2016-01-15 | 2016-06-01 | 广西壮族自治区林业科学研究院 | 4-松油醇型互叶白千层组培继代增殖方法及其培养基 |
CN108651283A (zh) * | 2018-05-17 | 2018-10-16 | 邵武市闽澳农业发展有限公司 | 一种互叶白千层组培苗生根培养方法 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3310392A4 (en) * | 2015-06-19 | 2019-03-27 | Global Health Solutions, LLC | VASELINE ADMINISTRATION SYSTEMS FOR ACTIVE INGREDIENTS |
-
2022
- 2022-09-05 CN CN202211079692.4A patent/CN115299345B/zh active Active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101032223A (zh) * | 2006-08-24 | 2007-09-12 | 厦门涌泉科技有限公司 | 香料植物互叶白千层的组织培养方法 |
CN103931493A (zh) * | 2013-01-18 | 2014-07-23 | 成都中医药大学 | 一种半夏一步成苗的组织培养方法以及新的半夏培养基 |
CN104429941A (zh) * | 2014-10-24 | 2015-03-25 | 杨业容 | 一种互叶白千层的离体快繁技术 |
CN105613293A (zh) * | 2016-01-15 | 2016-06-01 | 广西壮族自治区林业科学研究院 | 4-松油醇型互叶白千层组培继代增殖方法及其培养基 |
CN108651283A (zh) * | 2018-05-17 | 2018-10-16 | 邵武市闽澳农业发展有限公司 | 一种互叶白千层组培苗生根培养方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
互叶白千层的快繁技术;殷勤;杜尚广;张青;罗丽萍;;江苏农业科学(第03期) * |
互叶白千层研究进展;陈碧华;吴丽君;李乾振;王清玲;苏建华;;福建林业科技(第04期) * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN115299345A (zh) | 2022-11-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101347097A (zh) | 木薯体细胞胚胎发生再生植株快繁方法 | |
CN112586346B (zh) | 一种树茄及其培育方法、快繁方法和应用 | |
CN102217551B (zh) | 一种鼓槌石斛芽尖组织培养快速繁殖方法 | |
CN108739370B (zh) | 一种利用成熟莲胚进行快繁的方法 | |
CN111264383B (zh) | 一种同步选育和保存姜花属杂交新品系及种质的方法 | |
CN105850728A (zh) | 一种荆半夏种茎快速繁殖方法 | |
CN109717075A (zh) | 一种通过诱导不定芽获得大花萱草再生植株的方法 | |
CN110583488A (zh) | 石蒜属新品种‘桃红’组培快繁技术体系的建立方法 | |
CN112438201A (zh) | 一种酿酒葡萄的组培快繁方法 | |
CN113207692A (zh) | 一种鼠尾草种苗的繁育方法 | |
CN112655553A (zh) | 一种猫须草无菌短枝快速繁殖的方法 | |
CN112655559A (zh) | 一种茶树的组培快速繁殖方法 | |
CN109601388B (zh) | 一种杂交铁线莲的组织培养快速繁殖方法 | |
CN112042540A (zh) | 一种东陵八仙花的快繁方法 | |
CN109526746B (zh) | 一种白鹤芋叶柄组织培养方法 | |
CN108541555B (zh) | 一种东南景天组培苗的移栽营养基质及栽培管理方法 | |
CN108243961B (zh) | 一种五岭龙胆种子再生体系建立及快速繁育方法 | |
CN115299345B (zh) | 一种互叶白千层一步法组织培养方法 | |
CN114600772B (zh) | 一种深山含笑的组培方法和快速繁殖方法 | |
CN115589947A (zh) | 一种蒿柳组培快繁的方法及其应用 | |
CN111758573B (zh) | 一种美味猕猴桃砧木组培快繁方法 | |
CN109526748B (zh) | 一种白鹤芋花序组织培养方法 | |
CN110637725B (zh) | 一种组织培养快速繁殖木薯种苗的方法 | |
CN114303951A (zh) | 一种深蓝鼠尾草种苗的繁育方法 | |
CN108064697B (zh) | 一种龙牙楤木组培苗的高效诱导及移栽方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |