CN114303951A - 一种深蓝鼠尾草种苗的繁育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种深蓝鼠尾草种苗的繁育方法，包括如下步骤：步骤一：外植体的选择和处理，选取无病虫害的半硬化幼枝作为外植体，切分成长度为1‑2cm且带有节间的茎段，灭菌；步骤二：不定芽的诱导，将经过所述步骤一处理的外植体，接种于诱导培养基中，进行正常光照培养4周，获得不定芽；步骤三：增殖培养，将所述步骤二中获得的外植体切成1‑2cm的茎段，接种至增殖培养基中，培养4周，获得丛生芽；步骤四：生根培养，将所述步骤三中获得丛生芽切分成单株，接种于生根培养基中，培养3周，获得生根苗；步骤五：练苗和移栽，将所述步骤四中的试管苗预处理1周后，取出生根苗，清洗杀菌，种于配制好的基质中，练苗3周，获得鼠尾草再生植株。
Description
技术领域
本发明属于鼠尾草组织培养育种技术领域，尤其涉及一种深蓝鼠尾草种苗的繁育方法。
背景技术
‘深蓝’鼠尾草又名洋苏叶，别名尼加拉瓜鼠尾草，称瓜拉尼鼠尾草。是唇形科鼠尾草属多年生植物，成株高80cm，盆栽30-50cm，开蓝紫色至粉紫色花，有香味，叶有浓郁的香味。花可用于泡茶，散发清香味可清净体内油脂，帮助循环，能发挥美颜美容之功效。且能够从中提取精油，涂抹肌肤具有美肤的作用。喜温暖阳光充足的环境，我国长江以南地区可以露天越冬冬季宿根休眠，不择土壤，但不耐涝，且富含腐殖质，喜排水良好的砂质土壤，生长适应强。随着国内外专家对鼠尾草作用的不断开发，市场对于鼠尾草种苗的数量及质量需求越来越高。种子育苗法、茎芽扦插繁殖法、分株繁殖法等传统繁殖方法繁殖周期长、繁殖系数低、受季节限制，甚至还会造成产量减少、品种退化等问题。
近年来，植物组织培养技术在种苗繁育领域的广泛应用，有效的解决了传统繁殖方法的缺陷。相应的，将植物组织培养技术应用到‘深蓝’鼠尾草的种苗繁育中，可有效提高繁殖系数、缩短繁殖周期、不受季节限制、保持原有品种的优良性状。目前，关于‘深蓝’鼠尾草组织培养的研究报道较少。因此，笔者对‘深蓝’鼠尾草进行了组织培养的研究，为‘深蓝’鼠尾草种苗工厂化繁育提供技术依据。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种深蓝鼠尾草种苗的繁育方法，操作简便诱导率高，可达300％，增殖系数高，可达2.8，生根率可达100％，移栽成活率可达100％，克服了季节对种苗繁育的限制，获得的再生植有效保留母本的优良性状，是‘深蓝’鼠尾草种苗快速繁育的有效途径。
为了实现上述目的，本发明提供的一种深蓝鼠尾草种苗的繁育方法，包括如下步骤：
步骤一：外植体的选择和处理
选取无病虫害的半硬化幼枝作为外植体，去除叶片及叶柄，切分成长度为1-2cm且带有节间的茎段，使用灭菌剂灭菌，无菌水浸洗；
步骤二：不定芽的诱导
将经过所述步骤一处理的外植体，接种于诱导培养基中，进行正常光照培养4周，获得不定芽；其中，培养条件为：温度为(25±2)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000Lx；
步骤三：增殖培养
将所述步骤二中获得的外植体切成1-2cm的茎段，切除多余的叶片，接种至增殖培养基中，培养4周，获得丛生芽；培养条件为：温度为(25±2)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000Lx；
步骤四：生根培养
将所述步骤三中获得丛生芽切分成单株，接种于生根培养基中，培养3周，获得生根苗；培养条件为：温度为(25±2)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000Lx；
步骤五：练苗和移栽
将所述步骤四中的试管苗放在室温中，预处理1周后，取出生根苗，清洗掉培养基，在杀菌剂内浸泡30分钟，种于配制好的基质中，自然光下练苗3周，获得鼠尾草再生植株。
优选地，所述诱导培养基以MS培养基为基本培养基，添加6-BA浓度为0.5-2.0mg/L、NAA浓度为0.3-1.0mg/L、蔗糖30g/L和琼脂7.0g/L，PH为5.8-6.2；
优选地，所述增殖培养基以MS培养基为基本培养基，添加6-BA浓度为0.1-1.0mg/L、NAA浓度为0.1-0.5mg/L、蔗糖30g/L和琼脂7.0g/L，PH为5.8-6.2；
优选地，所述生根培养基以1/2MS培养基为基本培养基，添加IAA浓度为0.1-0.5mg/L、AC浓度为0.5g/L、蔗糖30g/L和琼脂7.0g/L，PH为5.8-6.2；
优选地，所述灭菌剂包括75％酒精和10％新洁尔灭，所述75％酒精和10％新洁尔灭灭菌时间分别是30s和20min；
优选地，所述步骤二中，将经过处理的所述外植体切除部分伤口垂直接种于培养基上，其下端插进培养基中，上端暴露在培养基上；
优选地，所述步骤三中进行切段的外植体株高度≥5cm；
优选地，所述步骤四中进行切分的外植体株高度≥5cm；
优选地，所述步骤五中的预处理，包括如下步骤：打开瓶盖倒入蒸馏水再将瓶盖盖在瓶口上，2-3天后拿掉瓶盖；放置在温室中弱光下2-3天，20-25℃保持瓶内有充足的蒸馏水；
优选地，所述步骤五中的基质由体积比为5：2.5：1.5：1的泥炭、珍珠岩、蛭石和稻壳炭组成。
本发明提供的一种深蓝鼠尾草种苗的繁育方法，具有如下有益效果：
1.本发明以‘深蓝’鼠尾草当年生的幼茎作为外植体材料，保证了供试材料的质量，诱导产生不定芽，4周后可以获得具有母本优良性状的再生植株，克服了以往通过诱导愈伤再分化植株时，后代出现变异等问题。
2.本发明在外植体的培育过程中，在外植体生长的不同阶段采用不同细胞分裂素6-BA和生长素NAA、IAA等激素浓度的配比，有利于外植体的生长发育，保障‘深蓝’鼠尾草试管苗的质量。
3.利用本发明的练苗、移栽技术，对试管苗进行驯化，使其完全适应外部环境，移栽成活率可达100％，获得质量优质的小苗。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，以助于理解本发明的内容。
本发明提供的一种深蓝鼠尾草种苗的繁育方法，包括以下步骤：
步骤一：外植体的选择和处理
于当年5-6月份选取无病虫害的幼枝(半硬化枝条)作为外植体，去除叶片及叶柄，切成1-2cm大小左右并带有节间的茎段，用洗洁精浸洗30min左右，流水冲洗2h，待用。在超净工作台上，先用75％的酒精灭菌30s，再用10％新洁尔灭灭菌20min，无菌水冲洗5遍，然后用无菌滤纸吸干外植体表面的水分，切除外植体两端部分组织，待用。
步骤二：不定芽的诱导
将经过处理的外植体，垂直接种于诱导培养基中(分清植物学上下端)，正常光照培养4周左右，诱导出不定芽，诱导率可达300％，
诱导培养条件为：温度(25±2)℃，光照时间12h/d，光照强度1500-2000Lx。
该诱导培养基为：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L。
步骤三：增殖培养
选取分化良好、生长情况基本一致(株高≥5cm)的试管苗，切成1-2cm的茎段，切除多余的叶片，每段带有至少一个节间及叶片，垂直接种至增殖培养基中，培养4周，获得丛生芽；增殖系数为2.8，不定芽生长健壮，叶片浓绿色。
培养条件为：温度(25±2)℃，光照时间12h/d，光照强度1500-2000LX。
所述增殖培养基为：MS+6-BA 0.3mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.0g/L。
步骤四：生根培养
选取分化良好、生长均匀(株高≥5cm)的丛生芽切分成单株，垂直接种于生根培养基中，培养3周，获得生根苗，生根率可达100％，根系乳白色，富有弹性。
培养条件为：温度(25±2)℃，光照时间12h/d，光照强度1500-2000Lx。
所述生根培养基为：1/2MS+IAA 0.3mg/L+AC 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.0g/L。
步骤五：练苗、移栽
预处理，将试管苗放在室温中，打开瓶盖倒入蒸馏水再将瓶盖盖在瓶口上(不拧紧)，2-3天后拿掉瓶盖；20-25℃保持瓶内有充足的蒸馏水，放置在温室中弱光下3-5天。取出生根苗，清洗掉培养基，杀菌剂浸泡30分钟，种于基质中，基质由体积比为5：2.5：1.5：1的泥炭、珍珠岩、蛭石和稻壳炭组成，自然光下练苗3周，成活率100％。获得鼠尾草穴盘苗，小苗生长健壮，叶片颜色浓绿。
本文中应用了具体个例对发明构思进行了详细阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离该发明构思的前提下，所做的任何显而易见的修改、等同替换或其他改进，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种深蓝鼠尾草种苗的繁育方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一：外植体的选择和处理
选取无病虫害的半硬化幼枝作为外植体，去除叶片及叶柄，切分成长度为1-2cm且带有节间的茎段，使用灭菌剂灭菌，无菌水浸洗；
步骤二：不定芽的诱导
将经过所述步骤一处理的外植体，接种于诱导培养基中，进行正常光照培养4周，获得不定芽；其中，培养条件为：温度为(25±2)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000Lx；
步骤三：增殖培养
将所述步骤二中获得的外植体切成1-2cm的茎段，切除多余的叶片，接种至增殖培养基中，培养4周，获得丛生芽；培养条件为：温度为(25±2)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000Lx；
步骤四：生根培养
将所述步骤三中获得丛生芽切分成单株，接种于生根培养基中，培养3周，获得生根苗；培养条件为：温度为(25±2)℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000Lx；
步骤五：练苗和移栽
将所述步骤四中的试管苗放在室温中，预处理1周后，取出生根苗，清洗掉培养基，在杀菌剂内浸泡30分钟，种于配制好的基质中，自然光下练苗3周，获得鼠尾草再生植株。
2.根据权利要求1所述的一种深蓝鼠尾草种苗的繁育方法，其特征在于，所述诱导培养基以MS培养基为基本培养基，添加6-BA浓度为0.5-2.0mg/L、NAA浓度为0.3-1.0mg/L、蔗糖30g/L和琼脂7.0g/L，PH为5.8-6.2。
3.根据权利要求1所述的一种深蓝鼠尾草种苗的繁育方法，其特征在于，所述增殖培养基以MS培养基为基本培养基，添加6-BA浓度为0.1-1.0mg/L、NAA浓度为0.1-0.5mg/L、蔗糖30g/L和琼脂7.0g/L，PH为5.8-6.2。
4.根据权利要求1所述的一种深蓝鼠尾草种苗的繁育方法，其特征在于，所述生根培养基以1/2MS培养基为基本培养基，添加IAA浓度为0.1-0.5mg/L、AC浓度为0.5g/L、蔗糖30g/L和琼脂7.0g/L，PH为5.8-6.2。
5.根据权利要求1所述的一种深蓝鼠尾草种苗的繁育方法，其特征在于，所述灭菌剂包括75％酒精和10％新洁尔灭，所述75％酒精和10％新洁尔灭灭菌时间分别是30s和20min。
6.根据权利要求1所述的一种深蓝鼠尾草种苗的繁育方法，其特征在于，所述步骤二中，将经过处理的所述外植体切除部分伤口垂直接种于培养基上，其下端插进培养基中，上端暴露在培养基上。
7.根据权利要求1所述的一种深蓝鼠尾草种苗的繁育方法，其特征在于，所述步骤三中进行切段的外植体株高度≥5cm。
8.根据权利要求1所述的一种深蓝鼠尾草种苗的繁育方法，其特征在于，所述步骤四中进行切分的外植体株高度≥5cm。
9.根据权利要求1所述的一种深蓝鼠尾草种苗的繁育方法，其特征在于，所述步骤五中的预处理，包括如下步骤：打开瓶盖倒入蒸馏水再将瓶盖盖在瓶口上，2-3天后拿掉瓶盖；放置在温室中弱光下2-3天，20-25℃保持瓶内有充足的蒸馏水。
10.根据权利要求1所述的一种深蓝鼠尾草种苗的繁育方法，其特征在于，所述步骤五中的基质由体积比为5：2.5：1.5：1的泥炭、珍珠岩、蛭石和稻壳炭组成。
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| CN202111675184.8A Pending CN114303951A (zh) | 2021-12-31 | 2021-12-31 | 一种深蓝鼠尾草种苗的繁育方法 |
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| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114303951A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116267614A (zh) * | 2023-03-23 | 2023-06-23 | 南京晓庄学院 | 一种金叶凤梨鼠尾草的组培快繁方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5869340A (en) * | 1996-12-20 | 1999-02-09 | University Of Massachusetts | Plant clones containing elevated secondary metabolite levels |
| US5908771A (en) * | 1997-01-31 | 1999-06-01 | R. J. Reynolds Tobacco Company | Method for regeneration of salvia species |
| CN101120654A (zh) * | 2007-09-07 | 2008-02-13 | 湖南农业大学 | 一种芡欧鼠尾草的组织培养方法 |
| CN109717075A (zh) * | 2017-10-27 | 2019-05-07 | 上海市农业科学院 | 一种通过诱导不定芽获得大花萱草再生植株的方法 |
| CN113207692A (zh) * | 2021-05-31 | 2021-08-06 | 上海应用技术大学 | 一种鼠尾草种苗的繁育方法 |
-
2021
- 2021-12-31 CN CN202111675184.8A patent/CN114303951A/zh active Pending
Patent Citations (5)
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| CN116267614A (zh) * | 2023-03-23 | 2023-06-23 | 南京晓庄学院 | 一种金叶凤梨鼠尾草的组培快繁方法 |
| CN116267614B (zh) * | 2023-03-23 | 2024-01-30 | 南京晓庄学院 | 一种金叶凤梨鼠尾草的组培快繁方法 |
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