CN112655564B

CN112655564B - 一种乌桕茎段高效再生体系的建立方法

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Publication number: CN112655564B
Application number: CN202110105357.6A
Authority: CN
Inventors: 隋德宗; 王保松; 宁坤; 马艳
Original assignee: Jinling Institute of Technology; Jiangsu Forestry Academy
Current assignee: Jinling Institute of Technology; Jiangsu Forestry Academy
Priority date: 2021-01-26
Filing date: 2021-01-26
Publication date: 2022-11-08
Anticipated expiration: 2041-01-26
Also published as: CN112655564A

Abstract

一种乌桕茎段高效再生体系的建立方法，其步骤如下：第一步：制备获得无菌材料‑无菌乌桕茎段；第二步：茎段诱导芽的萌发；第三步：芽诱导生根；第四步：炼苗和移栽。切取茎长1.0~1.5 cm的芽，以1/2MS为基本培养基，添加0.5 mg/L IBA和0.05 mg/L NAA，15~20 d内即可生根良好。乌桕幼苗在组培室内经历了两个阶段的逐步壮苗过程，移栽至草炭土、珍珠岩和蛭石（3:2:1）构成的混合基质，其土壤营养，含水量及通透性都有保障，移栽成活率大大提高。利用上述技术方法建立乌桕组培再生体系，操作简便，污染率低，成活率高，培养周期短。

Description

一种乌桕茎段高效再生体系的建立方法

技术领域

本发明提供了一种乌桕的再生体系建立方法，能够有效降低乌桕的培育成本。

背景技术

乌桕（Sapiumsebiserum）又名木蜡树、蜡子树，为大戟科乌桕属落叶乔木，喜光、耐旱、可耐短期积水，在含盐率0.3 %以下的盐碱地亦可生长。乌桕广泛分布于我国，多集中于长江及珠江流域等地栽培，为我国特有的经济树种。乌桕是我国四大木本油料植物之一，还是珍稀的园林绿化观赏树种，其树冠整齐，叶形秀丽，叶色入秋后红艳美观，可孤植、丛植于草坪、湖畔和池边，在园林绿化中可作为护堤树、庭荫树及行道树。

目前，乌桕的繁殖方式以播种和扦插为主，扦插或嫁接等繁殖虽可保持原株优良特性，但繁殖系数较低，严重影响良种推广进程。采用组培快繁技术，可在短期内获得大量优良无性系苗木，满足对优质种苗的需求。乌桕组培方面的研究也有少量报道，但存在着易褐化、落叶死苗等严重问题，同时会有组培效率低下，周期长的问题。

发明内容

本发明的目的是选用最佳的植物生长调节剂，优化乌桕离体快繁的过程，建立系统的微繁体系，在最短的时间内生产出大量优质乌桕种苗，进行大规模生产，以满足市场的需求，促进乌桕产业化的进一步发展。

本发明提供了如下的技术方案：

一种乌桕茎段高效再生体系的建立方法，其步骤如下：

第一步：制备获得无菌材料-无菌乌桕茎段；

第二步：茎段诱导芽的萌发；

第三步：芽诱导生根；

第四步：炼苗和移栽。

所述制备获得无菌材料-无菌乌桕茎段方法如下：

剪取生长健壮且无病虫害的乌桕当年生枝条，将枝条剪成1.5~3.0 cm长度的茎段，保证每个茎段上至少留有一个饱满的芽体，且芽的生长位置位于茎段上端1/3处。将剪好的茎段放入玻璃烧杯中，置于流动水下流动冲洗30~50 min。用1000倍的多菌灵溶液浸泡30~40 min，20%的84消毒液中浸泡30 s，将茎段用蒸馏水冲洗5次，放入超净工作台内。75%酒精浸泡30 s，放入15%次氯酸钠溶液（每升量中加入3滴吐温80）中浸泡10 min，无菌水冲洗5次，晾干。

所述的茎段诱导芽的萌发方法如下：

将获得的茎段外植体接种到芽诱导培养基中，培养基为NN69+0.5 mg/L TDZ +0.05 mg/L IBA，每升培养基中添加25 g 蔗糖和7.5 g 琼脂，pH调至5.8。在光照强度为2800 Lux、培养室温度为25±2 ℃、光周期为16 h/d下培养15~20 d；

所述的芽诱导生根方法如下：

将上一步培育良好的芽，在无菌条件下取出，切下茎长1.0~1.5 cm的芽，接种在诱导不定根的生根培养基上，生根培养基以1/2MS为基本培养基，添加0.5 mg/L IBA和0.05mg/L NAA，每升培养基中添加30 g 蔗糖和6.5 g 琼脂，pH调至5.8。在光照强度为2800Lux、培养室温度为25±2 ℃、光照条件为16 h/d下培养15~20 d；

所述的炼苗和移栽方法如下：

将已经生根良好的乌桕幼苗组培瓶进行开盖炼苗，首先开启三分之一大小的开口，组培室内放置3 d，再将瓶口完全开启，继续放置3 d。取出幼苗，用自来水洗净根部残留的培养基，移栽至草炭土、珍珠岩和蛭石（按照3:2:1比例）构成的混合基质。

上述技术方案可以看出，本发明有如下有益效果：

两次消毒，让无菌处理更彻底。

在15%的次氯酸钠溶液中每升量中加入3滴吐温80，吐温80是一种非离子型表面活性剂，可以使次氯酸钠消毒更加彻底。

选取乌桕当年生位于树冠上部外围的嫩枝，其生长旺盛，有机物质同化较快，里面营养充足，在培养过程中自身养分供给及营养吸收能力强，芽诱导培养基成分为NN69+0.5mg/L TDZ + 0.05 mg/L IBA。

切取茎长1.0~1.5 cm的芽，以1/2MS为基本生根培养基，添加0.5 mg/L IBA和0.05mg/L NAA，15~20 d内即可生根良好。

乌桕幼苗在组培室内经历了两个阶段的逐步壮苗过程，移栽至草炭土、珍珠岩和蛭石（3:2:1）构成的混合基质，其土壤营养，含水量及通透性都有保障，移栽成活率大大提高。

利用上述技术方法建立乌桕组培再生体系，操作简便，污染率低，成活率高，培养周期短。

附图说明

图1为本发明所述乌桕茎段诱导形成芽；

图2为本发明所述乌桕芽诱导生根。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出。

实施例1

1）无菌材料获得

剪取生长健壮且无病虫害的乌桕当年生枝条，将枝条剪成1.5 cm左右长度的茎段，共计600个，且保证每个茎段上留有一个饱满的芽体，且芽的生长位置位于茎段上端1/3处。将剪好的茎段放入玻璃烧杯中，置于自来水下流动冲洗30 min。用800倍的多菌灵溶液浸泡30 min，20%的84消毒液中浸泡30 s，将茎段用蒸馏水冲洗5次，放入超净工作台内。75%酒精浸泡30 s，放入15%次氯酸钠溶液（每升量中加入3滴吐温80）中分别浸泡6 min，无菌水冲洗5次，无菌滤纸吸干茎段表面的水分；

2）茎段诱导芽的萌发

将获得的茎段外植体平均的接种到三种不同芽诱导培养基中，芽诱导培养基的基本培养基分别为MS、WPM、NN69三种，分别添加0.5 mg/L TDZ + 0.05 mg/L IBA的激素组合，并每升培养基中添加25 g 蔗糖和7.5 g 琼脂，pH调至5.8。在光照强度为2800 Lux、培养室温度为25±2 ℃、光周期为16 h/d下培养15 d；

3）芽诱导生根

将获得的芽切下，转入生根培养基进行生根培养，无菌条件下取出诱导良好的芽，切下茎长1.0~1.5 cm的芽，平均的接种在4种不同的诱导不定根的生根培养基上。4种生根培养基分别以1/2MS、MS、1/2WPM、WPM为基本培养基，分别添加0.5 mg/L IBA和0.05 mg/LNAA，每升培养基中添加30 g 蔗糖和6.5 g 琼脂，pH调至5.8。在光照强度为2800 Lux，培养室温度为25±2 ℃，光照条件为16 h/d下培养15 d；

4）炼苗和移栽

实施例2

1）无菌材料获得

剪取生长健壮且无病虫害的乌桕当年生枝条，将枝条剪成2.0 cm左右长度的茎段，共计600个，保证每个茎段上留有一个饱满的芽体，且芽的生长位置位于茎段上端1/3处。将剪好的茎段放入玻璃烧杯中，置于自来水下流动冲洗40 min。用900倍的多菌灵溶液浸泡30 min，20%的84消毒液中浸泡30 s，将茎段用蒸馏水冲洗5次，放入超净工作台内，75%酒精浸泡30 s，放入15%次氯酸钠溶液（每升量中加入3滴吐温80）中分别浸泡8 min，无菌水冲洗5次，无菌滤纸吸干茎段表面的水分；

2）茎段诱导芽的萌发

将获得的茎段外植体接均等的分别种到3种不同的芽诱导培养基中，3种不同的芽诱导培养基的基本培养基分别为MS、WPM、NN69三种，分别添加0.5 mg/L TDZ + 0.05 mg/LIBA的激素组合，每升培养基中添加25 g 蔗糖和7.5 g 琼脂，pH调至6.0。在光照强度为2800 Lux、培养室温度为25±2 ℃、光周期为16 h/d下培养20 d；

3）芽诱导生根

将获得的芽切下，转入生根培养基进行生根培养，无菌条件下取出诱导良好的芽，切下茎长1.0~1.5 cm的芽，接种在4种诱导不定根的生根培养基上。4种生根培养基分别以1/2MS、MS、1/2WPM、WPM为基本培养基，分别添加0.5 mg/L IBA和0.05 mg/L NAA，每升培养基中添加30 g 蔗糖和6.5 g 琼脂，pH调至6.0。在光照强度为2800 Lux，培养室温度为25±2 ℃，光照条件为16 h/d下培养20 d；

4）炼苗和移栽

实施例3

1）无菌材料获得

剪取生长健壮且无病虫害的乌桕当年生枝条，将枝条剪成3.0 cm左右长度的茎段，共600个，保证每个茎段上留有一个饱满的芽体，且芽的生长位置位于茎段上端1/3处。将剪好的茎段放入玻璃烧杯中，置于自来水下流动冲洗100 min。用1000倍的多菌灵溶液浸泡30 min，20%的84消毒液中浸泡30 s，将茎段用蒸馏水冲洗5次，放入超净工作台内。75%酒精浸泡30 s，放入15%次氯酸钠溶液（每升量中加入3滴吐温80）中分别浸泡10 min，无菌水冲洗5次，无菌滤纸吸干茎段表面的水分；

2）茎段诱导芽的萌发

将获得的茎段外植体分别接种到3种不同基本培养基的芽诱导培养基中，基本培养基分别为MS、WPM、NN69三种，添加0.5 mg/L TDZ + 0.05 mg/L IBA的激素组合，每升培养基中添加25 g 蔗糖和7.5 g 琼脂，pH调至5.5，在光照强度为2800 Lux，培养室温度为25±2 ℃，光周期为16 h/d下培养17 d；

3）芽诱导生根

将获得的芽切下，转入生根培养基进行生根培养，无菌条件下取出诱导良好的芽，切下茎长1.0~1.5 cm的芽，接种在诱导不定根的生根培养基上。生根培养基以1/2MS、MS、1/2WPM、WPM为基本培养基，分别添加0.5 mg/L IBA和0.05 mg/L NAA，每升培养基中添加30 g蔗糖和6.5 g 琼脂，pH调至5.8。在光照强度为2800 Lux、培养室温度为25±2 ℃、光照条件为16 h/d下培养15~20 d；

4）炼苗和移栽

以上实施例的相关数据如下：

由以上实验结果可知，两次消毒，让无菌处理更彻底，配合芽诱导培养基NN69+0.5mg/L TDZ + 0.05 mg/L IBA的使用，正常萌发率达到88%以上，操作简便，污染率低，萌发率高。

选取乌桕当年生位于树冠上部外围的嫩枝，其生长旺盛，有机物质同化较快，里面营养充足，在培养过程中自身养分供给及营养吸收能力强，芽诱导培养基成分为NN69+0.5mg/L TDZ + 0.05 mg/L IBA，诱导芽萌发率高达88.0%以上。

切取茎长1.0~1.5cm的芽，以1/2MS为基本培养基，添加0.5 mg/L IBA和0.05 mg/LNAA，15~20 d内即可生根良好，诱导生根率高达88.1%以上。

乌桕幼苗在组培室内经历了两个阶段的逐步壮苗过程，移栽至草炭土、珍珠岩和蛭石（3:2:1）构成的混合基质，其土壤营养，含水量及通透性都有保障，移栽成活率大大提高至90%以上。

Claims

1.一种乌桕茎段高效再生体系的建立方法，其特征在于：其步骤包括

第一步：制备获得无菌材料-无菌乌桕茎段；

第二步：茎段诱导芽的萌发；

第三步：芽诱导生根；

第四步：炼苗和移栽；

所述的制备获得无菌材料-无菌乌桕茎段具体为：剪取乌桕当年生枝条，将枝条剪成1.5 cm~3.0 cm长度的茎段，将剪好的茎段在流动水下冲洗20~40 min，之后分别用多菌灵溶液、消毒液浸泡后，将茎段用无菌水冲洗数次，然后分别用酒精、次氯酸钠溶液浸泡，将茎段用无菌水冲洗数次，晾干；

所述的茎段诱导芽的萌发为第一步获得的无菌乌桕茎段接种到芽诱导培养基中，在光照强度为2800 Lux、培养室温度为25±2 ℃、光周期为16 h/d下培养15~20 d；

所述的芽诱导培养基为NN69+0.5 mg/L TDZ + 0.05 mg/L IBA，每升培养基中添加蔗糖和琼脂，pH调至5.5~6.0；

所述的芽诱导生根为在无菌条件下取出第二步获得的诱导良好的芽，切下茎长1.0~1.5 cm的芽，接种在诱导不定根的生根培养基上，在光照强度为2800 Lux、培养室温度为25±2 ℃、光照条件为16 h/d下培养15~20 d；

所述的生根培养基以1/2MS为基本培养基，添加0.5 mg/L IBA和0.05 mg/L NAA，每升培养基中添加蔗糖和琼脂，pH调至5.5~6.0。

2.根据权利要求1所述的一种乌桕茎段高效再生体系的建立方法，其特征在于：所述的茎段上有一个饱满的芽体。

3.根据权利要求2所述的一种乌桕茎段高效再生体系的建立方法，其特征在于：所述的芽体的位置在茎段上端1/3处。

4.根据权利要求1所述的一种乌桕茎段高效再生体系的建立方法，其特征在于：所述的第四步为将上一步已经生根良好的乌桕幼苗进行开盖炼苗，首先开启三分之一大小的开口，组培室内放置3 d，再将瓶口完全开启，继续放置3 d，取出幼苗，用自来水洗净根部残留的培养基，移栽至混合基质，继续培育至苗高30~50 cm后，正常移植。

5.根据权利要求4所述的一种乌桕茎段高效再生体系的建立方法，其特征在于：所述的混合基质为草炭土、珍珠岩和蛭石构成，比例为3:2:1。