CN1166285C - 猪笼草的组织培养繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及猪笼草的组织培养繁殖方法和所使用的培养基。猪笼草，常用于观赏和各种花卉展览，近年来，其独特的造型和奇特的生活习性引起人们的重视。但我国目前的商品猪笼草多为从国外引进的成品。猪笼草的繁殖常采用分株、压条等方法，繁殖系数低，不能满足种苗市场的需要。本发明提供多种猪笼草的组织培养繁殖方法和所使用的培养基，所述方法包括不定芽诱导和继代增殖、生根培养、和试管苗移栽等步骤，其外植体消毒方法及培养基成分独特，而且方法简单实惠，应用价值较高。
Description
技术领域
本发明涉及猪笼草的组织培养繁殖方法和所使用的培养基。
技术背景
猪笼草(Nepenthes L.)又称猪仔笼、食虫草、担水桶、公仔瓶、招财进宝、水罐植物等，在我国，人们给它取了一个吉祥的商业名字“袋袋平安”。它属于猪笼草科猪笼草属，本科植物仅此一属，有70余个种，分布于东半球热带地区，如东南亚、澳大利亚、非洲马达加斯加等地，1789年引种到英国，然后在欧洲主要植物园内广泛栽培用于观赏。1882年育成了第一种猪笼草园艺栽培种：绯红猪笼草(N.coccinea)。到了20世纪中叶，猪笼草的育种、繁殖和生产开始产业化，并有大量的观赏品种进入家庭观赏。20世纪90年代以后，美国、日本、法国、德国、澳大利亚等国均成立了国际食虫植物协会，其中猪笼草作为最重要的食虫植物特别引人注目。我国本属原产的种类仅有猪笼草(Nepenthes misabilis)一种，分布于我国南部广东等省，为热带食虫植物的代表种。
猪笼草虽然在我国的广东等地虽有野生分布，但在20世纪80年代以前，很少应用于栽培观赏。直到改革开放以后，我国多家植物园陆续从国外引进了多姿多彩的猪笼草园艺观赏种用于观赏和各种花卉展览后，其独特的造型和奇特的生活习性才真正引起人们的重视。但我国目前的商品猪笼草多为从国外引进的成品。
猪笼草美丽的叶笼特别诱人，其大小和颜色各不相同，有的象小酒杯、有的象罐子、有的象竹筒，颜色五彩缤纷，具有极高的观赏价值，常用于室内盆栽或吊盆观赏，可点缀客室、花架、阳台和窗台或悬挂小庭园树下和走廊旁，其造型十分优雅别致，趣味盎然，深受人们的喜爱。猪笼草也可药用，其性味甘凉，可清热止咳，利尿，主治急慢性肝炎，叶片可制作凉茶，能避暑消热。其市场应用前景相当巨大。
猪笼草的繁殖常采用分株、压条等繁殖方法，繁殖系数低，以组织培养法可以加速其繁殖速度获得大量试管苗，为满足种苗市场的需要提供一条有效的途径。
目前，国内外未对猪笼草广泛引进的观赏品种，或杂交种进行组织培养和大规模生产，也未见有专利申请的报道。
发明内容
本发明提供多种猪笼草的组织培养繁殖方法和所使用的培养基。其外植体消毒方法、培养基成分独特，而且方法简单实惠，应用价值高。包括下例步骤：
1.材料：本发明已实验的材料有猪笼草(Nepenthes misabilis)、杂种猪笼草
(Nepenthes
x Dyeriana)、长柔猪笼草(N.villosa)、带翅猪笼草(N.alata)、中间猪笼草(N.intermedia)、绯红猪笼草(N.coccinea)、库氏猪笼草(N.courtii)、劳氏猪笼 草(N.lowii)、血红猪笼草(N.sanguinea)、华丽猪笼草(N.superba)等。
2.外植体诱导材料消毒的方法：在生长季节选取生长旺盛猪笼草的3～4厘米长的的顶芽或带侧芽的茎段为外植体，在自来水下冲洗干净后，先在70％酒精中浸泡30秒，再用0.1％升汞溶液消毒15分钟，无菌水冲洗4～5次，切掉基部伤口褐化部分，接种到培养基1/2MS+6-苄基嘌呤0.5-2.0毫克/升+萘乙酸0.05-0.1毫克/升+0％-0.05％活性炭。培养基均含蔗糖30克/升，pH5.5-5.8，琼脂0.7％。培养温度(28±2)℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天。5天后再转入新的同种培养基中防止褐化，40天左右能形成不定芽。加入活性炭能减慢褐变的速度和程度，有利于出芽。
3。不定芽诱导和继代增殖：将诱导出的不定芽切割后再继代培养在相同的培养基增殖。一般40天为1个继代增殖周期。每1个继代增殖周期由1个芽可增殖形成2～5个芽。继代多次后，可不用活性炭。
4.生根培养：丛芽高约3～4厘米高时，切下接种到生根培养基1/2MS+6-苄基嘌呤0.1毫克/升+萘乙酸0.5毫克/升+0％-0.05％活性炭培养基上，根刚长出时较白，然而生出黑色的根毛。生根率可达95％以上，每个分化芽有根数4～10条。加入活性炭能防止切口褐变并增加根数。
5.试管苗移栽：当不定根长至1.5厘米以上时，在自然光照下炼苗10天，然后打开瓶塞，再炼苗2天，然后用镊子把试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由沙和珍珠岩各半混合成的基质中。注意浇水、遮荫、保温，成活率可达85％以上。移栽后约40天后可上盆栽培。
本发明所提供的猪笼草组织培养繁殖方法，具有出苗快，稳定性高，苗壮，种苗品质好、抗性强、生长良好等优势。
实施例1
1.取材：杂种猪笼草(Nepenthes x Dyeriana)的顶芽或带节茎段为外植体。
2.外植体诱导材料消毒的方法：在生长季节选取生长旺盛猪笼草的3～4厘米长的的顶芽或带侧芽的茎段为外植体，在自来水下冲洗干净后，先在70％酒精中浸泡30秒，再用0.1％升汞溶液消毒1 5分钟，无菌水冲洗4～5次，切掉基部伤口褐化部分，接种到培养基1/2MS+6-苄基嘌呤1.0毫克/升+萘乙酸0.05毫克/升+0.05％活性炭。5天后再转入新的同种培养基中防止褐化，40天左右能形成不定芽。
3。不定芽诱导和继代增殖：将诱导出的不定芽切割后再继代培养在相同的培养基增殖。一般40天为1个继代增殖周期。每1个继代增殖周期由1个芽可增殖形成3～4个芽。
4.生根培养：丛芽高约3～4厘米高时，切下接种到生根培养基1/2MS+6-苄基嘌呤0.1毫克/升+萘乙酸0.5毫克/升+0.05％活性炭培养基上，根刚长出时较白，然而生出黑色的根毛。生根率可达95％以上，每个分化芽有根数6～8条。
5.试管苗移栽：当不定根长至1.5厘米以上时，在自然光照下炼苗10天，然后打开瓶塞，再炼苗2天，然后用镊子把试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由沙和珍珠岩各半混合成的基质中。注意浇水、遮荫、保温，成活率可达95％以上。移栽后约40天后可上盆栽培。
实施例2
取猪笼草(Nepenthes misabilis)的顶芽或带节茎段为外植体。基本操作方法同实施例1一致。但其不定芽诱导和丛生芽增殖培养基为1/2MS+6-苄基嘌呤2.0毫克/升+萘乙酸0.1毫克/升+0.05％活性炭，增殖倍率为2-3。相同条件下试管苗移栽的成活率为85％。
Claims (2)
1、一种猪笼草组织培养繁殖方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
1)、外植体诱导材料消毒的方法：在生长季节选取生长旺盛猪笼草的3～4厘米长的顶芽或带侧芽的茎段为外植体，在自来水下冲洗干净后，先在70％酒精中浸泡30秒，再用0.1％升汞溶液消毒15分钟，无菌水冲洗4～5次，切掉基部伤口褐化部分，接种到培养基1/2MS+6-苄基嘌呤1.0毫克/升+萘乙酸0.05毫克/升+0.05％活性炭，5天后再转入新的同种培养基中防止褐化，40天能形成不定芽；
2)、不定芽诱导和继代增殖：将诱导出的不定芽切割后再继代培养在相同的培养基增殖，40天为1个继代增殖周期，每1个继代增殖周期由1个芽可增殖形成3～4个芽；
3)、生根培养：丛芽高3～4厘米高时，切下接种到生根培养基1/2MS+6-苄基嘌呤0.1毫克/升+萘乙酸0.5毫克/升+0.05％活性炭培养基上，根刚长出时较白，然后生出黑色的根毛，生根率可达95％，每个分化芽有根6～8条；
4)、试管苗移栽：当不定根长至1.5厘米时，在自然光照下炼苗10天，然后打开瓶塞，再炼苗2天，然后用镊子把试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由沙和珍珠岩各半混合成的基质中，注意浇水、遮荫、保温，成活率达95％，移栽后40天后上盆栽培。
2、根据权利要求1中所述的猪笼草组织培养繁殖方法，其特征在于所述的猪笼草为杂种猪笼草Nepenthes x Dyeriana、长柔猪笼草N.villosa、带翅猪笼草N.alata、中间猪笼草N.intermedia、绯红猪笼草N.coccinea、库氏猪笼草N.courtii、劳氏猪笼草N.lowii、血红猪笼草N.sanguinea、华丽猪笼草N.superba。
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