CN103755461B - 兰花组织培养的培养基及其培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种兰花组织培养的培养基，其以1/2MS培养基为基础培养基，并添加有琼脂、白砂糖、壳聚糖、黄瓜汁和活性炭。本发明所述的培养基其具有成本低、成苗率高、缓苗时间短等优点。

Description

兰花组织培养的培养基及其培养方法
技术领域
本发明涉及一种兰花组织培养的培养基，本发明还涉及一种兰花组织培养方法。
背景技术
兰花，是中国传统名花，由于具有独特的叶、花、香，因而具有极高的观赏价值。近几年，蝴蝶兰、大花蕙兰等兰花品种亦成为我国花卉市场上流行的高档室内盆栽花卉。蝴蝶兰（Phalaenopsis B1.Spp.）因其花大，花期长，花色艳丽，色泽丰富，花形美丽别致，如蝴蝶翩翩起舞，因而得名，在热带兰中有“兰花皇后”之美称，是近年来最受欢迎的兰花之一。大花蕙兰（Cymbidium）是由兰属中的大花附生种、小花垂生种以及一些地生兰经过一百多年的多代人工杂交育成的品种，其株型高大雄伟，花大而多，色彩鲜艳。
然而，传统的兰花培育往往存在繁殖速度慢等缺陷，难以满足商品化生产的需求。例如，蝴蝶兰由于植株很少发育侧芽，且种子极难萌发，导致其繁殖速度慢；而大花蕙兰由于多为杂交种，种子繁殖无法保持其品质特性，而且结实率相当低、分株能力弱，同样导致其繁殖速度慢。因此，人们多数采用组织培养的方法对兰花进行快速繁殖。但现有的培养基往往存在成苗率低、苗株长势不一致、缓苗时间长等缺陷，而且培养基中通常需要添加价格昂贵的椰子汁作为营养物，成本较高。
发明内容
基于此，有必要针对现有技术所存在的问题，提供一种兰花组织培养的培养基，其具有成本低、成苗率高、缓苗时间短，而且苗株芽体健壮、长势一致等优点。
一种兰花组织培养的培养基，其以1/2MS培养基为基础培养基，并添加有琼脂、白砂糖、壳聚糖、黄瓜汁和活性炭。
在其中一个实施例中，所述琼脂的浓度为7～10g/L，白砂糖的浓度为15～25g/L，壳聚糖的浓度为0.5～2g/L，黄瓜汁的浓度为100～300g/L，活性炭的浓度为1～3g/L。
在其中一个实施例中，所述琼脂的浓度为7～10g/L，白砂糖的浓度为15～25g/L，壳聚糖的浓度为1.6～2g/L，黄瓜汁的浓度为150～200g/L，活性炭的浓度为1～3g/L。
在其中一个实施例中，所述的黄瓜汁是由黄瓜搅榨而成的。
本发明所述的培养基在兰花组织培养中的应用。
在其中一个实施例中，本发明所述的培养基应用于兰花组织培养的壮苗培养阶段。
一种蝴蝶兰组织培养方法，包括以下步骤：
1）以成熟花梗为外植体，接种于诱导培养基中进行培养，诱导出不定芽；
2）将不定芽接种于增殖培养基中进行扩大培养，获得不定芽团；
3）将不定芽团分割成含2～3个芽的小芽团，然后接种于本发明所述的培养基中进行培养，获得蝴蝶兰苗株。
在其中一个实施例中，步骤1）至步骤3）的培养条件为：温度25±2℃，光照强度1500～2000lx，光照时间10～12小时/天。
一种大花蕙兰组织培养方法，包括以下步骤：
1）以新生腋芽为外植体，接种于诱导培养基中进行培养，诱导出原球茎；
2）将原球茎接种于增殖培养基中进行扩大培养；
3）将原球茎接种于本发明所述的培养基中进行培养，获得大花蕙兰苗株。
在其中一个实施例中，步骤1）至步骤3）的培养条件为：温度25±2℃，光照强度1500～2000lx，光照时间10～12小时/天。
在本发明所述的培养基中，壳聚糖（CTS）是一种天然的植物蛋白质生长调节剂，对兰花的生长有显著的促进作用，其能够调节兰花根、茎、叶的生长发育，显著提高叶片的叶绿素含量，提高可溶性蛋白质和可溶性糖的含量，使植株起苗快、长势旺、植株高且健壮、叶长且展开叶片多；黄瓜汁能够有效提高兰花小苗的健壮度，黄瓜汁中的黄瓜酶具有很强的生物活性，能够加快兰花的新陈代谢速度，因而具有壮苗促长的效果；活性炭能够抑制兰花褐化现象，提高成活率，促进植株生长，对提高成苗率以及提高大苗的百分比均有显著的作用；以白砂糖作为碳源，在平均叶长以及芽平均伸长高度不受影响的前提下降低了培养基的制备成本；而琼脂能够为植株提供养分、水分，并能起到透气的效用，用琼脂代替传统培养基中的卡拉胶，在平均叶长以及芽平均伸长高度不受影响的前提下降低了培养基的制备成本。
在本发明所述的培养基中，壳聚糖能使兰花苗株起苗时间短、长势旺盛，对株高和叶长有明显的促进作用；而黄瓜汁能提高兰花的新陈代谢速度，壮苗促长。同时添加壳聚糖和黄瓜汁，除了使兰花生长快、苗株健壮外，还能使兰花苗株的整齐度高、长势一致，有利于下一阶段的生根移栽。
在本发明所述的培养基中，以1/2MS培养基为基础母液，其大量元素的用量为标准MS培养基的大量元素用量的一半，在对平均叶长、芽平均伸长高度以及大芽百分比不受影响的前提下，显著降低了培养基的制备成本。
具体实施方式
实施例一：制备本发明所述兰花组织培养的培养基
按照以下表1的配方，分别称取1/2MS培养基的各成分，其中，大量元素的用量为标准MS培养基的大量元素用量的一半。
表11/2MS培养基的成分及其用量
1、配制蝴蝶兰组织培养基
按照以下表2的配方，分别称取蝴蝶兰组织培养基的各成分。
表2蝴蝶兰组织培养基成分及其用量
样品编号 基础培养基 琼脂 白砂糖 壳聚糖 黄瓜汁 活性炭
培养基1号 1/2MS培养基 7g 15g 0.5g 100g 1g
培养基2号 1/2MS培养基 8g 18g 1g 150g 2g
培养基3号 1/2MS培养基 9g 20g 1.5g 200g 2.5g
培养基4号 1/2MS培养基 10g 22g 2g 300g 3g
培养基5号 1/2MS培养基 8.5g 25g 1.6g 180g 2g
培养基6号 1/2MS培养基 8.5g 20g 1.6g 200g 2g
对照组1号 1/2MS培养基 8.5g 20g 0 200g 2g
对照组2号 1/2MS培养基 8.5g 20g 1.6g 0 2g
对照组3号 1/2MS培养基 8.5g 20g 0 0 2g
配制方法如下：
1）将壳聚糖溶解于50mL质量浓度为0.1%的乙酸溶液中，制得壳聚糖溶液；
2）将上述1/2MS培养基的各成分、琼脂、白砂糖、黄瓜汁和活性炭置于培养瓶中，加入500mL蒸馏水搅拌溶解，再加入所制得的壳聚糖溶液，然后加入蒸馏水定容至1L，搅拌均匀；得到蝴蝶兰组织培养基。
注：配制对照组1号、对照组3号的培养基时，无需配制和添加壳聚糖溶液。
2、配制大花蕙兰组织培养基
按照以下表3的配方，分别称取大花蕙兰组织培养基的各成分。
表3大花蕙兰组织培养基成分及其用量
样品编号 基础培养基 琼脂 白砂糖 壳聚糖 黄瓜汁 活性炭
培养基7号 1/2MS培养基 7g 15g 0.5g 100g 1g
培养基8号 1/2MS培养基 8g 18g 1g 150g 2g
培养基9号 1/2MS培养基 9g 20g 1.5g 200g 2.5g
培养基10号 1/2MS培养基 10g 22g 2g 300g 3g
培养基11号 1/2MS培养基 8.5g 25g 1.8g 150g 2g
培养基12号 1/2MS培养基 8.5g 25g 2g 150g 2g
对照组4号 1/2MS培养基 8.5g 25g 0g 150g 2g
对照组5号 1/2MS培养基 8.5g 25g 2g 0 2g
对照组6号 1/2MS培养基 8.5g 25g 0 0 2g
配制方法如下：
1）将壳聚糖溶解于50mL质量浓度为0.1%的乙酸溶液中，制得壳聚糖溶液；
2）将上述1/2MS培养基的各成分、琼脂、白砂糖、黄瓜汁和活性炭置于培养瓶中，加入500mL蒸馏水搅拌溶解，再加入所制得的壳聚糖溶液，然后加入蒸馏水定容至1L，搅拌均匀；得到大花蕙兰组织培养基。
注：配制对照组4号、对照组6号的培养基时，无需配制和添加壳聚糖溶液。
实施例二：蝴蝶兰组织培养
1、不定芽诱导：以健壮成熟的花梗为外植体，消毒后接种于蝴蝶兰诱导培养基（以1/2MS为基础培养基，每升1/2MS培养基中添加有5mg6-苄氨基腺嘌呤、0.5mg萘乙酸和100mL椰子汁）中，培养25～35天后，花梗诱导出不定芽；
2、将不定芽接种于蝴蝶兰增殖培养基（以MS为基础培养基，每升MS培养基中添加有8mg6-苄氨基腺嘌呤、0.5mg萘乙酸和100mL椰子汁）中进行扩大培养，培养30～35天后获得大量不定芽团；
3、用消毒的手术刀将不定芽团分割成带2～3个芽的小芽团，将小芽团接种于实施例一所制得的蝴蝶兰组织培养基中进行壮苗培养，培养28～35天后，获得达到出苗标准的蝴蝶兰苗株。
步骤1至步骤3的培养条件为：温度25±2℃，光照强度1500～2000lx，光照时间10～12小时/天。
蝴蝶兰苗株的出苗标准如下：苗株健壮、整齐度高、叶色浓绿、叶长基本在3cm以上，生长状况一致。
壮苗培养35天后，对各培养瓶中蝴蝶兰的叶长和出瓶棵数进行统计，结果如下表4所示。
表4蝴蝶兰组织培养的试验结果
表4中，y*表示培养基的综合评分，y*=(y1)×0.4+(y2)×0.6
由表4可知，与对照组3号相比，采用本发明所述的培养基对蝴蝶兰进行壮苗培养，所获得的蝴蝶兰的平均叶长和平均出瓶棵数的数值均较高，证明添加壳聚糖和黄瓜汁能够有效地壮苗促长。由对照组1号和对照组2号的数据可知，单独添加壳聚糖或黄瓜汁，对蝴蝶兰的生长发育也有一定的促进作用，而且壳聚糖的促进作用更为明显。
实施例三：大花蕙兰组织培养
1、以健壮无病虫害的新生腋芽为外植体，消毒后接种于大花蕙兰诱导培养基（以MS为基础培养基，每升MS培养基中添加有1.5mg6-苄氨基腺嘌呤、0.2mg萘乙酸和100g香蕉泥）中，培养25～30天后，诱导出原球茎；
2、将原球茎接种于大花蕙兰增殖培养基（以MS为基础培养基，每升MS培养基中添加有1.5mg6-苄氨基腺嘌呤、0.5mg萘乙酸和100g香蕉泥）中进行扩大培养，培养28～32天后获得大量原球茎；
3、将原球茎接种于实施例一所制得的大花蕙兰组织培养基中进行壮苗培养，培养28～35天后，获得达到出苗标准的大花蕙兰苗株。
步骤1至步骤3的培养条件为：温度25±2℃，光照强度1500～2000lx，光照时间10～12小时/天。
大花蕙兰苗株的出苗标准如下：苗株健壮、整齐度高、色泽鲜绿、茎秆粗壮、叶长基本在5cm以上，生长状况一致。
壮苗培养35天后，对各培养瓶中大花蕙兰的叶长和出瓶棵数进行统计，结果如下表5所示。
表5大花蕙兰组织培养的试验结果
表5中，y*表示培养基的综合评分，y*=(y1)×0.4+(y2)×0.6
由表5可知，与对照组6号相比，采用本发明所述的培养基对大花蕙兰进行壮苗培养，所获得的大花蕙兰的平均叶长和平均出瓶棵数的数值均较高，证明添加壳聚糖和黄瓜汁能够有效地壮苗促长。由对照组4号和对照组5号的数据可知，单独添加壳聚糖或黄瓜汁，对大花蕙兰的生长发育也有一定的促进作用，而且壳聚糖的促进作用更为明显。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (6)

1.一种兰花组织培养的壮苗培养基，其以1/2MS培养基为基础培养基，并添加有琼脂、白砂糖、壳聚糖、黄瓜汁和活性炭；其中，
琼脂的浓度为7～10g/L，白砂糖的浓度为15～25g/L，壳聚糖的浓度为0.5～2g/L，黄瓜汁的浓度为100～300g/L，活性炭的浓度为1～3g/L；
所述的兰花为蝴蝶兰或大花蕙兰。
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：琼脂的浓度为7～10g/L，白砂糖的浓度为15～25g/L，壳聚糖的浓度为1.6～2g/L，黄瓜汁的浓度为150～200g/L，活性炭的浓度为1～3g/L。
3.一种蝴蝶兰组织培养方法，包括以下步骤：
1)以成熟花梗为外植体，接种于诱导培养基中进行培养，诱导出不定芽；
2)将不定芽接种于增殖培养基中进行扩大培养，获得不定芽团；
3)将不定芽团分割成含2～3个芽的小芽团，然后接种于权利要求1所述的壮苗培养基中进行培养，获得蝴蝶兰苗株。
4.根据权利要求3所述的蝴蝶兰组织培养方法，其特征在于：步骤1)至步骤3)的培养条件为：温度25±2℃，光照强度1500～2000Lx，光照时间10～12小时/天。
5.一种大花蕙兰组织培养方法，包括以下步骤：
1)以新生腋芽为外植体，接种于诱导培养基中进行培养，诱导出原球茎；
2)将原球茎接种于增殖培养基中进行扩大培养；
3)将原球茎接种于权利要求1所述的壮苗培养基中进行培养，获得大花蕙兰苗株。
6.根据权利要求5所述的大花蕙兰组织培养方法，其特征在于：步骤1)至步骤3)的培养条件为：温度25±2℃，光照强度1500～2000Lx，光照时间10～12小时/天。
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文心兰茎尖诱导丛生芽高频率植株再生;叶秀仙 等;《福建农业学报》;20090430;第24卷(第2期);126-131 *
蝴蝶兰的组织培养研究;柳丽 等;《宿州教育学院学报》;20111031;第14卷(第5期);91-93 *

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